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现代菌种鉴定技术在药品控制菌检查中的比较
目的 探索药品控制菌检查中适合的菌种鉴定方法.方法 采用VITEK 2 Compact全自动微生物生化鉴定系统和3500 MicroSeq全自动微生物基因分型鉴定系统,对控制菌检查中常见的32株菌进行生化反应鉴定和16S rDNA测序鉴定,并对鉴定结果为沙门菌的菌株进行血清分型.结果 2种方法鉴定结果基本一致,部分菌株生化反应鉴定只能至属,而16S rDNA测序可以鉴定至种甚至亚种水平,沙门菌的分型需采用血清学鉴定.结论 药品控制菌检查可结合16S rDNA测序和生化鉴定,选择不同控制菌适合的鉴定方法.
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浙江省非结核分枝杆菌病原谱的分析
目的 了解浙江省非结核分枝杆菌病原谱,掌握浙江省优势流行的非结核分枝杆菌,为其有效防治提供参考依据.方法 2011年-2014年,收集全省11个地市经PNB/TCH判定为疑似非结核分枝杆菌的临床分离株442株,采用hsp65基因测序法作进一步菌种鉴定.结果 442株可疑非结核分枝杆菌中共分离出3类菌群,分别是结核分枝杆菌复合群(67株)、非结核分枝杆菌(372株)和诺卡菌(3株).其中在372株非结核分枝杆菌菌种鉴定中共分离出19种非结核分枝杆菌,前6位分别是胞内分枝杆菌、龟-脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、马赛分枝杆菌,分别占非结核分枝杆菌总数的52.15％、14.52％、10.22％、9.68％、5.38％、2.69％.结论 浙江省优势非结核分枝杆菌群以胞内分枝杆菌、龟-脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌为主,应用分子生物学可快速准确地鉴定非结核分枝杆菌菌种,为临床诊治提供依据.
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99株非结核分枝杆菌菌种鉴定和药敏结果分析
目的 了解衢州地区非结核分枝杆菌(NTM)菌种分布和耐药情况,指导临床医生合理用药.方法 采用比例法对2 364株痰培养阳性菌株进行异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFX)的耐药性检测,用PNB/TCH生长试验初步鉴定菌种.利用基因芯片对分离到的NTM作进一步菌种鉴定.结果 2 364株菌株初步鉴定为NTM的有99株,分离率为4.19％,NTM的分离率从2011年的1.89％上升到2014年的6.33％;基因芯片对NTM菌种分型,有6株是结核分枝杆菌,93株为NTM;排名前三的NTM分别是胞内分枝杆菌49株(52.69％)、鸟分枝杆菌20株(21.51％)、龟-脓肿分枝杆菌14株(15.05％);NTM对常见的6种抗结核药物有较高的耐药率,耐药率高的为异烟肼,达到了100.00％,低的卡那霉素也高达70.97％.结论 衢州地区NTM以胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌和龟-脓肿分枝杆菌为主.临床医生应根据菌种和药敏结果选择NTM的治疗方案.
关键词： 非结核分枝杆菌 PNB/TCH生长试验 菌种鉴定 基因芯片 -
99株分枝杆菌菌种鉴定和耐药检测结果分析
目的:了解仙居县肺结核病人中分枝杆菌的菌型构成及耐药情况,为临床治疗提供依据和参考.方法:采用基因芯片法对分离获得的99株分枝杆菌进行菌种鉴定,对88株结核分枝杆菌rpoB基因、katG基因及inhA基因启动子进行检测.结果:99株分枝杆菌中结核分枝杆菌复合群88株,占88.9％;非结核分枝杆菌11株,占11.1％.88株结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼单耐药和耐多药菌14株,占15.9％;均敏感74株,占84.1％.结论:仙居县肺结核患者感染菌,以结核分枝杆菌为主,非结核分枝杆菌感染占比超一成;结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼的耐药情况比较严重,应采取有效措施进行控制.
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宁波地区不同菌型分枝杆菌耐药性分析
目的:研究宁波地区引起肺结核病的分枝杆菌主要类型及耐药情况.方法:按照WHO/IUATLD《结核病耐药监测指南》对2008-2010年收集到的分枝杆菌进行菌种鉴定及异烟肼(H),利福平(R),链霉素(S)和乙胺丁醇(E)4种抗结核药物的敏感性测定.结果:研究共纳入分枝杆菌1947株,其中结核分枝杆菌1354株,占69.5％ (1354/1947);牛分枝杆菌261株,占13.4％(261/1947);非结核分枝杆菌332株,占17.0％(332/1947).总的耐药率分别为:结核分枝杆菌34.4％,(466/1354);牛分枝杆菌14.2％,(37/261);非结核分枝杆菌98.4％,(327/332).结论:宁波市肺结核患者感染菌种主要为结核分枝杆菌.非结核分枝杆菌耐药率较高,应引起足够重视.
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基因芯片法菌种鉴定技术在非结核诊断中的应用
目的 应用基因芯片法菌种鉴定技术研究丽水地区非结核分枝杆菌分布情况,探讨其在临床非结核诊断中的应用价值.方法 应用基因芯片法菌种鉴定技术检测84例改良罗氏法阳性的分枝杆菌,比较2种方法菌种鉴定的一致率,并记录具体菌型.结果 84株PNB阳性菌株菌种鉴定后获得7株结核复合群和77株非结核分枝杆菌,种群分布达8种,常见的是胞内分枝杆菌,占71.4％.传统罗氏培养方法和基因芯片法菌种鉴定共有77例检测结果一致,一致率为91.7％.鸟分枝杆菌、龟-脓肿分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、戈登分枝杆菌、马赛分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇全部耐药,胞内分枝杆菌对异烟肼、利福平、链霉素全部耐药,对乙胺丁醇耐药率为91.7％.结论 丽水地区分枝杆菌中以胞内分枝杆菌、龟-脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌为主.开展NTM菌种鉴定对鉴别诊断和有效治疗有重要意义.
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参加2014年WHO GFN EQAS实验室评估结果分析
2000年,WHO全球食源性感染网络(GFN)(前身为全球沙门菌监测网)建立了外部质量保证系统(E QAS),EQAS是由丹麦国家食品研究所(DTUFood)主办与WHO GFN合作组织的.EQAS鼓励全球实验室参与室间质控监测体系,评估实验室间病原菌鉴定、血清分型、药敏试验监测数据比对结果,以提高实验室对沙门菌等食源性致病菌的监测质量,同时也验证实验室的检测能力,实验室能力验证被看作是实验室提供持续、高质量、可靠的实验结果的重要工具.
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三株与沙门菌有共同抗原的奇异变形杆菌的检出与分析
沙门菌属多价血清和因子血清能与枸缘酸杆菌属、爱希菌属等多种细菌发生交叉凝集,引起菌种鉴定上的困难.但它与变形杆菌的交叉凝集却少见报道.我们在2001年3月从来自大竹县的一起疫情标本中分离出三株奇异变形杆菌,它们均能与沙门菌属A-F多价血清、O19因子血清发生强凝集反应.现将结果和分析报告如下:
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自动微生物检测系统(AMS)在食品检测中的应用
自动微生物检测系统(AMS)具有鉴定快速、准确、功能广泛等优点,可自动进行数据处理及作出细菌鉴定和报告结果.本文介绍了VITEK-32型自动微生物鉴定仪在食品卫生检测、菌种鉴定等方面的应用,以常规法与仪器法对细菌的鉴定进行比较,表明该仪器具有传统常规法所无法比拟的优点,并讨论了该技术在食品检测、卫生防病监测中的应用和展望.
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新生儿重症监护病房患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染分析
目的 分析新生儿重症监护病房患儿耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染情况,为制定干预措施提供依据.方法 对2016年3月—2017年3月我院新生儿重症监护病房临床送检标本中分离出的金黄色葡萄球菌165株,采用头孢西丁纸片扩散法检测出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌51株,采用聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药基因,Kirby-Bauer纸片扩散法检测耐药性,对影响因素进行单因素分析及Logistic回归分析.结果 本组51株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌均检出mecA基因(100％),SCCmec基因分型以SCCmecⅢ 型为常见(41.2％),PVL基因检出率为15.7％.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对青霉素、苯唑西林、头孢唑林和头孢西丁表现出完全耐药(100％);对红霉素、庆大霉素和氯霉素的耐药率>90％.单因素分析显示,新生儿重症监护病房患儿发生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染与体质量、住院时间、使用呼吸机、使用中央导管、使用≥3种抗生素呈显著相关性(χ2=6.79、4.26、8.09、9.12、15.88,P<0.05或0.01);Logistic回归分析显示,体质量、使用呼吸机、使用≥3种抗生素是影响其发生的独立危险因素(O R=3.987、4.332、5.698,P<0.05或0.01).结论 新生儿重症监护病房患儿发生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染以SCCmecⅢ型为常见,均携带mecA基因,部分呈现PVL基因阳性,耐药现象严重,临床应针对危险因素采用针对性预防措施,以防止新生儿重症监护病房患儿发生耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的爆发流行.
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新的玻片培养法用于真菌菌种鉴定及Etest药物敏感性测定
本文通过建立一种新的玻片培养法进行真菌菌种鉴定以调查真菌性角膜炎的菌种分布,并采用Etest法测定临床分离菌株对常用的抗真菌药物氟康唑、伊曲康唑及两性霉素B的敏感性,报告如下.
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960例患者痰培养病原菌分布及细菌耐药性分析
目的 对住院患者下呼吸道病原菌群的分布及耐药性进行观察和分析,为临床合理选择用药提供依据.方法 选取960例住院患者的痰标本作为研究资料,对其进行常规培养、菌种鉴定和药敏试验.结果 在所有送检的960例痰标本中总计分离出685株病原茵,检出率为71.4％,检出革兰阴性杆菌475株,占69.3％,革兰阳性球菌136株,占19.9％,真菌74株,占10.8％;药敏分析结果显示,革兰阴性杆菌对亚胺培南等抗茵药物的敏感度较高,革兰阳性球菌对红霉素等抗菌药物有较高的耐药性,主要病原茵对亚胺培南、万古霉素和利奈唑胺的耐药率为0;在克雷伯菌属中有62株产ESBLs,产酶率为36.9％,在大肠埃希菌中有52株产ESBLs,产酶率为65％;在金黄色葡萄球菌中有19株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,占36.5％;在凝固酶阴性葡萄球菌中有23株为耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌,占69.7％.结论 痰培养结果显示,下呼吸道感染中病原菌主要为克雷伯菌属等革兰阴性杆菌,对亚胺培南等药物较敏感,其次为金黄色葡萄球菌等革兰阳性球菌,对万古霉素、利奈唑胺等药物敏感,大肠埃希菌和凝固酶阴性葡萄球菌的耐药性较强,临床上应根据病原菌分布情况和药敏试验结果合理选择抗菌药物.
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微生物学实验室菌种使用保存与管理方法研究
快速、准确的微生物鉴定工作,对正确处理和控制公共卫生事件具有重要意义.因此,微生物检验室必须保藏一批形态、生物化学、血清学特性稳定的标准对照菌株.如果保藏方法及管理不善,菌种优良特性便会退化、丧失,甚至导致死亡,这就会影响菌种鉴定[1].另外,疾控中心微生物实验室还要承接对辖区内各医院送检菌种鉴定,检测出来的阳性菌株的保管等,要求熟练掌握微生物菌种的使用、保藏、管理技术规程.下面分述笔者在实际工作中的做法和体会.
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PCR相关技术在口腔微生物鉴定中的应用
细菌感染是口腔疾病常见的病因,准确、简便、快速鉴定病原菌无论对临床诊治还是对实验研究都有重要意义.多聚酶链反应(PCR)的理论和技术为细菌分型提供了可靠的保证.本文就PCR相关技术及其在实践中的应用作一评述.
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16S rRNA基因应用研究进展
16S rRNA分析的实验技术为微生物生态学的研究提供了新的研究方法,因此越来越多的学者利用16S rRNA进行各种实验的研究并取得了骄人的成绩.本文对16S rRNA基因的获得做一简单介绍,重点介绍16S rRNA基因的应用.16S rRNA在细菌菌种鉴定、环境保护、疾病诊断等方面都取得了很好的研究进展,不久的将来16S rRNA基因将会为人类做出更大的贡献.
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医务人员手机细菌污染原因分析
随着人们生活水平的提高和追求时尚,手机使用率也不断升高.为了解其被细菌的污染程度,遂对医务人员的手机做了细菌培养和菌种鉴定,现将结果报告如下.
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HIV/AIDS合并分枝杆菌感染的菌种分离、鉴定及耐药性研究
目的 监测并分析北京市人类免疫缺陷病毒感染者或获得性免疫缺陷综合征患者(HIV/AIDS)合并分枝杆菌感染情况、菌种谱特征及耐药性,为临床确定诊断、流行病学分析及治疗评估提供理论依据. 方法 收集HIV/AIDS疑似合并分枝杆菌感染患者标本410人份(其中血液培养标本98人份,局部标本312人份),进行分枝杆菌的菌种分离.将分离出的分枝杆菌与首都医科大学附属地坛医院选择HIV/AIDS疑似合并分枝杆菌感染患者标本以同样方法分离出的60株分枝杆菌传代培养,选择有效菌株进行菌种鉴定及耐药性分析. 结果 98人份血液标本、312人份局部标本中抗酸染色阳性分枝杆菌的阳性率分别为11.22％(11/98)、8.97％ (28/312).其中有4株为痰液和血液重复培养阳性,将其按照重复样本计算后,共分离出35株非重复性分枝杆菌.加上首都医科大学附属地坛医院HIV/AIDS疑似合并分枝杆菌感染患者中分离出的60株分枝杆菌共95株经传代培养,得到73株有效分枝杆菌菌株经鉴定与基因分型显示结核分枝杆菌(MTB) MTB株,占90.41％,结核分枝杆菌(NTM)7株占9.59％.其中7株非结核分枝杆菌经hsp65引物扩增测序后,筛选出4株鸟分枝杆菌、2株堪萨斯分枝杆菌、1株胞内分枝杆菌.66株MTB对8种抗结核药物的耐药率为:一线药物异烟肼(INH) 33.33％、利福平(RFP)19.70％、链霉素(SM)45.45％、乙胺丁醇(EMB)12.12％,总耐药率为63.64％;二线药物卷曲霉素(CPM)50.00％、氧氟沙星(OFLX) 22.73％、卡那霉素(K)24.24％、丙硫异烟胺(PTH)9.09％,总耐药率为59.09％. 结论本市就诊的HIV/AIDS患者合并分枝杆菌的感染主要以MTB感染为主,同时有9.59％的NTM感染,应引起重视;HIV/AIDS合并分枝杆菌感染患者分枝杆菌对一线药物和二线药物的耐药非常严重.
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甘肃省耐甲氧西林金黄色葡萄球菌室间质评调查分析
目的了解某省参加微生物室间质评的各医院微生物室对MRSA,MSSA的鉴定、判断及药敏检测水平,督促各实验室重视MRSA检测并能为临床提供正确的药敏报告.方法共进行了4次调查,统一发放菌种,要求鉴定菌种并采用NCCLS方法对6种抗生素做药敏试验,检验中心对结果进行统计分析,评定成绩.结果菌种鉴定符合率由75.00%上升至84.38%,MRSA判断正确率由17.65%上升至76.56%,药敏平均符合率由86.12%上升至94.94%.结论大部分实验室对MRSA的严重性还认识不足,检测方法欠缺.通过室间质评活动的开展,各参评实验室MRSA检测水平明显提高.
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PCR-SSCP分支杆菌菌种初步鉴定方法的建立及其应用
目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的分支杆菌菌种鉴定方法.方法:通过聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)-单链构象多态性(Single-strnde d Conformation Polymorphism,SSCP)方法分析分支杆菌16S rRNA,根据其电泳图谱与标准株的相似性进行菌种初步鉴定.结果:29种分支杆菌标准株中,除结核分支杆菌、牛结核分支杆菌和卡介苗之间及堪萨斯分支杆菌和胃分支杆菌之间SSCP电泳图谱相似外,其余各种分支杆之间电泳图谱均有显著差异.70株BACTEC TB460初步鉴定为结核分支杆菌复合群的临床分离株中,55株显示与结核分支杆菌SSCP电泳图谱相似,15例(21.4%)显示出与结核分支杆菌完全不同的电泳图谱;10株经传统方法鉴定为结核分支杆菌的分离株中,仅1株显示出与结核分支杆菌不同的电泳图谱.结论:PCR-SSCP有可能成为一种快速、有效的分支杆菌菌种初步鉴定方法.
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基因芯片技术在分支杆菌研究中的应用
结核病一直是发展中国家较严重的传染病,1985年以来艾滋病的流行、结核感染者的涌入和贫困等原因使美国等欧美发达国家结核病发病率呈回升趋势.目前全世界有结核病人约2000万,每年新增结核病人800～1000万,每年死亡人数约300万.1993年世界卫生组织(WHO)史无前例地宣布处于"全球结核病紧急状态",1998年又重申遏制结核病的行动刻不容缓.我国的结核病疫情和耐药情况也相当严重,是全球22个结核病高负担国家之一,结核病人数位居世界第二,仅次于印度.
