首页 > 文献资料
-
不同冻贮载体在人类微量精子冷冻保存技术中的应用效果
目的:评估不同冻贮载体在人类微量精子的冷冻保存技术中的应用效果.方法:在Pubmed、ScienceDirect、SpringerLink、Willey Online Library、CNKI、维普数据库、万方数据库检索2016年12月之前发表的、有关人类微量精子冷冻保存技术的文献,筛选纳入的文献均为非随机试验性研究.根据纽卡斯尔-渥太华量表(NOS)对所纳入的研究文献进行方法学质量评估和数据提取.结果:纳入了31个研究,包含了13种不同的冻贮载体,各研究的精子回收率59%~100%,平均存活率73.7%,有9个研究将解冻精子用于卵胞浆内单精子注射(ICSI)受精,受精率18%~71%,已报道5例采用冻融微量精子ICSI受精后行胚胎移植并获得妊娠,其中3例获得健康活产婴儿.结论:目前仍没有一种较为理想的冻贮载体用于微量精子冷冻保存,还需要多中心临床试验去评估这些冻贮载体的有效性.
-
辛伐他汀改善小鼠卵巢组织自体移植的效果
目的:探索辛伐他汀在小鼠卵巢组织自体移植中的效果和机制.方法:选择6～8周雌性ICR小鼠80只.10只小鼠制备新鲜卵巢组织(新鲜卵巢组),另取10只小鼠切除双侧卵巢组织,玻璃化冷冻(冷冻-解冻卵巢组).余下的60只小鼠切除双侧卵巢玻璃化冷冻-解冻后自体移植至背部肌肉,随机分成2组(各30只),移植后第1天开始分别以生理盐水(生理盐水组)和辛伐他汀(5 mg/kg,辛伐他汀组)灌胃至移植后第7天.2组分别在移植后第3,7,21天,每组每时间点各处死5只鼠(共处死30只),回收卵巢组织和血清.光学显微镜下观察HE染色的卵巢组织,免疫组织化学检测细胞核增殖性抗原ki67和CD34,原位末端标记法(Tunel法)计数Tunel阳性细胞数,血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)浓度,2组分别在移植后第3,7天,每组每个时间点各处死5只鼠(共处死20只)测定卵巢组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量.本实验中移植术后小鼠死亡4只,灌胃死亡2只,终剩余4只脱颈处死按动物伦理处理尸体.结果:冷冻-解冻卵巢组比新鲜卵巢组的窦卵泡数减少,Tunel阳性细胞数增加(均P<0.05).新鲜卵巢组织和冷冻-解冻卵巢组织均可见ki67表达.移植后第3,7天辛伐他汀处理组比生理盐水组原始卵泡数多、凋亡细胞数少(均P<0.05).移植后第21天卵巢组织生长良好,2组都可见窦卵泡,辛伐他汀组原始卵泡数和窦卵泡数比生理盐水组多(均P<0.05).移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织血管数比生理盐水组多(均P<0.05).辛伐他汀组在移植后第21天血清E2高于生理盐水组(P<0.05);血清FSH水平在第21天比生理盐水组低(P<0.05).移植后第3,7天,辛伐他汀组卵巢组织MDA低于生理盐水组,SOD高于生理盐水组(均P<0.05).结论:辛伐他汀通过抗氧化、促血管再生改善小鼠卵巢组织自体移植的效果.
-
激素替代冻融胚胎移植第6天血清孕酮与临床结局的关系
目的:探讨在激素替代冻融胚胎移植(FET)周期中,移植第6天血清孕酮与FET临床结局的关系.方法:回顾性分析行激素替代FET 261个周期的临床资料.依据移植第6天血清孕酮水平分组,A组(孕酮＜20 μg/L),B组(20 μg/L≤孕酮＜30 μg/L),C组(孕酮≥30μg/L),比较各组临床特征、妊娠率及流产率的差异.同时根据FET临床结局分为D组:宫内活胎组,E组:妊娠结局不良组,F组:未妊娠组,比较各组移植第6天血清雌激素、孕激素水平的差异.结果:C组妊娠率(50％)明显高于B组妊娠率(28.5％),B组妊娠率高于A组妊娠率(11.1％),差异有统计学意义(P＜0.05);A组流产率(60％)高于C组(18％),差异有统计学意义(P＜0.05);移植第6天血清孕酮水平D组和E组高于F组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:在激素替代FET周期中移植第6天血清孕酮水平对FET临床结局有一定的预测性,血清孕酮值越高妊娠结局越好,且流产率更低.
-
海藻糖用于玻璃化冷冻卵母细胞的研究
海藻糖的发现为低温保存卵母细胞提供可利用的价值,其作为冷冻保护剂对卵母细胞进行玻璃化冷冻成为新的冷冻技术方法.海藻糖的作用原理包括:"水替代"假说、"玻璃态"假说、"优先排阻"假说.在高温、高寒、高渗透压及干燥、脱水、冷冻时等恶劣环境条件下,海藻糖在细胞表面能形成独特的保护膜,有效地保护蛋白质分子不变性失活,从而维持生命体的生命过程和生物特征.目前海藻糖已用于多种生物细胞研究,如:红细胞、血小板及生殖细胞等的离体长期保存,且均表现出独特的功能.
-
自精保存在生殖保险中的应用及研究进展
随着人类辅助生殖技术的发展,生殖保险越来越受到重视.由于卵子冷冻还存在一些问题,所以目前生殖保险仍以男性自身的精子保存(自精保存)为主.精子在冷冻过程中会受到一定的损伤,其损伤机制是多方面的.而各种冷冻方法对精子存活率和活力的影响并无明显差异.自精保存所需的精子来源有多种途径,首选为手淫法取精.自精保存适用的对象非常广泛,所有因治疗癌症而存在不育风险的男性患者,都应冷冻保存精子,但是自精保存仍存在一些问题有待解决.综述自精保存在生殖保险中的应用及研究进展.
-
人卵巢组织玻璃化冷冻与移植的研究进展
人卵巢组织冷冻对于保存生育力有重要作用.现常用冷冻方法包括玻璃化冷冻和程序化冷冻.大量研究表明,前者冷冻效果优于后者.迄今为止,玻璃化冷冻仍缺少标准化的程序.作为恢复癌症患者生殖内分泌功能的重要手段,卵巢组织移植近年得到发展,但仍存在许多问题有待进一步研究.综述玻璃化冷冻效果的影响因素、减少缺血再灌注损伤方法、移植后卵巢功能恢复所需时间及生存期限的影响因素.
-
人类卵子冷冻技术的进展
人类卵子冷冻作为生育力保存的一种方式，在辅助生殖技术（ART）中起着关键的作用。由于伦理及研究条件的限制，卵子冷冻技术一直发展缓慢。近年，随着冻融技术及胞浆内单精子注射技术（ICSI）的发展，卵子冷冻已广泛应用于临床。玻璃化冷冻因其简单、细胞损伤小、复苏存活率高正在逐步取代慢速冷冻法，被大多数生殖医学中心所采纳。但卵子冷冻保存过程中仍存在交叉感染的风险及卵子冷冻损伤，液氮紫外线消毒、蒸气氮存储系统或封闭载杆可以防止交叉感染，相对于慢速冷冻法，玻璃化冷冻在减少卵子冷冻损伤方面更有优势。
-
天然抗氧化剂在人精液冷冻保存中的应用
精液的冷冻保存是辅助生殖技术的基础，但精液冻融过程会产生过多的活性氧自由基（ROS），破坏精子的生理结构，使其质量下降，造成受精能力下降。目前，有些研究开始关注抗氧化剂在精液冷冻保存过程中的保护作用。其中一些来源于植物的天然抗氧化剂（如白藜芦醇、槲皮苷、染料木黄酮等），这些物质的来源广泛，抗氧化能力非常高，而且毒性较低，可以有效抑制精子冻融后ROS的产生，减少精子在冷冻过程中受到的氧化损伤，从而保护精子的活力和遗传稳定性，可以作为冷冻保护剂的添加成份用于改良精子的冷冻保存。
-
雄性生殖细胞冷冻保存研究进展
随着单精子及精子细胞卵胞浆内显微受精技术的发展，雄性生殖细胞冷冻保存技术已成为辅助生殖技术的重要内容，为男性因素不育患者的临床助孕提供了物质保障基础。目前，雄性生殖细胞冷冻方法包括程序化冷冻和玻璃化冷冻；冷冻保护剂可有效降低细胞的冷冻损伤，根据其特性分为渗透性保护剂和非渗透性保护剂两大类；冷冻载体中冷冻环、冷冻叶片等应用较广泛。雄性生殖细胞冷冻的效果与冷冻方法、冷冻保护剂和冷冻载体等密切相关。
-
地方性氟中毒病区儿童血液生化指标调查与分析
为了进一步了解和探讨环境过量氟对机体血液生化指标的影响及其在地方性氟中毒早期诊断的应用价值,对氟中毒病区儿童进行了血液生化分析.选择辽宁省建平县三家乡W村和小塘乡D村学龄儿童,并设新宾县N村同龄儿童作对照组.采样人群为对照组35人,10～13岁,尿氟＜3.0 mg/L,水氟＜1.0 mg/L;轻病区组36人,10～13岁,尿氟3.43 mg/L,水氟1.5 mg/L;重病区组35人,10～13岁,尿氟4.7 mg/L,水氟2.24 mg/L.调查儿童晨起空腹,静脉采血,静置后分离血清,低温保存待测.应用进口试剂,美国贝克曼700型全自动生化分析仪测定.碱性磷酸酶(AKP)、谷丙转氨酸(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、γ-羟丁酸脱氢酶(HBDH).
-
肝细胞的低温保存及应用研究进展
随着生物人工肝和肝细胞移植研究的开展,对肝细胞的需求不断增加,迫切需要有效的肝细胞长期保存方法以促进其在临床上的应用.低温保存是目前保存肝细胞的重要方法,其影响因素较多,主要有低温保存肝细胞的形式冻存液的组成、降温、复温速度,复苏肝细胞的功能检测及应用范围等.本文对国内外该方面的新进展进行综述.
-
微流控芯片上细胞样本低温保存的研究进展
随着分子、细胞以及微组织、器官模型等逐渐转移到微流控芯片上,微流控芯片的平台性价值在生物医学领域日益凸显.发展芯片上细胞样本的低温保存技术不仅是实现上述价值的重要条件,也是对传统细胞样本低温保存的有益创新.对微流控芯片上细胞样本的低温保存技术进行了综述,包括慢速冷冻保存及其升降温过程的控制、超快速降温玻璃化保存的理论分析与验证,并在此基础上进一步介绍了芯片上细胞样本的常温保存,后对该领域进展中存在的动力与需要解决的问题作了简要分析与展望,以期为相关研究提供参考.
-
白藜芦醇在大鼠离体心脏低温保存中的保护作用及其机制
目的:探讨白藜芦醇(RES)对长时程低温保存的大鼠供心是否具有保护作用及其机制是否通过调节Sirt-1的表达.方法:SD大鼠随机分为以下7组,包括空白对照组(control),单纯9h低温保存组(9 h),RES组(3、10、30μmol/L RES组),尼克酰胺组(NAM:保存液中加入Sirt-1抑制剂尼克酰胺NAM 40 μmol/L),白藜芦醇+尼克酰胺组(RES+ NAM:保存液中加入30 μmol/L RES和40 μmol/L NAM).采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,HE染色观察心肌细胞在各组中的形态学变化;用Real-TimePCR和Western blot法分别检测Sirt-1基因和蛋白在各组中的表达.结果:①与空白对照组相比,9h组心肌细胞损伤明显加重,Sirt-1基因和蛋白表达均明显下调(P＜0.01);②与9h组相比,3、10、30 μmol/L RES组心肌细胞损伤逐渐减轻,Sirt-1表达水平呈剂量依赖性升高(P＜0.05);③RES的心肌细胞保护作用可被Sirt-1抑制剂NAM所取消.结论:RES能够改善长时程低温保存引起的心肌细胞损伤,这种保护作用可能通过上调Sirt-1的表达来实现.
-
二氮嗪对大鼠供心心肌线粒体结构及通透性的影响
目的:探讨线粒体ATP敏感性钾离子通道(mitoKATPC)开放剂二氮嗪(DE)对离体大鼠供心长时程低温保存时线粒体超微结构及线粒体渗透性转换孔(MFIP)开放的影响.方法:利用Langendorff离体鼠心灌注法,观察供心在4℃含不同浓度DE(15、30、45 μmol/L)的Celsior保存液中保存9 h后,复灌期心脏作功量(RPP)变化情况.比色法测定MPTP开放情况;透射电子显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构的变化.结果:①Celsior保存液中加入30μmol/L的DE对促进长时程低温保存后供心收缩功能的恢复、减轻心肌细胞线粒体超微结构损伤和抑制MFTP开放的作用显著.②DE的上述作用可分别被mitoKTP特异性阻断剂5-羟基葵酸盐(5-HD)及MPTP开放剂苍术苷(Atr)所取消.结论:DE可通过抑制MPTP开放而减轻由长时程低温保存导致的大鼠供心心肌线粒体超微结构的损伤.
-
人骨髓细胞长期低温保存的研究
细胞保存有重要价值,骨髓细胞保存的价值主要在于为骨髓细胞移植提供可靠保证.传统的骨髓细胞低温保存是采用二甲基亚砜为保护剂,以慢速率“二步”法降温至-80℃, 直接投入液氮.理论上讲,细胞在这种温度下,一切代谢停止,可以永远保存.本文对20例人骨髓细胞持续低温保存15年的情况进行分析.
-
活血化瘀注射液Ⅰ号对大鼠肾脏低温保存时超微结构及移植肾功能的影响
目的观察活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-1)是否具有延长肾脏低温保存时间、减轻肾脏损伤的作用.方法将HHI-I加入大鼠肾脏的保存液(乳酸钠林格液)中作为HHI-I组,单纯乳酸钠林格液作为对照组,分别低温保存大鼠肾脏.观察保存的各个时点肾脏超微结构的变化;将在两种不同保存液中保存达3 h后进行大鼠肾脏移植,观察移植后24 h肾功能的变化.结果大鼠肾脏低温保存24 h HHI-I组未出现明显的器质性损伤;对照组于保存8h出现明显的器质性损伤.分别于保存液中保存3 h后进行大鼠肾脏移植,HHI-I组术后24 h血肌酐明显低于对照组(P<0.01).结论 HHI-I可以减轻单纯低温保存时肾脏超微结构的改变、延长移植物低温保存的时间、改善大鼠肾脏移植效果、促进移植肾功能尽快恢复.
关键词： 活血化瘀注射液Ⅰ号(HHI-1) 低温保存 肾脏移植 肾功能 -
深低温冻存胃癌样本的核酸与蛋白质质量控制研究
目的：探索上海市瑞金医院低温冻存0~10年胃癌样本的核酸与蛋白质质量。方法：随机抽取2003年至2014年间库存手术切除胃癌标本24对（共48份）。1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA与RNA纯度及完整性，同时增加了RIN值评估法检测RNA完整性；BCA法检测样本蛋白质浓度，考马斯亮蓝法测定蛋白质分子完整性。结果：将组织标本按冻存年限分成四组（<2年、3～5年、6～8年和>9年），各组之间DNA完整性差异无统计学意义（P>0.05），正常胃组织的DNA降解程度比胃癌组织高（P=0.023）；四组之间的RIN值检测显示，冻存6年以上组的RIN值有明显下降（P=0.018）；各组间的蛋白质浓度无显著性差异，考马斯亮蓝法测定蛋白质分子条带完整性存在显著性差异。冻存>9年组仅出现少量低分子量条带（平均36.5 kD），冻存6～8年组尚有中等分子量（平均65.63 kD）条带，冻存3～5年组有高分子量（平均127.5 kD）条带，冻存短于2年组仍可见大分子量（平均160 kD）条带。结论：长期低温冻存对DNA影响小，超过5年组RNA和大分子量蛋白质降解较多，但中小分子量蛋白质保存完好。
-
卡瓦胡椒对c-DNA已表达的细胞色素P450酶及低温贮存的人肝细胞的影响
有研究显示卡瓦胡椒Piper methysticum Forster f.中的几种化合物对P450酶显示强抑制作用,并可能通过其活性代谢物的生成产生致死性肝毒性.作者研究了该植物根乙醇提取物及3种卡瓦内酯类成分醉人素(methysticin)、去甲氧基麻醉椒素(desmethoxyyangonin)和麻醉椒素(yangonin)体外对在杆状病毒/昆虫细胞系(重组CYPs)和低温保存的人肝细胞中已表达的P450酶活性的抑制作用.
-
液氮保存的同种主动脉瓣叶内皮细胞活性的变化
目的:研究液氮不同保存时间对人类同种主动脉瓣叶内皮细胞活性的影响,探讨同种瓣的有效使用期限.方法:取健康成年男性、脑死亡6 h以内同种带瓣主动脉管道,灭菌、程控降温至-60℃后液氮保存.将主动脉瓣叶随机分为10组存储不同时间.应用流式细胞仪检测上述标本的内皮细胞活性,比较各组之间的差异.结果:新鲜冷冻组和液氮保存2年以内的瓣叶内皮细胞存活率与新鲜组无明显差异,而液氮保存3～8年的同种主动脉瓣叶内皮细胞死亡率明显增加,差别有统计学意义(P＜0.05).结论:液氮保存3年以上的同种带瓣主动脉内皮细胞能否应用于临床值得商榷.
-
OHSS高危胚胎移植与全胚胎冷冻移植不孕患者结局分析
目的:分析比较存在卵巢过度刺激综合征(OHSS)高危因素患者进行新鲜周期体外受精-胚胎移植(IVF-ET),以及日期为预防OHSS的发生进行全胚胎冷冻,后进行解冻胚胎移植2种治疗方法的效果.方法:选择2005年1月-2008年4月在本中心进行IVF-ET治疗的患者.OHSS高危人群但行新鲜周期胚胎移植患者239例,为A组;同期行全胚胎冷冻,2～3个周期后行胚胎解冻移植的患者164例,解冻周期203例次,为B组.对2组患者超促排卵(COH)情况、获卵数、冷冻胚胎数、新鲜周期以及解冻周期临床妊娠率等情况进行比较.结果:A组促卵泡生成素(Gn)始量以及Gn总量高于B组(P＜0.01);A组注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)日雌激素(E2)水平、发育卵泡数、获卵数、冷冻胚胎数低于B组(P＜0.01);2组患者的年龄、COH时间、OHSS的发生率以及临床妊娠率差异无统计学意义(P＞0.05).结论:在IVF-ET时,全胚胎冷冻然后行胚胎解冻移植,与新鲜周期移植比较并未影响不孕症患者的治疗结局.
