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富血小板纤维蛋白对兔骨髓间充质干细胞成软骨分化的影响
目的:观察自体富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对体外培养的兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨分化的影响.方法:兔心脏采血制备PRF,电镜观察其超微结构;分离培养兔BMSCs,取第3代细胞用于实验,分为PRF组、阳性对照组、空白对照组.诱导培养21d后,对三组细胞分别进行形态学观察,成软骨鉴定染色(甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组化染色),软骨相关基因表达检测(Ⅱ型胶原、Aggrecan、SOX9).结果:PRF组和阳性对照组中BMSCs经诱导后,细胞由长梭形变为三角形、多角形、圆形;甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组化染色均为阳性;Ⅱ型胶原、Aggrecan、SOX9基因表达水平均较高,两组比较无统计学差异,空白对照组未见相关分化现象.结论:PRF在体外可促进兔BMSCs成软骨分化,可作为自体生物材料,在构建组织工程软骨中发挥更好的作用.
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自体ADSCs复合PRF修复家兔耳软骨缺损的实验研究
目的:将未诱导的自体脂肪干细胞(ADSCs)与富血小板纤维蛋白(PRF)复合,作为一种全新的软骨修复材料,探讨其对家兔耳软骨全层缺损修复的可行性.方法:取家兔10只,于每只家兔耳部做4处软骨全层缺损,随机分为A、B、C、D组,A组,作为空白对照；B组植入自体ADSCs；C组植入自体PRF；D组植入自体ADSCs与PRF的复合物.分别于术后1月、2月、3月取材,进行大体及HE染色观察,并使用IPP6.0软件对软骨生成量进行半定量分析.结果:HE染色显示,3月后,A组几乎无新生软骨生成,B、C、D三组软骨生成量依次增多,D组尤为明显.IPP6.0统计结果显示,移植物植入3月后,A组软骨缺损修复率为(1.68±0.17)％,B组为(15.4±0.91.)％,C组为(32.0±2.76)％,D组为(85.77±4.88)％.各组间有显著统计学差异,与HE染色结果相符.结论:未诱导的自体ADSC s复合自体PRF作为一种全新的软骨修复材料,可以有效的修复家兔耳软骨全层缺损,具有潜在的临床应用价值.
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非诱导脂肪干细胞膜片复合PRF修复兔髁状突软骨缺损
目的:探索非诱导ADSCs膜片/PRF复合植入物修复兔子下颌骨髁状突软骨缺损的可行性及效果.方法:选取36只3月龄新西兰雄性大白兔,随机分为3个组即ADSCs膜片/PRF组、PRF组、空白对照组,在3％戊巴比妥钠麻醉下解剖暴露出髁状突关节面并用裂钻分别在双侧髁状突软骨面上制备一3 mm直径、3mm深的髁突表面软骨缺损区,按实验设计每个分组分别填入相应的植入物.分别在术后4周、8周、12周处死相应时间点的动物采集髁突标本,标本进行大体及组织学检查比较.结果:术后12周时空白对照组的下颌髁状突软骨缺损未能修复,PRF组有少量不规则、不连续的软骨形成,ADSCs膜片/PRF组的修复效果较好,表面软骨接近正常纤维软骨,与周围软骨连续性较好.组织学染色也显示ADSCs膜片/PRF组优于PRF组和空白对照组.结论:证明了ADSCs膜片/PRF复合物修复髁状突软骨缺损的可行性.
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下颌水平阻生智齿拔除后相邻第二磨牙远中牙周情况的早期改变
目的 观察下颌水平阻生智齿拔除以后,拔牙创口在术后采用不同的处理方法,对相邻第二磨牙远中牙周的改变情况.方法 选择2016年3月—2018年1月在蚌埠医学院第二附属医院口腔科就诊的下颌第三磨牙水平埋伏阻生的患者80例作为研究对象,随机分为对照组和实验组两组,每组各50例.对照组拔牙后行常规处理填塞明胶海绵,实验组行富血小板纤维蛋白(PRF)填塞拔牙创口.术后随访1个月、3个月和6个月复诊,观察第二磨牙远中牙周改变情况.结果 拔牙后1个月,实验组拔牙创口愈合优于对照组,观察组随访3个月和6个月后第二磨牙远中面牙周探诊深度情况比对照组优,差异有统计学意义(P<0.05).第二磨牙远中的牙槽嵴高度的降低(附着丧失)同样优于对照组,但差异没有统计学意义(P>0.05).结论 富血小板纤维蛋白在下颌水平阻生智齿拔除后拔牙创口的愈合以及下颌第二磨牙远中牙周组织修复再生有着很好的促进作用.
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富血小板纤维蛋白对兔下颌骨牵引成骨区骨形态发生蛋白-4表达的影响
目的:探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对牵引成骨区骨形态发生蛋白-4(BMP-4)表达的影响.方法:25只大耳白兔随机分2组,分别行双侧下颌骨皮质骨切开术,一侧下颌骨牵引间隙放置PRF膜作为实验组,对侧作为对照组,分别于稳定期第3、7、14、21、28天处死一组动物,切取牵引间隙处骨痂行H-E染色和BMP-4免疫组织化学显色,细胞图像分析仪测量牵引间隙处骨痂BMP-4表达情况.结果:下颌牵引延长后牵引间隙均有新骨形成,免疫组织化学显色显示BMP-4主要定位于成骨细胞的细胞质中.实验组在稳定期3、7、14、21d BMP-4表达的阳性细胞率和阳性面积百分比均显著高于对照组,稳定期28d BMP-4表达的阳性细胞率和阳性面积百分比与对照组比较差异均无统计学意义.结论:PRF能促进兔下颌骨牵引成骨区新骨的生成,BMP-4可能在牵引成骨过程中调控组织细胞应力信号传递,发挥成骨作用.
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富血小板纤维蛋白促进兔下颌骨牵引成骨
目的:通过建立兔下颌骨牵引成骨模型,探讨富血小板纤维蛋白(PRF)在牵引成骨中的作用,为临床研究与应用提供参考依据.方法:在成年白兔的一侧下颌骨前部行骨切开术,用牵引器延长一侧下颌骨4 mm,牵引间隙放置PRF膜为实验组;另一侧下颌骨行骨切开并安置牵引器,作为对照组,分别于稳定期的第3、7、14、28天处死动物,取牵引区新生骨痂,行大体标本观察、X线影像观察、HE切片观察,比较2组的成骨效果,并进行骨计量学分析,计算新生骨小梁面积百分比.结果:新生骨小梁面积在不同时间点的实验组均显著大于对照组.组织学观察表明,不同时间点实验组骨成熟程度均高于对照组.结论:PRF在兔下颌骨牵引成骨中具有较显著的促进成骨的作用.
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富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究
目的:研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响.方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化.实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组.茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的mRNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达.结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准.茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异.碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义.qRT-PCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的mRNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的mRNA表达显著降低(P<0.05).此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子CyclinD1及β-catenin的mRNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05).结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化.
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富血小板纤维蛋白对人牙槽骨成骨细胞增殖和分化的影响
目的：研究富血小板纤维蛋白（plate-rich fibrin, PRF）体外对人牙槽骨成骨细胞(human alveolar osteoblasts, HAOB)增殖分化的影响，探讨HAOB与PRF构建临床组织工程骨的可能性。方法：收集临床拔牙过程中的牙槽骨，采用改良酶消化法体外分离培养HAOB，根据成骨细胞形态学特征及成骨特性对所培养出的细胞进行鉴定，后加入志愿者的PRF分组培养；而后在不同的实验时间点进行细胞增殖CCK-8检测、碱性磷酸酶(ALP)定性检测、钙结节茜素红染色以及成骨相关基因RT-PCR检测。结果：HAOB具有典型的成骨细胞的形态；随时间的延长，细胞数目明显增加（P<0.05），实验组（PRF组）细胞数量明显高于对照组。实验组ALP染色较对照组颜色更深，ALP活性相对较高。经茜素红染色，实验组镜下观察形成的钙结节数量较对照组多。在第7和11天发现实验组成骨相关基因的表达量均高于对照组。结论：采用改良酶消化法分离培养的HAOB具有典型的成骨细胞生物学特性，且成分较为单一；PRF体外具有促进HAOB增殖分化的能力。
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富血小板纤维蛋白对牙髓细胞增殖与分化的影响
目的：评估牙髓细胞在富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin, PRF）存在下的体外增殖及成骨分化的能力，为PRF作为支架材料、牙髓细胞作为种子细胞构建组织工程骨，进行前期研究。方法：3月龄比格犬拔除乳磨牙获得乳牙牙髓细胞；恒牙牙髓细胞从16月龄成年比格犬磨牙获得。静脉取血离心10 min获得PRF。实验分4组：对照组（普通培养基不加入PRF）；实验组A（普通培养基加入PRF）；实验组B(成骨诱导培养基不加入PRF)；实验组C（成骨诱导培养基加入PRF）。分别于1、4、7和11d测定细胞数量、MTT值、半定量碱性磷酸酶值、成骨相关基因Q-PCR值，并于21d测定钙结节吸光度值。结果：PRF是一种可以促进牙髓细胞增殖的，无毒性作用的纤维网状支架结构；细胞水平上PRF促进了两种细胞的成骨分化：钙结节以及碱性磷酸酶半定量数值都明显上调（P<0.05）；基因水平上，4个时间点成骨相关基因的表达量都显著增加（P<0.05），且乳牙牙髓细胞的表现均优于恒牙牙髓细胞。结论：可使用PRF和牙髓细胞复合构建组织工程骨。
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PRF及所含三因子对大鼠脂肪干细胞迁移的影响
目的:研究富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)及所含三因子TGF-β1、PDGF-AB、VEGF对培养的大鼠脂肪干细胞(adipose tissue-derived stem cell,ADSCs)迁移的影响,并初步探讨其机制.方法:无菌切除SD大鼠腹股沟处的白色脂肪组织,采用酶消化法原代培养SD大鼠ADSCs,多向诱导分化法鉴定ADSCs,一次离心法提取制备PRF膜.采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR分析迁移相关因子MT1-MMP和MMP-2 mRNA的表达情况.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:Transwell实验显示,PRF组的迁移细胞数显著高于阴性对照组(P＜0.05)和抑制剂组(P＜0.05);不同浓度的TGFβ1、PDGF-AB、VEGF组的组内迁移细胞数的差异显著(P＜0.05).经PCR检测,PRF组细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组的表达显著上调(P＜0.05),TGF-β1、PDGF-AB和VEGF的细胞基因MMP2和MT1-MMP较对照组表达均上调,组间差异显著(P,＜0.05).结论:PRF促进了ADSCs的迁移,PRF所分泌的三因子均可不同程度地促进ADSCs的迁移,并呈一定的量-效关系,其迁移能力的增加可能与MT1-MMP和MMP-2 mRNA的上调密切相关.
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富血小板纤维蛋白对体外培养的成骨细胞生物学特性的影响
目的:探讨富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对成骨细胞生物学特性的影响.方法:体外培养成骨细胞MG63,实验组采用PRF,对照组为正常高糖DMEM培养液.以MTT法检测细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)染色法检测ALP活性,免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原、骨保护素(OPG)及其配体(RANKL)的表达.采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:PRF能够促进细胞增殖、ALP分泌、Ⅰ型胶原和骨保护素的表达,对骨保护素配体的表达影响不明显.结论:PRF能够促进成骨细胞增殖、分化及骨保护素的表达,PRF可能通过对骨保护素及其配体的调节,参与骨的重建过程.
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富血小板纤维蛋白治疗Ⅱ度根分叉病变的效果评价
目的:观察富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)联合Bio-oss治疗Ⅱ度根分叉病变的临床效果.方法:选取临床Ⅱ度根分叉病变的下颌第一磨牙患者30例,经过牙周基础治疗后,随机分为实验组和对照组(各15例).实验组采用引导牙周组织再生术,术中PRF联合Bio-oss植入骨缺损区并覆盖PRF膜;对照组仅采用单纯牙周翻瓣术.术后6个月回访,通过临床牙周指数检查及锥形束CT(CBCT)检查评价临床疗效.采用SPSS2.0软件包进行统计学分析.结果:2组患者术后牙周探诊深度(probing depth,PD)、临床附着丧失(clinical attachment loss,CAL)、根分叉水平探入深度(horizontal probing depth,HPD)均较术前显著改善(P＜0.05),且2组间差异具有统计学意义(P＜0.05);实验组术后根分叉区骨增量与对照组之间有显著差异(P＜0.05).结论:PRF联合Bio-oss明显促进牙周Ⅱ度根分叉病变区成骨,改善牙周状况,临床效果显著.
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富血小板纤维蛋白(PRF)联合自体骨在拔牙同期自体牙即刻移植术中的临床疗效观察
目的:探讨富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)联合自体骨在拔牙同期自体牙即刻移植中充填牙周骨缺损的临床可行性.方法:将2014年1月-2015年12月就诊行拔牙同期自体牙即刻移植的130例患者,按患者意愿及就诊顺序随机分为A、B和C3组,在移植牙根周骨质缺损区分别填塞不同的移植材料.A组60例采用PRF联合自体骨植入;B组35例单纯植入PRF;C组35例单纯植入自体骨,随访12个月,对术后移植牙松动度和影像学表现进行评价.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:随访12个月,A组成功率为80％,有效率为96.4％;B组成功率为51.4％,有效率为80％;C组成功率为57.1％,有效率为77.1％;经x2检验,A组与B组、C组间的成功率、有效率差异均有统计学意义(P＜0.05),B组与C组的成功率、有效率差异无统计学意义(P＞O.05).结论:在自体牙移植中植入PRF联合自体骨可促进牙周成骨,有利于移植牙的稳固.
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富血小板纤维蛋白生物学特性鉴定及其对脂肪干细胞增殖和分化的影响
目的·探讨富血小板纤维蛋白(PRF)的生物学特性及其对脂肪干细胞(ADSCs)增殖和分化的影响.方法·取比格犬静脉血制备PRF膜,进行大体、组织学和超微结构观察.比格犬腹股沟处提取、分离培养ADSCs并进行多向分化潜能鉴定.体外将PRF作用于自体ADSCs,分为PRF组和对照组.CCK-8检测细胞增殖.对2组细胞分别进行成骨诱导,于诱导前及诱导后第4、7日,采用RT-PCR检测成骨相关基因骨钙素(OCN)、骨桥素(OPN)和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达;诱导7 d后进行碱性磷酸酶(ALP)活性检测.结果·PRF为乳白色的纤维蛋白凝胶,具有弹性和韧性;胶原纤维构成疏松多孔的三维立体网络结构,大量的白细胞、血小板网络其间.PRF组细胞增殖活性显著高于对照组.成骨诱导后,PRF组OCN、OPN、Col-ⅠmRNA表达均显著升高,ALP活性表达增强.结论·PRF是具有三维网络结构的纤维蛋白,其富含的血小板可以缓慢释放生长因子;PRF对ADSCs的增殖和成骨分化具有促进作用.
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富血小板纤维蛋白超微结构观察及意义
目的 探讨富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)形态学超微结构及意义.方法 选择10例健康志愿者,抽取静脉血制备PRF,对PRF分别行光学显微镜、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)和透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察.结果 PRF为淡黄色纤维蛋白凝胶,H-E染色见胶原纤维为染色均一的淡红色网状结构,在近细胞端纤维排列较致密,含大量血小板.吉姆萨染色见淡蓝色的胶原纤维为网状结构,近细胞端见染为蓝色的白细胞.SEM发现胶原纤维排列成疏松多孔网状支架结构,含大量静止或伸出伪足的血小板及白细胞.TEM发现血小板处于静止或激活状态,α-颗粒释放于细胞和纤维之间,在细胞之间见高密度区为血小板释放的颗粒.结论 PRF胶原纤维的网状立体结构和富含血小板激活释放生长因子,对生物学作用发挥有重要意义.
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富血小板纤维蛋白辅助的面部自体颗粒脂肪注射治疗
目的 探讨一种安全有效提高面部颗粒脂肪移植后临床效果的方法.方法 回顾性分析2013年1月至2015年6月于安徽医科大学第一附属医院行自体脂肪颗粒面部填充的60例患者(共74处注射部位)的临床资料,所有患者均排除器质性疾病并签署手术知情同意书.按随机数字表法分为两组,每组30例.富血小板纤维蛋白组:按脂肪颗粒注射体积与富血小板纤维蛋白体积比为3∶1进行混合注射移植.对照组:单纯行自体脂肪颗粒移植.术后半年随访,观察单次注射后效果.评估标准:纳入三方评价.凹陷填充术后外观丰满平坦、对称部位术后双侧对称者为优;凹陷填充术后外观较为丰满平坦、双侧基本对称者为良;凹陷或萎缩经过填充后丰满不佳及对称度不满意者为差.结果 经过术后半年的随访,所有手术患者面部凹陷均得到不同程度的改善,均未出现感染、液化坏死、组织过度增生等并发症;富血小板纤维蛋白组优良率达到83.3％,对照组优良率56.7％,两者相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 联合富血小板纤维蛋白进行面部颗粒脂肪移植能显著提升移植后成活率,是一种适合在临床开展应用、安全有效的手术方法.
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富血小板纤维蛋白对兔脂肪干细胞成骨分化的影响
目的:体外分离培养兔脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs),鉴定其分化能力并观察富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)对ADSCs成骨分化的影响.方法:取新西兰兔腹股沟处的脂肪组织,将其分离获得脂肪干细胞,培养至第三代用于实验.分别以油红O、茜素红染色鉴定其成脂和成骨分化能力.取兔耳中央动脉血一次离心法制备PRF膜.将脂肪干细胞分为2组:对照组不含PRF膜;实验组含PRF膜.用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测不同时间点PRF对ADSCs成骨分化的影响.结果:脂肪干细胞呈长梭形贴壁生长;油红O及茜素红染色均呈阳性;在不同的时间点,实验组ALP活性值均高于对照组(P＜0.05).结论:ADSCs具有成骨的潜能,且PRF可以促进ADSCs向成骨细胞分化.
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富血小板血浆与富血小板纤维蛋白在牙周组织再生中的应用
富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)与富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)因其促进组织再生的能力,在临床口腔创伤及缺损的修复中逐渐被重视及应用,并取得了令人较为满意的效果,鉴于PRP与PRF的制作较简便,且不易出现疾病传染及免疫排斥的不良反应,两者在口腔临床中的应用越来越广泛.牙周炎是目前造成牙周骨缺损为常见的疾病之一,国内外的学者们为了探寻促进牙周组织再生的方法,将PRP与PRF用于牙周治疗中,本文即将近年来有关PRP与PRF在牙周组织再生中的临床应用作一综述.
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高压氧暴露富血小板纤维蛋白对调控血小板内皮细胞粘附分子和血管内皮生长因子分泌的时间效应关系研究
目的 探讨高压氧(HBO)暴露富血小板纤维蛋白(PRF)对调控血小板内皮细胞粘附分子(PECAM-1)和血管内皮生长因子(VEGF)分泌时间效应关系影响.方法 选择28例志愿者,抽血离心制备PRF,将PRF随机分为4组,每组7例,分别为HBO 1组(0.25 MPa HBO暴露10 min)、HBO 2组(0.25 MPa HBO暴露30 min)、HBO 3组(0.25 MPa HBO暴露60 min)和对照组(空气暴露60 min),各组PRF用4％多聚甲醛固定,免疫组化染色和显微分光光度计对PECAM-1和VEGF阳性染色定性和定量;用透射电镜观察PRF超微结构变化.结果 对照组PRF中PECAM-1和VEGF染色均呈阳性,HBO 1组、HBO 2组和HBO 3组PRF中PECAM-1和VEGF染色阳性程度比对照组增加.阳性染色主要位于白细胞上部,HBO暴露后阳性染色向纤维端扩散.定量测定发现,HBO暴露组PECAM-1和VEGF含量与对照组比有显著性差异,HBO 2组和3组中PECAM-1和VEGF含量比HBO 1组明显增加.HBO 1组、HBO 2组和HBO 3组血小板颗粒释放比对照组明显增多,颗粒位于细胞之间或胶原纤维之中,HBO 3组可见少许白细胞凋亡.结论 HBO暴露PRF对PECAM-1和VEGF分泌有明显促进作用,HBO 2组对PRF的效应优于HBO 1组和HBO 3组.
关键词： 高压氧 富血小板纤维蛋白 血小板内皮细胞粘附分子 血管内皮生长因子 时效关系 -
富血小板纤维蛋白联合天然煅烧骨对颅骨缺损修复作用研究
目的 探讨富血小板纤维蛋白(platelet rich fibrin,PRF)和天然煅烧骨(calcined natural bovine bone,CBB)对颅骨缺损修复疗效,为骨缺损修复提供依据.方法 选18只成年兔在颅骨左右侧分别制作10 mm直径大小圆形骨缺损,分为实验1组(植入CBB)、实验2组(植入PRF和CBB)和对照组(不植骨).在术后4周、12周、20周取颅骨标本,分别行甲苯胺蓝染色、四环素荧光染色、影像学CT测定各组骨缺损区新骨形成面积、成骨速度、移植物吸收和骨密度值.结果 在术后4周、12周和20周时实验1组和实验2组新骨形成速度、成骨面积、成骨钙化程度及骨密度值均大于对照组;实验2组成骨面积和骨密度大于实验1组(P＜0.05),中央网孔内成骨明显;对照组在12周和20周新骨形成明显减少.结论 CBB对颅骨缺损修复有明显疗效,PRF可促进CBB对骨缺损修复作用,可能与PRF的骨诱导作用有关.
