首页 > 文献资料
-
利用胶质细胞滋养层进行分离式原代神经元培养
为使原代培养神经元能长期健康地生长发育,并且易于分离、纯化,本文利用胶质细胞滋养层进行胶质细胞与神经元分离式培养.结果表明,此方法可靠易行,所培养的神经元具有纯度高、健康及存活期长的优点,能满足很多相关研究的需要.
-
突变型α-突触核蛋白对大鼠原代培养神经元突起生长作用研究
目的 观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其突变体A30P和A53T对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,揭示突变体A30P和A53T在帕金森病的发病机制中的作用.方法 取大鼠大脑皮质神经元分组培养,在细胞外添加A30P、A53T和α-Syn,培养1h、2h和4h后固定,比较A30P、A53T与α-Syn对神经元突起生长的影响.神经元突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法、单克隆抗体阻断实验鉴定各蛋白作用的特异性.结果 添加α-Syn组的神经元培养至1、2和4h时,其突起的平均长度大于对照组和添加A30P、A53T组(P＜0.05).A30P、A53T组和对照组的神经元突起长度差异无统计学意义(P＞0.05).增加蛋白的含量,浓度越高,α-Syn组神经元突起的平均长度与添加A30P和A53T组差异越大(P＜0.01).Western blotting和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn可以从培养基进入到神经元内,并均匀分布在胞体和突起.而A30P和A53T组,并未发现.结论 α-Syn在原代神经元生长初期对其突起生长具有促进作用,突变体A30P和A53T,无促神经元突起生长作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关.
-
α-突触核蛋白寡聚体抑制大鼠原代培养神经元突起早期生长
目的 观察人α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和其形成的寡聚体对大鼠原代培养神经元突起生长的影响,明确α-Syn的生理功能,探讨其寡聚化对神经元的毒性及其在帕金森病发病机制中的作用.方法 制备α-Syn的寡聚体,向分组培养的大鼠脑皮质神经元培养基中添加,培养1、2和4h后固定,观察对神经元突起生长的影响.神经元的突起以成像显微镜观察测量,Western blotting法、免疫荧光法实验进行鉴定.结果 添加α-Syn寡聚体组的神经元培养至1、2和4h时,其突起的平均长度均小于对照组和添加α-Syn单体组(P＜0.05).增加α-Syn寡聚体浓度,随浓度增高神经元突起的平均长度与对照组差异越大(P＜0.01).Western blotting法和免疫荧光实验明确了外源性α-Syn寡聚体可以从培养基进入到神经元内.结论 α-Syn寡聚体在原代神经元生长初期对其突起生长具有抑制作用,这一现象可能与其在帕金森病发病机制中的作用有关.
-
一种高纯度原代神经元培养和高效率转染的方法
背景:神经元的培养和细胞转染技术是在体外研究神经元生长发育及生理病理机制的重要手段,但目前原代培养的皮质神经元往往纯度不高、转染效率不高.目的:建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法.方法:无菌条件下分离新生1 d SD大鼠大脑皮质,经0.25％的胰蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以5×109 L-1细胞浓度接种至含神经元专用培养基的24孔细胞培养板进行原代培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化,使用神经元特异性标志物Tuj1和MAP2对培养的细胞进行鉴定;利用人工脂质体转染神经元,观察神经元转染效率.结果与结论:①体外培养的原代神经元具有较高的纯度,在培养第7天神经元特征明显,突起相互接触形成神经元网络,并表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP2;利用人工脂质体转染神经元,转染效率较高;②采用该方法进行原代神经元培养,能够获得稳定的、高纯度的原代神经元;人工脂质体亦可高效率转染原代神经元.
-
缺氧/复氧损伤对大鼠海马神经元过氧化物酶体增殖物激活受体γ表达的影响
目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在神经元缺氧/复氧损伤不同时间的表达,以探讨PPARγ在神经元缺血再灌注损伤过程中的作用.方法:以新生1 d的SD大鼠为研究对象,采用海马神经元原代培养技术,给原代培养的神经元缺氧、缺糖15 min后再恢复氧和葡萄糖供应,建立体外神经元类缺血再灌注模型,JEM-200EX透射电子显微镜观察缺氧/复氧后不同时间神经元结构变化,采用RT-PCR检测PPARγ mRNA表达,Western 印迹方法检测PPARγ蛋白表达.结果:神经元缺氧/复氧处理后不同时间,神经元正常结构出现损害.复氧 0 h,PPARγ表达与对照组相比无明显变化(P>0.05);复氧 6 h,PPARγ表达在mRNA和蛋白水平出现降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),而且随着时间的延长表达逐渐降低,到48 h达到低,不同时间点之间及与对照组之间差异有统计学意义(P<0.01).结论:PPARγ参与神经元缺血再灌注损伤的病理过程,有望成为缺血性脑血管病治疗的干预靶点.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体γ 原代神经元培养 缺氧/复氧 缺血再灌
