Davidson's固定液用于睾丸和眼球固定的优势/F344大鼠DEN给药致癌性试验的肝脏解剖病理学检查结果/SPF级F344大鼠的脏器重量和自发性病变的研究

佛波酯对BALB/c 3T3细胞转化早期基因表达的影响

目的探讨佛波酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,TPA)促进细胞转化早期基因表达谱的变化.方法以N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)为启动剂,TPA为促癌剂,建立BALB/c 3T3细胞转化模型.采用锥虫蓝染色法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化.采用cDNA微阵列检测TPA处理早期的基因表达谱变化.结果 TPA处理早期可抑制细胞增殖,阻滞细胞于G1期与S期.TPA处理4 h和24 h后,在检测的1 152个基因中筛选出19个差异表达基因,其中9个基因表达上调,10个基因表达下调.许多差异表达基因的功能与细胞增殖、凋亡和周期调控相关,主要涉及ras和p53基因信号传导通路.结论 TPA在促进BALB/c 3T3细胞转化的早期阶段,可影响某些调节细胞周期进展基因的转录表达,从而导致细胞生长阻滞.

中药化学成分对大鼠致癌毒性的定量构效关系研究

目的 采用计算机毒性预测技术预测中药的致癌毒性,为中药安全性评价提供新的途径.方法 采用Mold2软件(version 2.0.0)对1532个中药化学成分进行分子描述符计算,初步筛选后采用随机森林算法构建定量构效关系模型,筛选出优预测模型,并对2010年版《中华人民共和国药典》所载83个有毒中药中有化学成分单体结构报道的60种中药(1609个化学成分)进行致癌毒性预测.结果 经筛选,当描述符集合为60个时,随机森林算法建立的定量构效关系模型准确度高,为0.69.预测60种中药(1609个化学成分)中致癌活性化合物为481个.结论 本文采用随机森林算法构建定量构效关系模型,并可对有毒中药化学成分进行致癌毒性预测,为进一步中药致癌性试验研究提供参考.

人肝细胞癌的癌前期病变

肝实质的大细胞性和小细胞性改变都曾被认为与肝细胞癌(HCC)发生有关,但近年来的研究表明,只有后一种情况才可能是一种癌前形态学表型.利用多种动物进行的致癌性试验显示,变异肝细胞病灶是肝细胞腺瘤和HCC的前期病变;近的观察表明,这种局灶性病变也存在于人病变肝组织中,并可通过变异肝细胞结节和/或小细胞性改变进展为HCC.巨大再生结节(腺瘤样增生)是肝硬变组织中的一种较少见病变,依据是否伴有小细胞性改变可分为不典型和普通型两种;前者与HCC形成有关,而后者与其他再生结节相似,不属于癌前病变.利用肝组织活检发现各种肿瘤前期病变,可作为监测HCC高危人群的一种重要手段.

两种检测多环芳烃致癌性细胞转化实验方法的研究

目的 比较BALB/c-E6E7细胞(含HPV16 E6E7基因的BALB/c 3T3细胞)转化实验与BALB/c 3T3细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性的评价能力.方法 应用已优化的BALB/c-E6E7细胞转化实验与Ⅱ阶段BALB/c3T3细胞转化实验检测三种多环芳烃的致癌性和促癌性.结果 两种细胞转化实验对三种多环芳烃致癌性和促癌性的评价结果一致,且符合IARC对其致癌性的分类标准.BALB/c-E6E7细胞可形成更多的转化灶,转化频率约为BALB/c 3T3细胞的2～10倍,该细胞转化实验具有更高的敏感性并可有效缩短实验时间.结论 BALB-E6E7细胞转化实验是一种更为敏感和高效的评价多环芳烃致癌性和促癌性的方法,有助于环境致癌物的风险评估.

核干细胞因子基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化

目的 探讨核干细胞因子(NS)基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化.方法 体外合成两条短发夹状RNA(NS-shRNA),选择其中沉默NS基因作用强的一条,转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内,另设阴性对照组和空白对照组.定期观察裸鼠成瘤情况,并取各组裸鼠的肿瘤组织进行病理切片及HE染色,免疫细胞化学染色法测定NS蛋白.结果 NS-shRNA转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内长出肿瘤的时间长于对照组(18-19 d vs.14-15 d),瘤体肿块明显小于两对照组,肿瘤终体积小于两对照组[(1282.6±434.1)mm3 vs.(2533.3±683.1)mm3,(2632.5±621.8)mm3],均存在统计学差异(P<0.05);阴性对照组、空白对照组两组间比较无统计学差异(P>0.05).转染组结缔组织及血管比阴性对照、空白对照两组少,肿瘤组织中细胞排列松散,留有很多间隙;HL-60细胞大小不均一更明显,核碎裂和小核细胞增多,核染色质致密程度不均一.瘤巨细胞减少.结论 NS基因沉默的HL-60细胞的致瘤能力减弱,可能与NS基因沉默后HL-60细胞的生物学性状改变有关.

siRNA沉默ENAH基因对肝癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨siRNA沉默ENAH基因对肝癌细胞生长的抑制作用。方法采用脂质体Lipofectamine 2000将ENAH-siRNA及control-siRNA转染至人肝癌细胞HCCLM3，分别设为ENAH-siRNA组和control-siRNA组。采用Western blot检测ENAH蛋白表达，采用裸鼠成瘤实验观察肝癌细胞致瘤能力。记录肿瘤体积，绘制生长曲线，进行生存分析。两组实验数据比较采用t检验，生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank 检验。结果 ENAH-siRNA组细胞ENAH蛋白表达明显弱于control-siRNA组。ENAH-siRNA组裸鼠接种后实体肿瘤形成时间为（24±3）d，明显长于control-siRNA组的（8±2）d（t=12.55，P<0.05）。ENAH-siRNA组裸鼠中位生存时间为64（48～81）d，control-siRNA组为34（21～48）d，两组总体生存率比较差异有统计学意义（χ2=14.33，P<0.05）。结论 siRNA沉默ENAH基因可明显减弱肝癌细胞的致瘤能力，抑制肿瘤生长。

小鼠胚胎干细胞分化细胞永生化后致瘤性研究

目的 研究小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESC)诱导分化的血管内皮细胞永生化后的致瘤现象.方法 体外培养系中,将诱导的小鼠ESC的拟胚体分化为圆形细胞.通过脂质体将人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTE RT)基因转染诱导分化中的圆形细胞,应用RT-PCR及免疫组织化学等方法分析、观察诱导分化的血管样结构的组成细胞和被hTERT基因转染的圆形细胞的形态和生物学特性.并将基因转染的细胞植入裸鼠皮下,观察其致瘤性.结果 携带hTERT基因、从ESC分化而来的圆形细胞TEC3,在体外可大量增殖,培养的前2 d(48 h),细胞数就增加了1倍多,至72 h细胞数增加了12倍,持续传代,端粒酶活性高表达,95％细胞表达Flk-1、CD34和vWF,并有管道化生长特性.将细胞植入裸鼠皮下后1周有肿瘤形成.结论 转染hTERT基因可使小鼠ESC分化细胞持续增殖,植入裸鼠体内具有致瘤性.

喉癌CD133+侧群细胞的分离及体内致瘤性分析

目的 探索能够有效富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.方法 流式细胞仪辅助下联合应用CD133标记及侧群(side population,SP)细胞分选技术检测及分选喉癌Hep-2细胞系中的CD133+ SP及CD133 - SP细胞,将分选所得两亚群细胞以相同的数量级注入非肥胖糖尿病型/重症联合免疫缺陷( NOD/SCID)小鼠右侧腋窝皮下,比较两亚群细胞致瘤性差异,并对两亚群细胞进行细胞周期检测分析.结果 CD133+ SP及CD133 - SP细胞在喉癌Hep-2细胞系中各占(0.30±0.12)％及(17.52±1.59)％.CD133+SP在16只NOD/SCID小鼠中的15只腋窝皮下成瘤,CD133- SP细胞仅在16只NOD/SCID小鼠中的7只腋窝皮下成瘤,差异有统计学意义(Fisher精切概率法,P＜0.05).CD133+ SP细胞所成瘤体的重量平均((-x)±s,下同)为(0.36±0.15)g,而CD133 - SP细胞所成瘤体重量平均为(0.08 ±0.04)g,差异有统计学意义(t=4.64,P＜0.01).细胞周期检测发现,CD133+ SP及CD133 - SP细胞具有相似的细胞周期分布.结论 CD133+ SP比CD133 - SP具备更强的免疫缺陷小鼠体内致瘤能力；SP细胞分选法与CD133标记相结合是一种更有效的富集喉癌肿瘤干细胞的分选方法.

4NQO诱发两种品系大鼠舌癌过程中p53蛋白的表达特点

目的 了解Dark-Agouti (DA)和Wistar/Furth (WF)两种品系的大鼠舌粘膜上皮在4-硝基喹啉-1-氧化物(4-nitroquinoline 1-oxide,4NQO)诱导舌癌过程中p53蛋白表达的动态变化.方法 实验动物的饮水中加入4NQO(0.001%),观察第2、4、8、12、16和26周时实验大鼠舌粘膜对p53的免疫组化表达.结果 p53的阳性反应在DA大鼠舌粘膜中出现早,且随着实验的推移,舌粘膜内的p53阳性细胞簇数目趋于增加,特别在实验后期尤为显著;WF大鼠各实验组间p53表达的水平较低,且变化不大. 结论 p53蛋白的表达水平反应了DA和WF大鼠对4NQO诱发舌癌易感性的差异.

F10基因过表达对A549细胞致瘤性的影响

目的 探讨F10基因过表达对肺癌A549细胞裸鼠成瘤的影响及其机制.方法 取SPF级裸鼠(4～5周龄)18只,随机均分为A549-WT组、MockA549组和F10+A549组(n=6),依次接种野生A549细胞(A549.WT)、转染了空载体的对照细胞株(Mock-A549)和已构建的过表达F10基因的A549细胞(F10+A549)5 × 106个于颈背部皮下.接种后每3～4d称体重并观察,记录肿瘤发生时间,绘制在体肿瘤生长曲线,计算各组裸鼠的成瘤率.各组裸鼠于接种5周后处死,进行大体观察后取瘤组织块制备石蜡切片,HE染色后行病理组织学观察,并采用免疫组化法检测Caspase-3、Bax和Bcl-2在瘤组织中的表达.结果 A549-WT组、Mock-A549组和F10+A549组裸鼠的成瘤时间分别为12.0±1.4、11.7±1.0、8.5±1.4d,组间比较差异有统计学意义(F=13.523,P=0.000),A549-WT组和MocbA549组裸鼠成瘤时间长于F10+A549组(P＜0.05),而前两组比较差异无统计学意义(P=0.660).大体观察可见,F10+AS49组成瘤体积较胚49-WT和Mock-A549组明显增大.F10+A549组肿瘤的在体生长速度较A549-WT和Mock-A549组增快,差异有统计学意义(P＜0.05),而后两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).肿瘤组织HE切片显示,A549-WT和Mock-A549组成瘤组织中存在较多坏死细胞,HE染色表现为均质红染、无定形物质结构,而F 10+A549组成瘤组织边缘细胞坏死较少,细胞增生明显,且肿瘤组织局部可见微血管生成.免疫组化检测显示,Bcl-2蛋白在A549-WT和Mock-A549两组瘤组织中几乎无表达,而在F10+A549组瘤组织中表达较多,阳性细胞呈弥漫性分布.Bax和Caspase-3蛋白在A549-WT和Mock-A549两组瘤组织中的表达均较强,尤以A549-WT组为显著,但在P10+A549组瘤组织中表达均很弱.结论 F10基因可通过下调Caspase-3和Bax表达、上调Bcl-2表达而增强肺癌A549细胞株在裸鼠体内的致瘤性.

非临床甲状腺C细胞毒性的案例分析

探讨非临床致癌性试验中潜在甲状腺C细胞致癌性数据与临床安全性的相关性,为非临床表现出甲状腺C细胞毒性药物的非临床安全性评价和临床风险控制提供依据.回顾性总结和梳理已上市药物的致癌性数据和安全范围,分析其仍上市应用于临床的原因.尚需进一步研究动物甲状腺C细胞病变与人类的相关性.

新药非临床安全性评价中啮齿动物致癌试验结果分析要点

致癌性研究是药物非临床安全性评价的重要内容,啮齿动物致癌试验的阳性结果在非临床研究中并非罕见,阳性结果的人体相关性判定牵涉到多方利益.本文将汇总2014-2017年FDA批准的17项致癌试验阳性的药物,并结合文献报道和工作经验,从致癌试验的结果分析步骤、阳性结果的判定、人体相关性分析和说明书的描述等几方面提出致癌试验结果分析要点的建议,力求为国内同行、新药申报企业和审评机构提供一些参考.

新药致癌性试验研究注意事项

药物研发试验筛选出的候选药物进入临床试验前,需进行严格的临床前安全性研究对其潜在毒性进行评价,其中致癌性是安全性评价的主要内容之一.我国致癌性试验也已纳入新药注册的实验项目,啮齿类动物2年期致癌性试验仍被视为致癌性检测的“金标准”.本文总结了啮齿类动物2年期致癌性试验中的常见问题,包括方案设计的标准和建议,以及在实际研究中常见的问题及其可能的解决方案,旨在对啮齿类动物2年期致癌性试验在我国的普遍建立提供有益的参考.

直接抗丙肝病毒新药的致癌性研究评价

随着对丙肝病毒(HCV)的研究深入,慢性丙型肝炎(CHC)治疗领域逐渐成为关注焦点之一.本文通过检索FDA药品管理机构公开的药品信息,将国外已上市的用于治疗CHC的直接抗病毒治疗药物(DAA)的致癌性试验信息进行汇总,以期丰富对治疗CHC的DAA药物致癌性的了解.

空气燃烧排放提取物小鼠致肺癌作用

目的评价6种具有致突变作用的空气燃烧排放提取物的致肺癌作用.方法用CD-1小鼠肺瘤生物测试方法,在小鼠断奶前处理受试物3次,6个月后观察肿瘤的发生率和病理组织学改变.并以苯并芘作为阳性对照.结果 6种具有突变作用的空气燃烧排放提取物均具有致肺癌作用,并呈剂量-效应关系,另外发现其致肺癌作用与其中是否含二氯甲烷无关.

预测遗传毒性与非遗传毒性致癌物分类器的建立及验证

目的 以毒理基因组学方法建立预测遗传毒性致癌物与非遗传毒性致癌物的分类器,探索暴露时间对其预测能力的影响并验证其性能.方法 原代小鼠肝细胞模型经2个遗传毒性致癌物黄曲霉素B1和苯并芘,2个非遗传毒性致癌物硫代乙酰胺和匹立尼酸处理24和48 h后,对差异表达基因运用基因芯片预测分析筛选出分类器.通过基因集富集分析研究分类器中基因的功能,并运用STRING数据库预测分类器中基因编码蛋白之间的相互关系.进一步运用2个额外的致癌物验证分类器的预测性能.后还通过QuantiGene Multiplex实验验证了基因芯片数据.结果 经基因芯片预测分析筛选的48 h分类器优于24 h分类器,分类器中的基因涉及p53通路、肿瘤坏死因子-α信号通路、脂肪酸代谢相关基因集、过氧化物酶体增殖物激活受体通路等.分类器中的基因形成致癌蛋白-蛋白相互作用关系网络图和代谢相关蛋白-蛋白相互作用网络图.经验证48h分类器对2个额外的致癌物预测可能率接近100％,QuantiGene Multiplex实验结果与芯片数据有较高的一致性.结论 成功建立了预测分类器并验证其性能.该分类器可用于分辨潜在的遗传毒性致癌物和非遗传毒性致癌物,并对未知化合物可能的作用机制进行预测,有望成为药物非临床安全性评价致癌性试验体外替代方法之一.

非临床毒性试验和致癌性试验动物死亡原因分析方法简介

本文简要介绍了美国国家毒理研究中心动物死亡原因分类、美国毒性病理学会颁布的判定毒性试验死亡原因的建议、英国亨廷顿生命科学公司病理部致癌性试验幼龄SD大鼠的死亡原因分析、美国华盛顿大学比较医学和比较病理学系啮齿类动物试验死亡原因分析推荐方法等内容,目的是为我国药物非临床安全性评价领域毒性病理学家更好地分析动物死亡原因及解释毒性试验和致癌性试验结果提供参考.

α粒子诱发BEP2D细胞癌变株中多种基因启动子的异常甲基化

目的:研究α-粒子诱发人支气管上皮细胞癌变株中p14ARF, p16INK4a, MGMT, GSTP1,BUB3和DAPK基因的甲基化情况.方法:用甲基特异性的PCR(MSP)分析基因启动子区CpG岛的甲基化情况和用RT-PCR检测细胞的基因转录水平.结果:p14ARF基因在BEP2D细胞中没有甲基化,但在其癌变细胞BERP35T1中发生了甲基化,且甲基化导致p14ARF基因的转录水平显著下降.p16INK4a和BUB3在两种细胞中均没有发生甲基化,BUB3经测序证实;MGMT在BEP2D细胞和癌变细胞中均发生甲基化;DAPK在BEP2D细胞中已有部分甲基化,在BERP35T1细胞中完全甲基化;GSTP1在BEP2D细胞中没有甲基化,在BERP35T1细胞中发生部分甲基化.结论:在辐射诱发人支气管上皮细胞恶性转化中,部分与细胞增殖、DNA修复和细胞凋亡相关的功能基因发生了甲基化.

中、美、日三国啮齿类饲料样品比较分析——24个月长期啮齿类致癌性实验的饲料选择

目的 评估饲料品质、供应风险及价格,为24个月长期致癌性试验寻找佳的饲料及饲料供应商.方法 将日本进口MF18饲料,美国进口LabDiet饲料以及北京科澳生产的啮齿类饲料样品分别包装,委托专业检测实验室对常规营养成分、毒理及微生物指标进行检测,评估饲料品质;对各来源饲料的运输风险、非可控因素等可能影响饲料品质及稳定供应的方面进行评估;兼顾饲料价格作为参考评估因素.结果 经评估,3种饲料品质均符合饲料国标GB14924-2001*的要求;以毒性研究关注的毒理指标作为评价标准,则3种饲料品质排序为:MF18饲料(佳)-> LabDiet饲料(较佳)->科澳国产饲料(佳);进口饲料的运输及供应稳定性相比存在较大风险;国产饲料价格相对便宜但未成为关键评估因素.结论 经过综合评估,特殊定制的本地国产饲料被认定为是国家药物安全评价监测中心24个月致癌性试验用的佳饲料.