山东大学学报（医学版）杂志
Journal of Shandong University (Health Science) 산동대학학보（의학판）
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基因芯片技术分析胎盘血管病变中差异基因的表达
目的 利用基因芯片技术分析胎盘血管病变差异基因的表达,为深入探讨胎盘血管病变的发生机制提供新的线索.方法 应用22K人类基因组寡核苷酸芯片,筛选了胎盘血管病变患者(实验组)和正常妊娠者(对照组)胎盘组织中的差异表达基因,应用定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白印记分析(Western-blot)验证部分差异基因的表达.结果 实验组与对照组比较,存在10个表达水平显著改变的基因,其中9个在胎盘血管病变中上调,1个下调.经验证部分差异基因的表达与芯片结果一致.结论 胎盘血管病变是一种具有血管壁内皮细胞激活和免疫应答的炎性疾病.这些差异表达基因可能通过多种信号转导途径参与了内皮激活与炎症应答,并导致了胎盘血管病变的发生和发展.
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骨保护素在诊断川崎病并冠状动脉损害中的应用
目的 评估血清骨保护素(OPG)在预测川崎病(KD)合并冠状动脉损害(CAL)中的应用价值.方法 选择90例KD患儿作为KD组、30例因感染性疾病发热的患儿为发热组、20例系统性红斑狼疮(SLE)患儿为SLE组、30例健康儿童为正常对照组.对所有研究对象均应用ELISA法检测血清骨保护素(OPG),并同时检测外周血象、肝功、血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)等生化指标.90例KD患儿均行经胸二维超声心动图(TTE)检查,对合并CAL者进一步根据其冠状动脉扩张程度(冠状动脉瘤直径)进行CAL严重程度的分组,应用Logistic运步回归分析等统计学方法筛选出KD并CAL的危险因素,并进一步应用ROC分析评价相关危险因素在预测CAL方面的价值.结果 KD组患儿血清OPG含量明显高于发热组、SLE组及正常对照组(P<0.05).90例KD患儿中有38例(42.2%)在急性期合并了CAL,其中冠脉扩张者18例,冠脉瘤14例,巨大冠脉瘤6例.统计结果显示,KD合并CAL组血清OPG、CRP明显高于KD无CAL患儿组(P<0.05),KD合并CAL组血ALB水平低于KD无CAL组(P<0.05).Logistic逐步回归分析表明,OPG、CRP及ALB是KD发生CAL的危险因素.ROC分析表明,OPG、CRP及ALB是预测KD急性期发生CAL的可靠指标.线性回归分析表明,OPG与CAL的严重程度呈正相关(r=0.895).结论 OPG是KD患儿发生CAL的危险因素,并与CAL的严重程度密切相关,可以用于预测急性期KD患儿是否发生CAL.
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TBNA在支气管腔外病变中的临床应用价值
目的 探讨经支气管针吸活检(TBNA)对支气管腔外病变的诊断价值.方法 对87例胸部CT检查提示支气管腔外病变且常规气管镜检查示管腔呈外压性狭窄、多次活检或刷检均阴性的患者行TBNA检查.结果 TB-NA诊断准确率为94.3%(82/87),其中恶性肿瘤86.2%(75/87).除8例穿刺部位少量出血外,无显著不良反应.结论 TBNA操作简单,创伤小,诊断率高,是诊断支气管腔外病变安全、有效、可靠的方法.
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γ-干扰素、白细胞介素-10在口腔扁平苔藓上皮下结缔组织中的表达
目的 检测口腔扁平苔藓黏膜上皮下结缔组织中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)的表达情况,初步探讨其在口腔扁平苔藓发生发展过程中的作用及意义.方法 应用PCR技术和荧光实时定量PER技术检测11例口腔扁平苔藓黏膜上皮下结缔组织和5例正常口腔黏膜上皮下结缔组织中IFN-γ、IL-10的表达情况.结果 荧光实时定量PCR检测结果显示,口腔扁平苔藓黏膜上皮下结缔组织中IFN-γmRNA的表达值实验组与时照组分别为0.2981±0.2064和0.0986±0.0894,扁平苔藓组织均高于正常口腔黏膜组织;IL-10 mRNA的表达值实验组与对照组分别为4.3218±4.4678和15.1156±9.1392,扁平苔藓组织均低于正常口腔黏膜组织,经检验差异有统计学意义(P<0.05).结论 与正常口腔黏膜组织相比,口腔扁平苔藓组织中具有促炎作用的IFN-γ表达水平增高,而具有抗炎作用的IL-10表达水平降低,提示抗炎症反应和促炎症反应在口腔扁平苔藓的发生发展过程中起到一定的作用.
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卵巢上皮性肿瘤MCP-1基因表达的研究
目的 研究趋化因子MCP-1在卵巢上皮性肿瘤中的表达,探讨MCP-1在卵巢肿瘤发生、发展中的作用及临床意义.方法 采用半定量RT-PCR方法检测12例良性肿瘤、6例交界性卵巢肿瘤、22例卵巢癌原发病灶组织、8例卵巢癌转移病灶组织及10例正常卵巢组织中MCP-1 mRNA的表达情况.结果 正常卵巢组织、卵巢良性、交界性、恶性原发病灶组织及转移病灶组织中MCP-1表达的阳性率依次为25.0%、25.0%、50.0%、95.5%、87.5%.相对表达强度依次为0.11±0.01、0.18±0.03、0.51±0.05、0.73±0.08、0.45±0.08.MCP-1的阳性表达率和相对表达强度在卵巢交界性肿瘤中明显高于良性肿瘤,在卵巢恶性肿瘤中又明显高于交界性肿瘤,差异有统计学意义.MCP-1的表达与卵巢上皮癌组织学类型、组织分化及淋巴结转移情况无关,临床分期为Ⅲ～Ⅳ期的病例MCP-1的阳性表达率和相对表达强度与Ⅰ～Ⅱ期者相比,虽无显著性差异,但呈下降趋势.卵巢癌原发病灶组织中MCP-1的表达强度明显高于卵巢癌转移病灶组织,差异有统计学意义.MCP-1表达水平与肿瘤组织巨噬细胞浸润程度成正相关.结论 MCP-1基因在卵巢肿瘤发生、发展过程中起重要作用.MCP-1可趋化和激活巨噬细胞而发挥抗肿瘤效应,因此MCP-1极可能成为卵巢恶性肿瘤治疗的效应分子.
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硫酸乙酰肝素蛋白多糖基因多态性与草酸钙结石易感性的关系
目的 探讨硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)基因多态性与中国汉族人群草酸钙肾结石易感性的关系.方法 以病例对照研究方法,提取143例草酸钙肾结石患者及157例健康对照者外周血标本基因组DNA,应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)分析技术,检测并分析HPSG基因rs3767140位点单核甘酸多态性与草酸钙肾结石的关系.结果 HPSG基因等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律,结石组GG+GT、TT基因型分布频率分别为69.23%、30.77%,健康对照组分别为79.62%、20.38%(P<0.05),TT基因型个体患结石的风险是其它基因型的1.736倍(95%CI=1.026～2.938),结石组与对照组等位基因G、T分布频率分别为:45.10%、55.90%和54.14%、45.86%(P<0.05),未发现HPSG基因多态性与草酸钙结石的复发相关.结论 HPSG基因多态性与草酸钙尿路结石有相关关系,TT基因型可作为草酸钙结石危险因素的标志.
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肺癌的胆碱显像与胆碱代谢的变化
目的 探讨肺癌的胆碱显像与肺癌组织细胞中胆碱代谢的变化.方法 选取经手术病理证实的18例肺癌患者.术前均进行~(11)C-胆碱PET/CT显像,用目测法和半定量法分析显像结果,术后将取得的肺癌组织及正常肺组织用RT-PCR和Western blot 方法,检测胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和胆碱激酶(Chok)基因的表达,分析肺癌的胆碱显像与肺癌组织细胞中胆碱代谢的变化.结果 18例肺癌的PET/CT图像均显示胆碱放射性摄取明显增高,18例肺癌组织细胞中,14例Chok mRNA及蛋白质的表达比正常肺组织升高,9例肺癌组织细胞ChATmRNA及蛋白质表达升高.其中8例Chok及ChAT表达均升高.鳞癌与腺癌对胆碱的平均标准摄取值(SUV)差异无统计学意义.结论 肺癌的胆碱显像有异常增高,其增高因为与肺癌细胞中胆碱代谢的磷酸化途径及乙酰化途径增高有关.
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sFRP-1、Wnt-1在宫颈癌及癌前病变中的表达及意义
目的 探讨分泌性卷曲相关蛋白1(sFRP-1)和Wnt-1蛋白在宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌中的表达及意义.方法 采用免疫组化SABC法测定sFRP-1、Wnt-1蛋白在正常宫颈组织、低度上皮内瘤变组织(LSIL)、高度上皮内瘤变织(HSIL)和宫颈癌中的表达水平及分布;并用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测sFRP-1、Wnt-1mRNA的表达水平.结果 sFRP-1在宫颈癌中的表达明显低于HSIL及LSIL,同时LSIL低于正常宫颈组织.wnt-1在宫颈癌中的表达明显高于HSIL及LSIL,同时HSIL高于LSIL,LSIL高于正常宫颈组织.结论 Wnt信号通路抑制因子sFRP-1的过低表达及其主要成员Wnt-1的过度表达在由CIN发展到宫颈癌的过程中起了促进作用.
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冷冻对人精子氧化应激水平、核DNA损伤的影响
目的 研究冷冻储存对精子形态、氧化应激水平和核DNA损伤的影响.方法 根据WHO的标准(1999年),随机选取正常精液样本、异常精液样本各30例.分别检测精子冷冻前后正常形态率、丙二醛(MDA)浓度和DNA损伤率.结果 ①两组精液精子冷冻前后变化:冷冻后正常精液组中精子正常形态率降低明显,MDA值升高显著(P<0.05);DNA损伤率升高,但差异无统计学意义.而冷冻后异常精液组中精子正常形态率明显降低,MDA值显著升高,DNA损伤率升高(P<0.05);②两组精液之间冷冻损伤的比较:冷冻对异常精液正常形态精子损伤、DNA损伤明显高于正常精液组(P<0.05);③精子正常形态率与MDA浓度呈负相关(r=-0.525),MDA浓度与DNA损伤率呈正相关(r=0.692).结论 冷冻可导致异常精液的正常形态率下降,脂质过氧化损伤、DNA损伤率升高.而在正常精液中则导致精子正常形态率的下降,脂质过氧化损伤的增加.
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米非司酮对人早孕绒毛组织核转录因子-κB表达的影响
目的 探讨米非司酮对人早孕绒毛组织中核转录因子-κB(nf-κB)表达的影响.方法 人工流产组早孕绒毛18例和药物流产组早孕绒毛22例,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学技术分别测定两组早孕绒毛组织中NF-κB蛋白和mRNA的分布与含量.结果 药物流产组早孕绒毛组织中NF-κB mRNA表达量与人工流产组相比下调明显(P<0.01);药物流产组早孕绒毛细胞滋养层细胞中NF-κB蛋白表达与人工流产组相比明显下调(P<0.05).结论 米非司酮引起早孕绒毛NF-κB表达降低,可能是米非司酮终止早孕的机理之一.
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正常颅内压状态下人脑桥静脉的影像学研究
目的 在体观察磁共振图像上脑桥静脉的形态学特征,建立生理状态下该段血管直径的正常值参考范围,评价脑内中小静脉磁共振血管成像的有效性和临床应用价值.方法 利用磁共振静脉血管成像技术的二维时间飞跃法(2D-TOF)对50例无颅内疾患成人的脑桥静脉扫描成像,以大强度投影法对获得的原始图像进行后处理,Syngo fastview影像处理系统对人脑桥静脉影像测量分析,统计学分析得出直径的95%可信区间,建立该段血管生理情况下直径的正常值参考范围.结果 性与女性的桥静脉直径分别为(3.58±0.39)、(3.29±0.37)mm、95%可信区间分别为(3.48±0.39)、(3.22±0.26)mm.额叶桥静脉直径小,其余各叶桥静脉直径差异无统计学意义,男性桥静脉直径大于女性.结论 脑桥静脉可通过2D-TOF血管扫描成像获得很好的显示,此段静脉在影像学上具有显著的形态学特征,如血管排列方式、血管走行、脑桥静脉壶腹的形成、汇入静脉窦前段的信号减弱甚至消失等.可把计算所得的95%可信区间认为是脑桥静脉直径的正常值范围,建立脑静脉系统的后通路-脑桥静脉的直径正常值范围.人,脑桥静脉;磁共振成像;时间飞跃法;大强度投影
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双源CT双能量肺动脉成像在肺动脉栓塞中的应用
目的 探讨双源CT双能量肺动脉血管成像在肺动脉栓塞诊断中的应用价值.方法 20例怀疑肺动脉栓塞患者行双能量肺动脉血管成像(A组),获得140 kV、80kV及两者融合的3组横断面原始图像,将140kV和80kV两组图像输入双能量后处理软件(DE),获得DE灌注图像(DEPI);将融合图像输入三维软件获得血管MPR图像(V-MPR),分析DEPI与V-MPR直接显示栓子的差别及二者结合的优势;回顾分析另16例已确诊肺动脉栓塞患者64层螺旋CT胸部CTA图像(B组),由2位医师对2组血管MPR图像质量进行肉眼观察评价.结果 肉眼观察A组与B组图像质量、DEPI与V-MPR图直接显示肺动脉千及叶肺动脉内栓子差异均不明显,直接显示段及亚段肺动脉内栓子差异显著;DEPI中肺动脉干、叶动脉及部分段肺动脉内栓子均引起低灌注区,其余段及亚段肺动脉内栓子未见明显灌注改变.结论 DSCT双能量肺动脉血管成像能清晰显示栓子,与64层螺旋CT图像质量无差别,可同时对栓塞后肺组织的血流进行评价.
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溃疡性结肠炎患者血清中VEGF、NO的表达及其相互关系
目的 本研究旨在探讨一氧化氮(NO)和血管内皮生长因子(VEGF)在溃疡性结肠炎(UC)发生发展中的关系.方法 根据UC患者病情程度分为活动组(n=44)和缓解组(n=16),并以健康查体者编成对照组(n=20).取清晨空腹血液以检测其内VEGF、NO及白细胞(WBC)、血小板(PLT)的含量.结果 UC活动组中血液的VEGF、NO均明显高于缓解组(P<0.001)和对照组(P<0.001),而缓解组与对照组间无统计学差异(P>0.05).在活动组中,VEGF与NO存在正相关性(r=0.48,P<0.01),而在对照组中则无相关性(r=0.179,P>0.05).另外,在活动组中,WBC计数超出正常参考值范围的患者只占22.7%,而PLT也仅占31.8%.但总体而言,活动组血液中WBC、PLT与对照组及缓解组相比,均有统计学差异(P<0.001或P<0.01).结论 在UC疾病的发生发展中,VEGF与NO可能有协同作用.
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舍曲林辅助治疗伴有抑郁症状的青少年支气管哮喘的疗效观察
目的 探讨舍曲林辅助治疗伴有抑郁症状的青少年支气管哮喘的疗效及安全性.方法 将符合纳入标准的77例青少年支气管哮喘患者随机分为两组:治疗组40例,在常规治疗基础上加服舍曲林,对照组37例,加服安慰剂,疗程12周.治疗后的第6、12周末进行疗效及安全性评定.结果 治疗12周后,治疗组抑郁治疗有效率(72.5%)及哮喘治疗有效率(95.0%)均优于对照组(分别为37.8%、72.9%),且差异有统计学意义(P<0.05).2组不良反应均较轻.SERS各因子发生率及总分比较差异均无统计学意叉(P>0.05).结论 舍曲林对治疗伴有抑郁症状的青少年支气管哮喘患者有效,且安全性好.
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盐酸戊乙奎醚对硫化氢急性中毒性心血管损伤的疗效观察
目的 观察盐酸戊乙奎醚对硫化氢急性中毒所致心血管损伤的临床疗效.方法 收集32例硫化氢急性中毒患者,将其随机分为观察组和对照组各16人,观察组给予盐酸戊乙奎醚+常规治疗,对照组给予常规治疗.记录患者30min、24h,3d及7d血清心肌酶谱;用ELISA法测定患者上述时间肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素8(IL-8)等血清炎症因子含量.结果 观察组血清心肌酶谱、炎症因子TNF-α、IL-8含量明显低于对照组(P<0.05),心电图心肌损伤性ST、T波改变明显改善(P<0.05).结论 盐酸戊乙奎醚可以减轻硫化氢急性中毒引起的心血管损伤并改善心血管功能.
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雄黄体外诱导C6胶质瘤细胞凋亡的特点及分析
目的 观察雄黄对体外培养的C6胶质瘤细胞的生长抑制作用,探讨雄黄诱导的细胞凋亡特点和可能机制.方法 以雄黄溶液对体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞进行诱导,通过MTT法观察浓度和时间对细胞存活率的影响,通过光镜、电镜观察细胞的抑制情况;采用Annexin V-FITC-PI双染流式细胞术观察药物引起的细胞凋亡情况,采用RT-PCR法观察诱导过程中Bcl-2、Bax和c-myc 3个基因的表达情况.结果 MTT结果显示,不同浓度的雄黄溶液可引起细胞不同程度的抑制;光镜及透射电镜下可现察到药物引起的细胞凋亡变化.Annexin V-FITC-PI双染显示,细胞在25 mg/L雄黄作用24、48h后的凋亡率分别为(10.134±3.14)%、(41.04±17.44)%,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR观察到Bax基因表达的升高和Bcl-2、c-myc基因表达降低.结论 雄黄对C6细胞的抑制具有时间和浓度依赖性,浓度越高,越明显,此抑制与雄黄引起的凋亡有关,凋亡过程中伴有Bax基因表达的增加和Bcl-2、c-myc的降低.
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异基因骨髓细胞在大鼠体内嵌合分布特性的研究
目的 研究大鼠异基因骨髓细胞输注后在受者器官的嵌合状态及分布规律.方法 分离SD大鼠骨髓细胞,用PKH26荧光染色标记,通过下腔静脉或门静脉输注到Wistar大鼠.在手术的0～4d,腹腔注射雷帕霉素.在输注标记骨髓细胞术后7、14d,取受者大鼠的血液、骨髓、胸腺、脾脏、腹主动脉旁淋巴结、肝脏,分离淋巴细胞,用流式细胞仪(FCM)检测嵌合情况;荧光显微镜和HE染色观察标记细胞在移植大鼠淋巴器官内的分布情况.结果 输注的骨髓细胞主要分布在受者的淋巴器官内,进行分化和发育.随时间的延长,数量逐渐减少,终在脾脏被清除.FCM和荧光显微镜检测显示,通过门静脉途径输注骨髓细胞,标记骨髓细胞的嵌合率高于下腔静脉途径.结论 门静脉途径输注异基因骨髓细胞能更有效地诱导大鼠混合性嵌合状态的出现;在受者体内,异基因骨髓细胞的分布有相应的规律.
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太原市秋季气传致敏花粉种类和含量与楼层关系分析
目的 调查分析太原市秋季气传致敏花粉的种类、含量与不同楼层之间的关系.方法 在2008年8月1日至9月30日,在太原市中心同一地区采用曝片法收集花粉,将取样器分别安放于四面通风的4、7、17层楼顶,对比观察不同楼层的花粉含量.结果 按花粉含量多少排序,4层(12米)>7层(21米)>17层(51米);对不同楼层花粉含量做分析,4层与7层花粉数目比较,P>0.05;4层与17层、7层与17层比较,P<0.05;4、7层花粉种类相同,17层花粉种类减少.结论 17层(51米)的花粉含量、种类较4层、7层明显减少,住高层住宅可减少花粉的吸入量.
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脑缺血再灌注后大鼠氧化水平和神经功能损伤及异丙酚的影响
目的 观测大鼠脑缺血再灌注后神经损伤及血清氧化水平的变化及异丙酚的影响.方法 采用大脑中动脉线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,88只大鼠随机分为假手术组(n=8)、缺血再灌注模型组(n=40)和异丙酚(100mg/kg)干预组(n=40).分别于再灌注6、24h,2、4、7d对大鼠进行神经功能损伤评分,并行梗死灶的观察及分光光度法对血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的检测.结果 与模型组比较,异丙酚干预组大鼠缺血再灌注后的神经功能损伤评分低,24h、2 d差异有统计学意义(P<0.05);梗死灶面积减小,MDA降低,SOD的活性升高(P<0.05).结论 异丙酚能明显提高SOD的活性,减少MDA的积聚,缩小脑梗死体积,改善脑缺血再灌注损伤后神经损伤.
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Gefitinib对激素非依赖性前列腺癌的治疗及其效应初探
目的 探讨受体酪氨酸激酶抑制剂Gefitinib在体内外对激素非依赖前列腺癌(HIPC)的抑制作用及其效应机制.方法 不同浓度的Gefitinib处理HIPC细胞株PC-3后24～120h,MTT法检测细胞生长抑制率,Western blot检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶8(Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶C(PKC)蛋白的表达水平.建立PC-3细胞裸鼠移植瘤,观察Gefitinib体内的肿瘤抑制率.结果 Gefitinib抑制PC-3细胞生长呈现时间-浓度依赖性,佳抑制浓度为5mg/Ml,佳抑制时间为72h,细胞生长抑制率稳定在50%～60%.与对照组比较,经Gefilinib处理后PC-3细胞中EGFR、Akt蛋白水平分别降低了70.44%和59.01%,而MAPK及PKC蛋白分别仅降低34.83%和33.40%.裸鼠实验结果表明,Gefitinib可显著抑制HIPC肿瘤的生长,抑制率高迭53.95%,常规病理HE染色提示大片灶状癌细胞坏死.结论 Gefitinib可在体内外显著抑制HIPC的生长,其机制可能为通过降低癌细胞EGFR和胞内蛋白Akt的表达水平来发挥作用.
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腺病毒介导eNOS转染高肺血流肺动脉高压大鼠模型的研究
目的 观察腺病毒介导的内皮型一氧化氮合酶基因(eNOS)转染对高肺血流肺动脉高压大鼠模型肺动脉高压形成的影响.方法 随机将40只大鼠分为假手术组、手术组、实验组和对照组,每组10只.手术组、实验组和对照组采用套管连接法建立左向右分流肺动脉高压模型,实验组采用气管吸入法转染重组腺病毒AdCMVeNOS,采用免疫组化法观察eNOS蛋白表达,采用比色法测定肺组织eNOS活性,测量各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、右心室平均压(mRVP)、平均颈动脉压(mCAP)、右心肥厚指数(RVHI),采用HE染色观察肺动脉形态学改变,计算管壁厚度与血管外径比值(WT%).结果 实验组免疫组化染色可见全层血管壁内棕黄色颗粒,eNOs表达强度明显高于对照组(P<0.05),假手术组eNOS表达的阳性细胞介于实验组与对照组之间.手术组和对照组的eNOS活性比假手术组明显降低(P<0.05);实验组的eNOS活性显著高于对照组,且较假手术组亦明显升高(P<0.05).手术组和对照组大鼠的mRVP、mPAP、RVHI和WT%均明显高于假手术组(P<0.05).与对照组相比,实验组大鼠mRVP、mPAP、RVHI和WT%均显著降低(P<0.05);手术组与对照组各值之间差异不明显.结论 腺病毒介导的eNOS基因转染能够上调高肺血流肺动脉高压大鼠肺组织中eNOS表达及其活性,延缓肺动脉高压的发展和肺血管的重塑.
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脑神康胶囊对高糖环境下氧化损伤大鼠海马神经元HIF-1α表达的影响
目的 研究高糖环境下体外培养大鼠海马神经元氧化损伤时乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的变化以及脑神康胶囊对神经元的保护作用.方法 原代培养大鼠海马神经元,将细胞随机分成8组:对照组、高糖组、黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶组(X/XO组)、川芎嗪组、生理盐水组、脑神康低(5mL/kg)、中(10mL/kg)、高浓度组(20mL/kg),对照组用低糖型DMEM培养基培养,其余7组用葡萄糖浓度为25 mmol/L的DMEM培养基培养.除对照组及高糖组正常培养,其余各组均用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶处理建立氧化损伤模型,其中中药各浓度组及川芎嗪组分别于加入黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶之前换以不同浓度含药血清和川芎嗪的DMEM培养液,采用Real-Time PCR法检测各组海马神经元HIF-1αmRNA的表达.结果 与对照组相比,高糖组及X/XO组HIF-1αmRNA表达均明显上升(P均<0.01);与高糖组相比,X/XO组HIF-1α mRNA的表达量升高(P<0.05);与X/XO组比较,川芎嗪组及中药各浓度组HIF-1α mR-NA的表达量均降低,其中中浓度组低,具有明显的统计学意义(P均<0.01),川芎嗪组与低浓度组接近,无统计学差异(P>0.05).结论 脑神康胶囊对高糖环境下培养的大鼠海马神经元氧化损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其抑制HIF-1α的表达、改善组织缺氧密切相关.
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蝎毒多肽提取物对小鼠Lewis肺癌生长转移的抑制作用
目的 观察蝎毒多肽提取物(PESV)对Lewis肺癌(LLC)生长及转移的影响并探讨其作用机制.方法 采用30只C57BL/6J小鼠,右腋下接种Lewis肺癌细胞悬液,建立皮下种植瘤模型,随机分为荷瘤对照组、5-FU治疗组、PESV治疗组,连续灌胃给PESV18d,检测肿瘤体积并计算抑瘤率.另取20只C57BL/6J小鼠,尾静脉注射Lewis肺癌细胞悬液,建立Lewis肺癌实验转移模型,随机分为荷瘤对照组和PESV组,连续灌胃给PESV28d,观察肺部转移灶数目并计算转移抑制率;采用免疫组化法和ELISA法分别检测瘤组织及血清中骨桥蛋白(OPN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.结果 PESV抑瘤率为46.02%,肺转移抑制率76.19%;与荷瘤对照组相比,瘤组织和血清中OPN和MMP-9的表达明显降低(P<0.05).结论 PESV能抑制小鼠Lewis肺癌的生长与转移,其机制可能与抑制OPN和MMP-9的表达有关.
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完全脾切除阻止孕期小鼠胰岛β细胞总量增加
目的 探讨脾对小鼠怀孕状态下胰岛β细胞增加的影响.方法 40只7周龄昆明雌性小鼠分为4组:脾切除怀孕组、假手术怀孕组、未受孕脾切除对照组和假手术对照组,每组10只.不同时间收集血液,分析小鼠空腹血糖.小鼠分娩后,立即切取胰腺组织,进行免疫组化染色,用图像分析系统分析胰岛β细胞总重量.分离纯化小鼠胰岛及脾细胞,在Transwell小室进行非接触式共培养,CCK-8处理后,酶标仪490nm处比色,分析胰岛细胞增殖状况.结果 与假手术对照组(7.03±2.71)mg相比,假手术怀孕组胰岛β细胞总量(11.89±2.83)mg显著增加(P<0.05);脾切除怀孕组胰岛β细胞总量(6.10±2.12)mg低于假手术怀孕组(11.89±2.83)mg,P<0.05,但与脾切除对照组(5.37±2.11mg)比较差异无统计学意义(P>0.05).假手术怀孕组和脾切除怀孕组空腹血糖均在正常范伟.体外细胞共培养研究结果表明,脾细胞可促进胰岛β细胞增殖.结论 脾可促进小鼠孕期胰岛β细胞总量的增加,其机制可能涉及脾分泌的某些因子的间接作用.脾切除可限制孕期小鼠胰岛β细胞总量的增加.
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抗心肌肌球蛋白抗体在慢性病毒性心肌炎小鼠中的表达及卡托普利、氧化苦参碱的干预效果
目的 观察抗心肌肌球蛋白抗体(AMA)在慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠中的表达,比较卡托普利和氧化苦参碱的干预效果.方法 以柯萨奇病毒B_3株(CVB_3)重复增量感染(第0、14、28天,剂量分别为0.20、0.25、0.30mL)BALB/c小鼠建立慢性VMC(n=60)模型,正常对照组(n=8)同期腹腔注射等体积生理盐水.42d将慢性VMC模型组存活小鼠随机分为慢性VMC对照组(n=8)、卡托普利干预组(n=8)及氧化苦参碱干预组(n=8),干预28d后,即实验第70天杀死各组小鼠.称取小鼠心脏质量,计算心脏与体质量比值;分别以苏木素-伊红(HE)、苦味酸天狼猩红行心肌组织及心肌胶原组织特异性染色,运用图像分析软件计算心肌组织中胶原容积积分(CVF,%);酶联免疫法(ELISA)检测实验小鼠血清中AMA的表达,以光密度值(OD值)>(x-)+2s为阳性组,<(x-)+2s为阴性组.结果 慢性VMC组小鼠在实验第70天心脏与体质量比值、CVF及血清中AMA OD值均较正常对照组增高(P均<0.01).卡托普利及氧化苦参碱干预后心脏与体质量比值、CVF较慢性VMC组降低(P均<0.01),血清中AMA OD值较慢性VMC组降低(P<0.05).AMA阳性组心脏与体质量比值、CVF及OD值均较阴性组增高(P均<0.01).结论 慢性VMC小鼠血清中AMA表达增高,卡托普利及氧化苦参碱可下调AMA的表达,抑制慢性VMC小鼠的心肌重构.
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不同正畸力作用下牙周组织中碱性成纤维细胞生长因子表达的实验研究
目的 探讨不同正畸力作用下兔牙周组织中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达与分布及其在正畸牙移动过程中的作用和机制.方法 建立兔正畸牙移动模型,实验组分别施加10、50、100g力.1周后将动物处死,制备左侧上颌第一磨牙及牙周组织的标本,进行免疫组化染色(HI-SABC法)后检测、分析,并与对照组比较.结果 对照组bFGF染色呈弱阳性,受力10g组与对照组间差异无统计学意义,受力50g组与对照组相比差异有统计学意义,受力100g组与对照组间差异无统计学意义,其余两两比较差异无统计学意义.结论 在适宜的矫治力作用下,牙周组织中bFGF表达增强;bFGF可能参与了正畸牙移动,并促进了正畸牙牙周组织的修复重建.
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不同转染方式对GFP表达质粒在小鼠肝脏的表达影响
目的 研究经流体力学注射、门静脉和腹腔常规注射3种不同途径注射GFP表达质粒后,目的基因在小鼠肝脏的表达情况及其转基因效率.方法 将裸质粒或脂质体包裹的质粒DNA分别应用流体力学注射、门静脉及腹腔常规注射法注入同种异体小鼠体内,48h后分别取血和肝组织,通过荧光显微镜观察3种转染途径对质粒DNA在小鼠肝脏的表达影响.结果 流体力学注射组及门静脉常规注射组均可见大量绿色荧光蛋白表达,两组的荧光表达量差异无统计学意义(P>0.05),腹腔注射组小鼠的肝脏仅见少量的绿色荧光表达,但3组内脂质体/质粒DNA复合物组绿色荧光表达量均明显高于裸质粒组(P<0.05).结论 应用流体力学注射及门静脉常规注射脂质体/质粒DNA复合物途径,目的基因均在小鼠肝脏高效表达,两种途径无明显差异,流体力学注射可广泛用于肝靶向性的活体基因转染.
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高碘对大鼠凝血功能的影响
目的 建立高碘喂养的大鼠动物模型,观察不同浓度的高碘对大鼠凝血功能影响的剂量与效应关系.方法 实验分4组:①正常饲料+正常水组(NI);②正常饲料+10倍碘组(10HI);③正常饲料+50倍碘组(50HI);④正常饲料+100倍碘组(100HI);每周称体重,饲养6个月,用乙醚麻醉,从眼球静脉取血,CA7000全自动凝血分析仪测定凝血酶原时间(PT-time)、凝血酶原时间国际标准化比值(PT-INR)、活化部分凝血活酶时间(AFIT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原时间(Fbg-time)、纤维蛋白原浓度(Fbg-c)、抗凝血酶Ⅲ活性(AT3:A)和D-二聚体(D-dimer).结果 与NI相比,10HI组的大鼠PT-time、PT-INR、Fbg-time、TT、APTT和AT3:A数值降低(PT、PT-INR、Fbg-time、AT3:A:P<0.05;TT、APTT P<0.01),Fbg-c数值升高(P<0.01);而50HI和100HI组的大鼠PT-time、PT-INR、Fbg-time、TT、APTT数值升高(50HI组的Fbg-time、TT P<0.05;50HI、100HI组的其它指标P均<0.01),Fbg-c数值降低(50HI组:P<0.05,100HI组P<0.01).结论 适量高碘对大鼠凝血功能有促进作用,但是随着碘浓度升高,凝血功能降低.
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兔下肢局部注射氟尿嘧啶脂质体的淋巴靶向示踪
目的 通过同位素示踪技术探讨氟尿嘧啶脂质体(FL)的局部淋巴结靶向性,为恶性肿瘤的局部淋巴靶向化疗提供依据.方法 将6只兔双侧第一趾蹼皮下注射~(99m)Tc-FL后,用SPECT连续动态示踪30min或60min.然后在8h内静态显像监测FL的淋巴流向途径,并探测1、3、6h时在注射区、胭窝淋巴结、盆腔淋巴结群、后腹膜淋巴结群、乳糜池等局部淋巴结区域的闪烁计数率(%).结果 动态示踪、静态监测见注射区~(99m)Tc-FL缓慢靶向流至局部淋巴结而显影,局部淋巴结高浓度积聚,而其余组织浓度很低.在注药后1、3、6h 3组间注射区或局部淋巴结的闪烁计数率比较,差异有统计学意义(P<0.05),注射区的闪烁计数率逐渐下降,而局部淋巴结则逐渐上升;各组内局部淋巴结与其余组织(注射区除外)的闪烁计数率比较差异有统计学意义(P<0.05),局部淋巴结的闪烁计数率明显高于其余组织.结论 FL具有局部淋巴靶向性和富集性,并不直接进入血液循环,提示恶性肿瘤局部淋巴靶向化疗具有可行性.
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神经上皮干细胞粘附壳聚糖纤维生长分化的实验研究
目的 检测神经上皮干细胞与壳聚糖纤维的生物相容性,并探讨其在壳聚糖纤维材料上的生长、分化情况.方法 从胚胎神经管取材神经上皮干细胞,并与壳聚糖纤维进行体外共培养.采用MTT法检测细胞在壳聚糖纤维上的活性,采用光镜和扫描电镜技术观察细胞在壳聚糖纤维上的存活、生长状况,采用免疫细胞化学染色鉴定神经上皮干细胞的分化情况.结果 神经上皮干细胞可以贴附在壳聚糖纤维表面生长,并可分化为神经元和神经胶质细胞,细胞活性与单纯神经上皮干细胞培养组没有明显差别.结论 壳聚糖纤维与神经上皮干细胞有良好的生物相容性,二者在外周神经损伤的治疗中具有良好的应用前景.
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多发性硬化患者用药前后脑脊液蛋白质组学液相色谱技术体系的建立
目的 建立多发性硬化(MS)患者用药前后脑脊液蛋白质组一维、二维液相色谱分离的技术体系.方法 以MS患者用药前后脑脊液为研究对象,提取脑脊液蛋白质组,分别采用超高压液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF MS)技术和二维色谱聚焦-反向液相色谱(PF-2D)技术进行分离鉴定.结果 分别获得MS患者用药前后脑脊液蛋白质组一维和二维液相色谱图谱,分离方法有良好的重现性.筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质.结论 用液相色谱技术筛选差异蛋白有助于寻找具有临床治疗意义的MS疾病标识物,为MS疾病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据.
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音乐治疗对应激哮喘大鼠免疫功能的影响
目的 观察音乐治疗对应激哮喘大鼠血清皮质醇(COAT)、肺泡灌洗液白细胞介素-4(IL-4)及脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)平的影响,探讨音乐治疗对应激哮喘大鼠免疫功能的影响.方法 健康成年Wistar雄性大鼠32只,随机分为4组:正常对照组、哮喘模型组、应激哮喘组和音乐治疗组.用卵蛋白激发哮喘与束缚应激建立应激哮喘大鼠模型,以Mozart音乐作为缓解应激的方法.放射免疫法测定大鼠血清皮质醇、肺泡灌洗液IL-4及全脑IL-1β的含量.结果 哮喘模型组IL-4含量明显高于正常对照组(P<0.05),应激哮喘组大鼠IL-4含量高于哮喘模型组(P<0.05),而音乐治疗组IL-4含量较应激哮喘组明显减少(P<0.05).另外,应激哮喘组血清皮质醇水平较正常对照组著升高(P<0.05),音乐治疗组与应激哮喘组比较,血清皮质醇水平明显下降(P<0.05).应激哮喘组脑组织IL-1β含量高于正常对照组(P<0.05),其他各组无明显差异.结论 心理应激加重哮喘大鼠肺组织炎性变化;音乐治疗可改善外周和中枢免疫指标,对应激大鼠的哮喘可能有一定的缓解作用.音乐治疗哮喘的可能机制是通过减少内源性皮质醇的释放,抑制Th2细胞的活化,从而减少IL-4的合成.
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Wnt/β-catenin信号传导途径在肺癌细胞A549中的作用
目的 研究Wnt/β-catenin信号传导途径在肺腺癌细胞系A549中的激活及其作用.方法 用不同浓度的GSK-3β抑制剂Licl作用A549细胞,采用免疫组化法对β-catnin的细胞内表达定位,采用MTT细胞增殖实验观察细胞增殖活性,用克隆形成实验观察克隆形成能力,用Western blot检测β-catenin和干细胞分子标志OCT-4的表达.结果 10mmol/L Licl作用24h,A549细胞中的β-catenin表达增加并出现核转移,同时增殖能力与克隆形成能力增强,干细胞标记蛋白OCT-4的表达增加.结论 Wnt/β-catenin信号通路在维持A549细胞增殖和克隆形成能力及增强OCT-4的表达方面有着重要作用,可为肺癌治疗提供新的靶点.
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PDCD4转染卵巢癌细胞系基因表达谱的变化
目的 探讨卵巢癌细胞系SKOV3稳定表达程序性细胞死亡4(PDCD4)基因后基因表达谱的变化.方法 将pDsRed2-N1-PDCD4真核表达载体和pDsRed2-N1空载体分别转染至SKOV3并获得稳定细胞系,应用基因芯片技术分析PDCD4基因转染后基因表达的变化,RT-PCR检测基因的表达以验证芯片结果.结果 PDCD4转染SKOV3后引起大量基因表达的变化,表达明显差异基因共有467个,其中上调255个,下调212个;RT-PCR验证选取的5个基因的表达差异和芯片显示的结果一致.结论 成功筛选出PDCD4基因转染卵巢癌细胞系SKOV3后的差异表达基因,为进一步研究PDCD4的抑癌作用机制提供了实验依据.
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手机辐射对孕鼠及子代血清免疫球蛋白的影响
目的 研究手机辐射对血清中免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgC)、免疫球蛋白M(IgM)含量的影响.方法 32只受孕大鼠随机分为对照组及低、中、高强度组(实验组),孕鼠每次接受手机辐射分别为0、10、30、60min.自受孕日起,每日辐射3次,连续辐射21d,待孕鼠正常分娩后,将孕鼠及24h内新生鼠断头处死,测定其外周血中IgA、IgG、IgM的含量.结果 孕鼠及新生鼠外周血中IgG含量低强度组和中强度组升高,高强度组有所下降,各实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);IgA含量各实验组均有下降,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);IgM含量实验组均有下降,低强度组和中强度组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),高强度组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 孕鼠在孕期接受手机辐射一定时间,对孕鼠及新生鼠外周血中免疫球蛋白含量均会产生一定的损害.
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静脉吸毒者艾滋病自愿咨询检测的影响因素及对培训核心同伴推广检测的态度
目的 探讨静脉吸毒者接受艾滋病自愿咨询检测服务的影响因素;了解静脉吸毒者和关键知情人对利用培训核心同伴传播相关信息推广检测的态度,为大限度地早期发现感染者、有效防治艾滋病提供依据.方法 采用定性研究方法,对四川省达州市大竹县和通川区静脉吸毒者及关键知情人进行了定性访谈.结果 目前静脉吸毒者的艾滋病自愿咨询检测仍面临许多障碍,诸如怕暴露吸毒行为、担心出现阳性结果、害怕社会歧视、害怕被公安部门制裁、担心结果被泄露和认为不可能感染艾滋等.检测动因是关注自身健康、怕传播给家人、受家人同伴影响和希望得到误工费等.所有被调查者均一致认为培训核心同伴传播相关信息是提高检测的有效办法.结论 静脉吸毒者接受艾滋病自愿咨询检测存在一定的障碍及动因,应尽可能消除障碍,并利用动因来创建艾滋病自愿咨询检测的友好环境;静脉吸毒者和关键知情人对通过培训核心同伴宣传相关信息提高检测率均持积极态度.
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网膜素-1、内脂素与新诊断2型糖尿病患者动脉粥样硬化的相关性
目的 测定新诊断的2型糖尿痛(T2DM)及T2DM伴动脉粥样斑块患者的血清网膜素-1与内脂素水平,探讨网膜素-1、内脂素与糖尿病动脉粥样硬化的关系.方法 66例新诊断的T2DM患者行颈、髂、股动脉血管超声检查,按是否伴有动脉粥样斑块分为糖尿病斑块组(n=34)与糖尿病非斑块组(n=32).另取年龄与性别相匹配的32例健康人为对照组.三组均检测各项人口学指标及代谢性指标,采用ELISA法检测空腹血清网膜素-1、内脂素水平.各组之间进行统计学分析,探讨网膜素-1、内脂素与糖尿病伴动脉粥样硬化的关系.结果 与对照组相比,糖尿病患者血清网膜素-1水平明显偏低,血清内脂素水平明显偏高(P均<0.05).糖尿病斑块组血清网膜素-1水平明显低于糖尿病非斑块组(P<0.05),血清内脂素水平两组无明显差异(P>0.05).血清网膜素-1水平与低密度脂蛋白、体质量、体质重指数、腰围、臀围、空腹血糖的对数[In(FBG)]呈负相关(P<0.05).血清内脂素水平与年龄、空腹胰岛素的对数[ln(FINS)]、低密度脂蛋白、胰岛素抵抗指数的对数[ln(HOMA-IR)]、ln(FBG)呈正相关(P<0.05).结论 血清网膜素-1、内脂素与T2DM密切相关;血清网膜素-1与早期T2DM动脉粥样硬化的发生发展存在明显相关性.
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2型糖尿病患者糖化血红蛋白达标率及影响因素现状调查
目的 了解2型糖尿病(T2DM)患者糖化血红蛋白(HbAlc)达标率及其影响因素现状,分析HbAlc控制与其慢性合并症、并发症的关系.方法 采用横断面调查方法,收集T2DM现患病例353例.由经过统一培训的调查员采用问卷调查的方式收集患者一般信息、自我管理信息、治疗方案、合并症及并发症信息、血糖、HbAlc值等.根据HbAlc水平将患者分为达标组(HbAlc<6.5%,78例)和未达标组(HbAlc≧6.5%,275例).结果 ①HbAlc达标率为22.1%;②未达标组合并脑血管疾病、并发糖尿病视网膜病变的比率明显高于达标组(P<0.001,P=0.008);③39.3%患者血糖监测频率≧4次/月,10.8%患者HbAlc监测频率≥3次/年,5.8%患者血糖监测频率≧4次/月且HbAlc监测频率≥3次/年,患者知晓糖尿病知识、控制饮食、规律运动的比例分别为35.4%、31.4%、53.1%.结论 目前T2DM患者的HbAlc达标率低,HbAlc控制与糖尿病合并症、并发症有关,提示应通过加强个性化的糖尿病教育提高患者自我管理意识,尤其加强血糖、HbAlc监测力度及饮食和运动管理.
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早期2型糖尿病患者血清Apelin水平与动脉粥样硬化的相关性
目的 探讨在早期2型糖尿病(T2DM)患者中,血清Apelin水平与动脉粥样硬化的相关性.方法 收集60例病程小于3年的新发或新诊断的T2DM患者,行颈动脉、髂总动脉及股动脉超声检测有无动脉粥样硬化斑块,根据超声检测结果将其分为糖尿病斑块组(n=30)及糖尿病非斑块组(n=30),选年龄性别相匹配的正常人32例做对照.常规生化检测各项代谢性指标;采用酶联免疫吸附法测定各组血清Apelin水平,并进行统计分析.结果 糖尿病斑块组及糖尿病非斑块组患者血清Apelin水平均显著高于正常对照组(P<0.05);糖尿病非斑块组患者血清Apelin水平明显高于糖尿病斑块组患者(P<0.05).多元逐步回归分析表明血清Apelin水平主要受胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血清胆固醇(TC)水平影响,而Logistic回归则显示血清Apelin水平升高可能是早期T2DM患者动脉粥样硬化的保护性因素.结论 早期T2DM患者中,血清Apelin水平的降低可能是动脉粥样硬化发生的预报因子,Apelin可能是动脉粥样硬化的保护性因素.
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褪黑素脂质体的制备及理化性质研究
目的 制备褪黑素脂质体并考察其理化性质.方法 采用薄膜分散法制备褪黑素脂质体,在单因素考察基础上.采用均匀试验设计优化佳处方和工艺;透射电镜下观察外观形态,激光散射测定Zeta电势和粒度分布,低温高速离心法分离脂质体与未包封的药物,UV法测定包封率与载药量,膜动态透析法探讨其体外释药特性.结果 均匀试验设计优化的佳处方为药脂比1:25,磷脂和胆固醇比10:1,温度40℃,佳处方制备的脂质体为封闭的多层囊状或多层圆球体,大小均匀,平均粒径为(5.542±0.04)μm,Zeta电势为-31.68mV,包封率为(77.23±2.51)%,栽药量为(3.60±0.29)%.体外释放可延长至72h,释放特性符合双相动力学方程(r_α=0.988 6和r_β=0.9874).结论 采用薄膜分散法制备的褪黑素脂质体,包封率较高,体外释药有明显的缓释效果.
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正交设计优化川芎嗪乳酸-羟基乙酸共聚物微球处方与制备工艺
目的 制备川芎嗪PLGA微球并考察其物理化学性质及体外释药性.方法 采用O/W型乳化-溶剂挥发法制备川芎嗪PLGA微球,正交试验设计优化处方组成和制备工艺,对微球的外观形态、粒径及粒度分布、包封率和载药量等理化性质进行了检测.结果 以优化处方制备的川芎嗪PLGA微球为圆球形,粒度分布较均匀,平均粒径为(10±2.2)μm,包封率为(81.36±1.15)%,载药量为(8.2±0.43)%,药物体外释放可延长至768h,释药特性符合Weibull方程,经差示扫描量热法(DSC)分析证明,形成了新的物相,表明载药微球确已形成.结论 采用O/W型乳化-溶剂挥发法制备的川芎嗪PLGA微球包封率和栽药量高,粒径均匀,具有明显的缓释作用.
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胃癌早期诊断的新技术
胃癌是全世界常见的癌症之一,占癌症死因的第二位.大约有三分之二的胃癌患者是在发展中国家,而将近一半是在中国.胃癌在全世界范围内总体5年生存率约为20%~([1]).
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2009年山东省消化内镜治疗技术演示研讨会纪要
2009年山东省消化内镜治疗技术演示研讨会于11月13～14日在山东济南召开.
| 年 | 期数 |
| 2019 | 02 03 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 z1 z2 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2011 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 |
