重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12-Fc融合蛋白载体的构建和表达
摘要： 目的 用pIRES2-EGFP-Fc载体构建重组人RNA聚合酶Ⅱ转录调节物12(MED12)-Fc真核表达质粒,转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞表达MED12-Fc融合蛋白,纯化和鉴定MED12-Fc.方法 根据GenBank中的序列信息,从基因组上扩增出人MED12基因第2、3和4外显子,并通过Overlap聚合酶链反应(PCR)拼接获得目的基因片段,以pIRES2-EGFP-Fc真核表达质粒为载体,构建重组人MED12-Fc真核表达质粒.使用脂质体瞬时转染293T细胞,48 h收集上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定质粒的表达能力.表达质粒电转CHO细胞,通过G418抗性筛选及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达的稳定细胞株.使用稳定细胞株培养表达人MED12-Fc融合蛋白,收集上清液,用Proein A亲和纯化柱纯化蛋白.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)检测蛋白质分子量.结果 通过DNA测序和瞬时转染表达鉴定,证实MED12第2、3和4外显子基因序列正确,成功获得重组人MED12-Fc真核表达质粒.通过电转化、G418及流式细胞仪荧光筛选,获得高表达重组人MED12-Fc的稳定表达细胞株.通过细胞培养,亲和层析纯化,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白.结论 成功构建MED12-Fc融合蛋白的表达载体,获得高纯度的重组人MED12-Fc融合蛋白,为进一步研究MED12蛋白功能奠定基础.
-
社区高血压人群的监控管理及治疗研究
该文报告1 026例高血压患者在社区接受监控管理治疗,并与995例高血压患者采用随意治疗进行对照研究,连续随访观察10年,结果:监控管理治疗组累计减少心血管事件发生59.96%,心血管事件发生的平均年龄较对照组明显推后6.9岁.说明在社区对高血压人群实施监控管理治疗是保证高血压患者长期有效治疗的方法,值得进一步推广.
-
糖尿病并脂肪肝的超声诊断及其与血脂含量相关性分析
测定了62例Ⅱ型糖尿病患者的血脂含量并观察了肝脏超声的显像.结果发现,肥胖型糖尿病患者存在明显脂代谢障碍,血胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)与对照组相比差异显著(P＜0.01);与非肥胖型糖尿病相比,血TG明显增高(P＜0.01).38例肥胖型糖尿病患者中36例并有脂肪肝.说明脂肪肝除与高血糖因素有关外,还与肥胖、高TG血症密切相关.观察还发现,肥胖型糖尿病患者大血管病变的发生率也明显高于非肥胖型(P＜0.01).
-
老年人颅内血肿的诊治特点
该文报告14年间收治的60岁以上老年人创伤性颅内血肿72例的临床特征和诊治体会.其中67例进行了手术治疗,手术死亡率达40.3%,分析了导致高死亡率的可能因素,强调早期手术治疗、积极防治并发症及加强术后观察的重要性.
-
早期心肌再梗塞27例临床分析
为早期心肌再梗塞的诊治提供一些实践经验,总结了27例再梗塞患者的诊断依据、临床资料、治疗方法和结果.诊断依据为再发胸痛、ECG变化和血清酶再升高.再梗塞发病率为7.6%,其严重并发症和住院病死率都较无再梗塞患者显著增高,是影响AMI预后的重要因素.确诊后按初始心肌梗塞同样地进行监测和治疗.有适应证的远离原梗塞部位的再梗塞可经静脉用尿激酶溶栓治疗.治愈18例,死亡9例,均死于严重并发症.加强对AMI患者的观察和监测,是发现再梗塞的关键;处理AMI后的低血压、严重心律失常和心力衰竭是防治梗塞延展的重要措施.
-
"带盖"结肠造口术的临床应用
为了提高永久性结肠造口患者的生活质量,设计了一种以舌状皮瓣与造口结肠舌状上肠瓣缝合在一起为"盖"的结肠造口术.结果:19例病人术后没有并发症、皮瓣覆盖造口,排便通畅,开盖容易,感觉满意.结论:"带盖"结肠造口术设计合理,手术操作易行,患者生活质量好.
-
Hoffer和Kaufer手术治疗儿童脑瘫痉挛性马蹄内翻足畸形
从1989～1995年对19例脑瘫患儿共32足施行Hoffer和Kaufer手术.术后平均随访5年6月(1年9月～5年7月),Hoffer手术4足,结果优2足、良1足、差1足;Kaufer手术25足,结果优17足、良5足、差3足.倘若除外Hoffer和Kaufer各有1例共4足,其畸形纠正,因无平衡功能属差外,临床效果满意.对在无步态肌电图情况下如何选择手术方式进行了讨论.建议4岁以下儿童不宜行此手术.
-
益脂灵颗粒降脂作用的实验研究
用该所研制的益脂灵颗粒观察其对大白鼠及家兔高脂血症模型的作用,结果表明有显著的降低血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)及低密度脂蛋白(LDL)的作用.
-
骨巨细胞瘤组织中Rb,c-erbB-2蛋白表达的研究
应用免疫组化方法研究58例骨巨细胞瘤(GCTB)组织切片的Rb、c-erbB-2蛋白表达及意义.GCTB组织中Rb蛋白表达阴性者共43例(74%),c-erbB-2蛋白过度表达者18例(31%).Rb、c-erbB-2蛋白在病理分级各级中的表达无显著差异,在Enneking外科分期各期中的表达亦无显著差异.58例GCTB组织中,Rb、c-erbB-2蛋白至少一个表达异常者共48例(83%),两者均异常者13例(22%).结果提示:Rb蛋白失活、c-erbB-2蛋白过度表达与GCTB的发生可能有关;部分GCTB发生可能与Rb蛋白及c-erbB-2蛋白过度表达的协同作用有关.
关键词： 骨巨细胞 Rb蛋白 C-erbB-2蛋白 癌基因 免疫组织化学 -
呼吸科病房空气检测与对策
该文对呼吸病房空气进行了检测,结果表明污染的空气中存在有:绿脓杆菌、表皮葡萄球菌、不动杆菌、腐生葡萄球菌、克雷白菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等.其中以绿脓杆菌检出率高,而此菌又是威胁呼吸系统疾病患者严重的病菌,根据检测采用有效的预防措施,以降低了医院感染的危险因素.
-
新生儿呼吸机应用中肺不张的预防措施
该院儿科新生儿病房自1996年6月～1997年12月使用新一代人工呼吸机抢救危重新生儿,在机械通气中采取了一系列措施预防肺不张,在治疗的18例新生儿中,仅1例发生肺不张,发生率5.56%.具体预防措施:选用比一般略细不带密封气囊的气管导管;气管内冲洗及气管内温湿化;加强胸部物理治疗;机械通气加用PEEP,以防呼气终末肺泡萎陷;撤机、拔管前后的处置(静脉推注地塞米松、吸痰、雾化、拍背、翻身)等.
