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大鼠心肌细胞钙调磷酸酶Aβ基因的克隆与真核表达

曹威;栾颖;于波;尹新华

摘要: 目的 从原代培养的大鼠心肌细胞中扩增钙调磷酸酶( Calcineurin,CaN)Aβ cDNA序列,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CaN,并检测其表达情况,为进一步研究CaN及其在心肌损伤的信号转导途径中的作用奠定基础.方法 用RT-PCR方法从原代培养的大鼠心肌细胞RNA中扩增出CaN A β cDNA序列,测序后将其用限制性内切酶双酶切,然后与真核表达质粒pcDNA3.1(+)进行连接,再转化DH5α,将鉴定为阳性的真核表达质粒转染人胚肾293T细胞,用免疫荧光细胞化学技术检测其表达情况.结果 ①将鉴定为阳性的质粒进行测序后,所测序列结果与GeneBank的CaNAβ基因序列同源性达到91.7%;②真核表达载体pcDNA3.1-CaN转染293T细胞后经免疫荧光细胞化学染色检测到钙调磷酸酶基因在人胚肾293T细胞中表达.结论 正确克隆出了大鼠心肌细胞CaNAβ基因并建立了CaNAβ基因的真核表达栽体pcDNA3.1-CaN.

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