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靶向结肠癌 SW620细胞 ZEB2-shRN A重组体构建及功能研究
目的：利用RNA干扰技术，降低结肠癌SW620细胞中E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）基因的表达，观察ZEB2低表达对SW620细胞的生长影响。方法：用pLVX‐shRNA2载体构建针对人ZEB2基因的干扰质粒shZEB2慢病毒感染细胞，G418筛选稳定转染细胞株，通过RT‐PCR和Western blot检测ZEB2在SW620细胞中表达。采用克隆形成检测转染细胞克隆能力，划痕试验检测转染细胞的迁移力，RT‐PCR检测转染细胞ZEB2基因表达水平，致瘤试验检测转染细胞在裸鼠的致瘤性。结果：成功构建 shZEB2稳定转染的细胞株，shZEB2‐SW620内ZEB2表达下降，导致shZEB2‐SW620在细胞克隆能力、迁移力及致瘤性方面均下降（P＜0．05）。结论：用RNA干扰技术可以靶向降低结肠癌细胞株SW620内ZEB2的表达，使其致瘤性降低，提示ZEB2可作为分子靶点用于结肠癌靶向治疗。
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上皮性卵巢癌中E盒结合锌指蛋白2和转化生长因子β1的表达及其预后的关系
目的 研究上皮性卵巢癌中E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及预后意义.方法 采用免疫组化SP法检测52例上皮性卵巢癌、23例卵巢良性上皮性肿瘤和15例正常卵巢组织中ZEB2和TGF-β1的表达,分析二者在卵巢上皮癌中的相关性及与临床病理特征和预后的关系.结果 ZEB2和TGF-β1在上述三种组织中均定位于细胞质,其阳性表达率分别为67.3％、21.7％、13.3％和71.2％、30.4％、20.0％,差异均有统计意义(x2=21.34、18.087,p均＜0.05);ZEB2和TGF-β1在卵巢上皮癌中的表达存在正相关(rs=0.552,P＜0.05),且与分化程度、FIGO分期有关(P＜0.05),与年龄、病理类型无关(P＞0.05);ZEB2和TGF-β1表达与卵巢上皮癌患者总生存率有关(P＜0.05);COX风险比例模型显示ZEB2阳性表达是预后危险因素(OR=2.653,P＜0.05).结论ZEB2和TGF-β1可能促进上皮性卵巢癌进展,ZEB2可能作为评估预后的新指标.
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miR-192与ZEB2在结直肠癌中的表达及其临床意义
背景与目的：微小RNA(microRNA，miRNA)是一类具有重要调控作用的非编码小分子RNA，在多种疾病的发生、发展中起重要作用。本研究通过检测结直肠癌(colorectal cancer，CRC)组织中miR-192及E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2，ZEB2) mRNA、蛋白表达，分析miR-192的异常表达与CRC的临床病理特征的关系及与ZEB2的相关性。方法：选择CRC组织和癌旁组织(距肿瘤边缘≥5 cm)各30例，结直肠腺瘤组织25例，正常结直肠组织15例。实时定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reation，qRT-PCR)法检测上述各组中miR-192及ZEB2 mRNA表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测ZEB2蛋白表达；对CRC组织中miR-192与临床病理特征关系及前者与ZEB2的相关性进行分析。结果：CRC组miR-192表达明显下调，ZEB2 mRNA和蛋白表达明显上调，分别与癌旁组、结直肠腺瘤组及正常组相比，差异均有统计学意义(P<0.05)；miR-192的表达下调与CRC的淋巴结转移(P=0.021)和远处转移(P=0.023)相关。在CRC组织中，miR-192与ZEB2蛋白的表达呈显著的负相关关系(r=-0.365，P<0.05)。结论：miR-192在CRC组织中的表达下调与肿瘤的转移有关，且可能通过ZEB2参与CRC的发生、发展过程。
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Gli-1、ZEB2蛋白在结肠癌组织中的表达变化及意义
目的 探讨Gli-1、E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)蛋白在结肠癌发生、发展中的作用.方法 选择结肠癌组织标本(结肠癌组)和相应癌旁正常结肠组织标本(癌旁组)各38例份,同期正常结肠组织10例份(正常对照组).采用免疫组化SP法检测各组Gli-1、ZEB2蛋白表达,分析其与结肠癌患者临床病理参数的关系,分析结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达的相关性.结果 结肠癌组Gli-1蛋白阳性表达23例份(60.5％),癌旁组为5例份(13.2％),正常对照组为1例份(10.0％);结肠癌组ZEB2蛋白阳性表达21例份(55.3％),癌旁组为13例份(34.2％),正常对照组为2例份(20.0％);结肠癌组Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达率均高于癌旁组和正常对照组(P均＜0.05),癌旁组和正常对照组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白阳性表达与患者的TNM分期、淋巴结转移均有关(P均＜0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、分化程度均无关(P均＞0.05).结肠癌组织Gli-1与ZEB2蛋白表达呈正相关(r=0.723,P＜0.01).结论 结肠癌组织Gli-1、ZEB2蛋白表达升高,其异常表达可能与结肠癌的发生、发展有关.
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E-钙黏附蛋白和E盒结合锌指蛋白2在非小细胞肺癌中表达及预后
目的 探讨E-钙黏附蛋白(epithelia-cadherin,E-cadherin)和E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及预后意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测E-cadherin蛋白和ZEB2蛋白在144例NSCLC患者肺癌组织(NSCLC组)及52例NSCLC患者癌旁＞5 cm的正常肺组织(对照组)中的表达情况,应用Cox回归模型分析预后影响因素.结果 NSCLC组ZEB2蛋白表达率(78.5％)高于对照组(11.5％),而E-cadherin蛋白表达率(34.0％)低于对照组(100.0％),差异均有统计学意义(P＜0.05);NSCLC组ZEB2、E-cadherin蛋白阳性表达率在肿瘤分化程度、TNM分期和淋巴结转移上差异有统计学意义(P＜0.05);NSCLC组ZEB2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.444,P=0.000);多因素Cox回归分析显示ZEB2、E-cadherin的表达水平可作为NSCLC预后的独立因素.结论 ZEB2在NSCLC中表达上调,致使E-cadherin蛋白表达下调,从而使肿瘤浸润和转移能力增强,终导致预后不良.
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宫颈癌组织中 ZEB2和 E-cad蛋白的表达
目的：探讨E盒结合锌指蛋白2（ ZEB2）和E-钙黏附蛋白（ E-cad）在宫颈癌组织中的表达情况及与预后的关系。方法：用免疫组化SP法检测144例宫颈癌和26例正常宫颈黏膜组织中ZEB2和E-cad蛋白的表达，并对随访资料进行预后分析。结果：宫颈癌和正常宫颈黏膜组织中ZEB2蛋白的阳性表达率分别为83．3％（120/144）和11．5％（3/26）（χ2＝56．750，P＜0．001）；E-cad蛋白的阳性表达率分别为29．2％（42/144）和100．0％（26/26）（P＜0．001）。 ZEB2、E-cad蛋白表达与宫颈癌的分化程度、FIGO分期及淋巴结转移均有关（P均＜0．05）。宫颈癌组织中ZEB2与E-cad蛋白表达有关联（rp ＝0．411，P＜0．001）。 FIGO分期（RR＝1．788，95％CI 1．239～2．580）、淋巴结转移（RR ＝1．702，95％CI 1．181～2．453）、E-cad 表达（RR＝0．572，95％CI 0．369～0．888）及 ZEB2表达（RR＝1．810，95％CI 1．046～3．131）可作为宫颈癌预后的独立因素。结论：ZEB2和E-cad可能会促进宫颈癌的发展、浸润和转移，可作为预测宫颈癌预后的新指标。
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食管鳞癌预后与E盒结合锌指蛋白2和E-钙黏蛋白表达的关系
目的 探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及预后意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测ZEB2和E-cadherin在218例ESCC患者癌组织(ESCC组)及60例ESCC患者癌旁＞5 cm的正常食管组织(对照组)中的表达,应用Cox回归模型分析预后影响因素.结果 ESCC组ZEB2表达率35.3％ (77/218)高于对照组18.3％(11/60)(x2=6.276,P=0.012),而E-cadherin表达率45.8％(100/218)低于对照组66.7％ (40/60)(x2=8.139,P=0.004),差异均有统计学意义(P＜0.05);ESCC组ZEB2与E-cadherin表达呈负相关性(r=-0.440,P=0.000);ESCC组ZEB2阳性表达率在肿瘤浸润深度(x2=4.104,P=0.043)、淋巴结转移(X2=10.640,P=0.001)和TNM分期(x2=11.080,P=0.001)密切相关;采用Cox比例风险模型分析显示ZEB2阳性表达可作为ESCC预后的独立因素.结论 食管鳞癌ZEB2阳性表达与上皮-间充质转化发生有关,且是预后不良的重要因素.
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E盒结合锌指蛋白2对非小细胞肺癌预后的意义及其介导的多药耐药机制
目的 探讨E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对非小细胞肺癌(NSCLC)预后的意义及介导的多药耐药机制.方法 选取72例NSCLC患者癌组织及癌旁组织,免疫组织化学染色检测组织ZEB2的表达,分析ZEB2表达与NSCLC患者临床资料及生存预后的关系.按照转染类型将细胞分为3组:ZEB2-siRNA组、ZEB2-NC组和空白对照组(Mock).采用小干扰RNA(siRNA)技术降低A549细胞ZEB2表达,分别采用不同浓度顺铂、紫杉醇处理A549细胞,CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,Western blot检测细胞耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)表达.结果 ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率为77.8%(56/72),癌旁组织阳性表达率为23.6%(17/72),ZEB2蛋白在癌组织阳性表达率高于癌旁组织(<0.01).肿瘤直径≥5 cm组ZEB2阳性表达率高于肿瘤直径<5 cm组,Ⅲ、Ⅳ期组ZEB2阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ组,淋巴结转移组ZEB2阳性表达率高于无淋巴结转移组,中低分化组ZEB2阳性表达率高于高分化组,各组间比较差异有统计学意义(<0.05).ZEB2阳性组总生存率和无病生存期低于阴性组(<0.05).Mock组、ZEB2-NC组和ZEB2-siRNA组细胞存活率均随化疗药物浓度增加而降低,其中ZEB2-siRNA组细胞存活率低于ZEB2-NC组(=0.000).经Cisplatin、Paclitaxel处理后,与Mock组、ZEB2-NC组比较,ZEB2-siRNA组细胞凋亡率增加,G0/G1期所占百分率降低,S期所占百分率升高,组间比较差异有统计学意义(=0.000).ZEB2-siRNA组P-gp、LRP蛋白表达水平低于Mock组和ZEB2-NC组(=0.000),ZEB2-NC、Mock组P-gp、LRP蛋白表达比较差异无统计学意义(>0.05).结论 NSCLC组织ZEB2表达上调,抑制ZEB2可以降低耐药蛋白P-gp、LRP表达,并逆转肺癌的多药耐药特性.
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E盒结合锌指蛋白2抑制乙型肝炎病毒的复制和表达
目的 研究转录因子E盒结合锌指蛋白2 (ZEB2)对HBV复制和表达的影响. 方法 分别培养HepG2、HepG2.2.15和HepAD38细胞,Western blot检测ZEB2表达水平.培养HepG2.2.15细胞,转染ZEB2表达质粒或针对ZEB2的shRNA,采用Western blot检测ZEB2和HBV核心蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测HBV 3.5 kb RNA和HBV DNA,Southern blot检测HBV复制中间体,酶联免疫吸附法检测HBsAg和HBeAg表达水平,明确ZEB2对HBV复制表达的影响.采用双荧光素酶报告系统检测ZEB2对HBV启动子的影响,染色质免疫共沉淀法检测ZEB2与HBV启动子的结合情况.组间均数比较采用Student t检验. 结果 在HBV复制的细胞中,ZEB2表达受到抑制.过表达ZEB2可使HBV复制和表达水平下降约50％,差异有统计学意义(P＜0.05).采用shZEB2-1和shZEB2-2下调ZEB2后,HBV复制中间体的相对表达量由58.53±3.43分别上升到112.80±5.03、128.30±2.31,HBV 3.5kb RNA的相对表达量由1.00±0.01分别增加到2.03±0.02、2.32±0.03,HBsAg的相对表达量由35.63％±1.57％分别上升到81.87％±0.43％、100.00％±2.18％,HBeAg的相对表达量由37.00％±0.70％分别上升到88.00％±2.60％、100.00％±0.75％.ZEB2可以抑制HBV核心启动子的转录活性,并可与HBV核心启动子结合.结论 ZEB2通过结合HBV核心启动子并抑制其转录活性,从而抑制HBV的复制和表达.
