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免疫磁珠富集-实时荧光PCR技术在食源性致病菌监测中的应用研究
目的 建立单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌3种致病菌的免疫磁珠富集-实时荧PCR(IMS-qPCR)技术的检测方法,应用于食品微生物及其致病因子的监测工作中.方法 将菌株及样品稀释后,使用IMS-qPCR技术进行检测,用菌株对该方法的特异性进行验证;对586份各类食品用IMS-qPCR和传统培养法进行比较分析.结果 IMS-qPCR方法对13株标准菌株符合率为100.00％;与分离到的3种致病菌的符合率均为100.00％;586份监测食品的检测结果显示,IMS-qPCR方法对食品中3种食源性致病菌的符合率为93.22％,而IMS-qPCR法可在2～3h内获得检测结果.结论 IMS-qPCR方法可以推广应用于食品微生物及其致病因子的监测,该方法具有特异性强、敏感度高、速度快的特点,也可以应用于突发公共卫生事件应急检测,为事件的处置提供有效技术支撑.
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免疫磁珠富集技术进展
免疫磁珠富集技术,是以磁性微球作为固相表面,结合免疫学方法建立起的一门具有重要应用前景的样品富集手段.具有磁性的微颗粒通过结合特定抗体,在液相中能特异性地与相应抗原结合,依靠磁场的作用力快速地使所需样品量得到大大的浓缩.由于免疫磁珠富集法具有快速及特异性强的特点,在三十余年的发展中,已广泛应用于分离及浓缩特定细胞、微生物、蛋白质和核酸片段等肉眼难以观察或样品中含量不高的物质.其应用也随着各个科学领域的发展而日趋全面和深入[1].随着抗体技术的发展,免疫磁珠富集技术已成为细胞分选和蛋白质组学研究的重要技术支持.除此,鉴于免疫磁珠富集法有助于降低原有检测手段的检测限,其应用于食品致病微生物和环境、食品中小分子毒害物的检测将大有发展前景.
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食源性沙门菌PCR检测方法的建立
目的 进一步探索食源性沙门菌的快速检测方法.方法 本研究通过现代免疫磁珠技术和PCR检测技术建立了一套“磁珠富集+ PCR检测”的快速高效PCR检测系统.结果 该系统的方法灵敏度可以达到103拷贝/μl,准确度为100％,与常规PCR检测方法相比,具有较高的准确度和检测灵敏度并且该系统通过免疫磁珠富集技术,将冗长繁琐的前处理时间缩短为8h.结论 该检测系统方法的建立,为探索解决食源性微生物检测中的前处理难题提供了新的解决思路,为开发具有更好市场应用潜质的快速检测试剂盒奠定了技术基础.
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乳腺癌患者外周血中循环癌细胞的检测及其临床意义
背景与目的:近年来,免疫细胞化学和免疫磁珠富集技术已应用于检测乳腺癌患者外周血中癌细胞.本研究拟探索一种全新的改良免疫磁珠富集联合免疫荧光细胞化学技术,检测乳腺癌患者外周血中循环癌细胞,并探讨其临床应用的意义.方法:通过放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本检测方法的敏感度.取52例初治乳腺癌患者和20例健康女性志愿者的外周血,分离其单个核细胞,通过与磁珠共价结合的表皮细胞粘附分子(EpiCAM)抗体富集外周血中表达EpiCAM抗原的肿瘤细胞,并通过改良的免疫荧光细胞化学法检测细胞骨架蛋白CK8/18阳性的肿瘤细胞(呈绿荧光),并用DAPI标记细胞核(呈蓝荧光)进一步排除假阳性.结果:该改良方法敏感性较高,可在1×107的外周血单个核细胞中检测到一个肿瘤细胞.在20例健康志愿者的外周血中均未检测到CK8/18阳性细胞,特异性为100%.52例乳腺癌患者的外周血中有28例检测到CK+细胞,阳性率为53.8%.两组有显著性差异(P＜0.001).并初步证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状态呈正相关(P值分别为0.001和0.005).而与原发肿瘤大小、绝经前后、不同病理类型、不同的组织学分级、激素受体状况及C-erbB2的表达与否无明显相关性(P值均＞0.05).结论:改良免疫磁珠富集及免疫荧光细胞化学方法检测乳腺癌患者外周血中的循环癌细胞,简单方便,耗时较少,敏感性、特异性高,本法检测结果证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状况密切相关.
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改良IME-FICC方法对乳腺癌外周血微转移的检测
[目的]探讨一种改良IME-FICC(免疫磁珠富集-免疫荧光细胞化学)法检测乳腺癌外周血微转移癌细胞及其意义.[方法]通过与磁珠共价结合的表皮细胞黏附分子(EpCAM)抗体富集外周血中表达EpCAM的癌细胞,结合免疫荧光化学法检测细胞角蛋白(CK)8/18阳性的癌细胞(呈绿荧光).放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本方法癌细胞回收率及敏感度,检测20例正常女性志愿者及12例Ⅳ期乳腺癌患者治疗前的外周血标本,探索其特异性及临床应用可行性.[结果]免疫磁珠富集后癌细胞回收率达86%～93%,可在107外周血单个核细胞中检测到1个癌细胞,特异性为100%.Ⅳ期乳腺癌患者外周血中CK8/18阳性细胞检出率75%.[结论]改良IME-FICC法是一种简便、省时、敏感性及特异性高的检测方法,有较大的临床应用前景.
