首页 > 文献资料
-
大鼠循环血中血小板和内皮细胞来源微囊泡的检测
目的：建立流式细胞术对大鼠循环血中细胞微囊泡（MVs）的检测方法，并测定心肌缺血预适应（IPC）处理大鼠循环血中血小板来源的MVs（PMVs）及内皮细胞来源的MVs（EMVs）。方法大鼠经腹主动脉取血，枸橼酸钠抗凝，室温下经两步离心获得无血小板血浆（PFP）。PFP中分别加入FITC标记的血小板表面标志物CD61单抗或PE标记的内皮细胞表面标志物CD144单抗，采用1μm标准微球做粒径对照，2μm标准微球用于计数，流式细胞仪进行检测。结果3.5%枸橼酸钠与血液按体积比1∶4混匀，离心后可得均匀、清亮的上清。PFP中1μm以下粒子信号占全部信号的99%以上。PMVs和EMVs分别为CD61阳性和CD144阳性的粒子，直径均小于1μm。IPC处理大鼠循环血中PMVs、EMVs水平分别为（4053±1987）个/μL、（4870±825）个/μL。结论成功建立和优化了流式细胞术测定大鼠循环血中MVs的方法，并通过对IPC处理大鼠循环血中PMVs和EMVs的测定对MVs的检测方法进行了验证。
-
泽泻汤加味方对高盐高血压大鼠肾脏AQP-2表达的影响
目的：探讨泽泻汤加味方对高盐高血压大鼠肾脏水通道蛋白（AQP）-2表达的影响。方法以8%高盐饲料喂养的方法制备高盐高血压动物模型50只，造模成功后随机分为模型组，西药组，中药高、中、低组，各10只；另选10只普通饲料喂养大鼠为正常组。中药高、中、低组分别给予泽泻汤加味方混悬液16.2、10.8、5.4 g/(kg·d)；西药组给予缬沙坦氢氯噻嗪溶液16.65 mg/(kg·d)；模型组及正常组灌服等体积蒸馏水。均按每天1 mL/100 g灌胃，灌胃4周。于给药1、4、7、14、28 d时测定大鼠收缩压（SBP），并收集24 h尿量。用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测肾脏AQP-2蛋白和mRNA的表达。结果 SBP由高到低依次是：模型组＞中药中组和中药低组＞西药组和中药高组＞正常组，尿量由高到低依次是：西药组和中药高组＞中药中组和中药低组＞模型组＞正常组，中药中组与中药低组间、西药组与中药高组间差异无统计学意义。模型组肾脏AQP-2沿集合管内壁上皮细胞分布的棕黄色颗粒较正常组及中药高、中、低组明显颜色加深而浓厚，分布面积更广泛。除中药低组AQP-2 mRNA的表达水平与模型组差异无统计学意义外，其余各组均低于模型组，高于中药高组（均P＜0.05）。结论泽泻汤加味方可通过抑制AQP-2的高表达使血压降低。
-
大鼠骨髓间充质干细胞的分离鉴定及免疫调节性能初探
目的：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），鉴定其向脂肪细胞和软骨细胞的分化潜能，并探讨其免疫调节性能。方法无菌条件下摘取Sprague-Dawley（SD）大鼠股骨和胫骨，全骨髓贴壁法培养BMSCs，胰酶消化传代培养。待培养至第3代时进行流式鉴定，检测分离的BMSCs分化为脂肪细胞的潜能。与Wistar大鼠脾脏来源T细胞进行共培养，分为直接接触组和Transwell共培养组，探讨其对T细胞亚群的影响，并研究其相关机制。结果BMSCs呈梭形生长，生长至第3代的细胞经检测发现几乎不表达CD34和CD45，高表达CD29、CD44和CD90，且经诱导后细胞可分化为脂肪细胞和软骨细胞。与脾脏来源T细胞共培养可有效降低CD8+的效应T细胞（Teffs）的比例，并且增加CD4+CD25+双阳性的调节性T细胞（Tregs）数量，具有一定的免疫调节性能。与T细胞共培养后BMSCs的IL-10和TGF-β1基因表达显著增强，其中与T细胞直接接触组效果更为明显。结论 BMSCs可能通过直接接触以及分泌细胞因子来发挥免疫调节功能。
-
缺氧预处理对骨髓来源内皮祖细胞生物学功能的影响
目的：研究缺氧条件对骨髓来源内皮祖细胞（BM-EPCs）生物学功能的影响。方法经密度梯度离心法获得大鼠骨髓来源单核细胞，接种在包被有大鼠玻连蛋白的培养皿中，加入内皮细胞生长培养基-2，于常规培养条件（37℃、5%CO2）下培养，第4天时，弃去未贴壁细胞，全量更换新鲜培养基，随机分为常规培养组和缺氧培养组，常规培养组于常规培养条件下继续培养至第7天；缺氧培养组分别于常规培养的第4、5、6天，于缺氧培养条件（1%O2+5%CO2+94%N2）下继续培养72、48、24 h；细胞表面标志物检测并Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和FITC标记的荆豆凝集素1共同染色方法鉴定BM-EPCs，分别对各组培养至第7天的细胞进行内皮分化功能检测（Matrigel As-say）和抗凋亡检测（Annexin V/PI）。结果随着缺氧处理时间延长，BM-EPCs早期凋亡率增加明显。与常规培养组（0.89±0.20）%相比，缺氧培养24 h组早期凋亡率（1.33±0.07）%改变不明显（P>0.05），缺氧培养48 h组（3.25±0.12）%、72 h组（7.48±1.53）%，早期凋亡率明显增加（P<0.05）。与常规培养组比较，缺氧培养24 h组的体外血管形成能力增强（P<0.01），缺氧培养48、72 h组体外血管形成能力明显下降（P<0.01）。结论缺氧预处理BM-EPCs 24 h，BM-EPCs早期凋亡率增加不明显，细胞体外血管形成能力明显增强。
-
大鼠急性心肌梗死后期血清代谢轮廓研究
目的：建立急性心肌梗死（AMI）大鼠血清代谢轮廓模型，探寻对AMI预后及并发症具有临床治疗价值的特征代谢物。方法选取健康雄性Wistar大鼠20只，随机平均分为对照组和AMI 1周组。AMI 1周组进行冠状动脉前降支结扎，建立AMI模型，1周后心脏取血处死。利用代谢组学研究平台对大鼠的血液样本进行代谢轮廓分析，建立大鼠AMI后血液的正交偏小二乘判别模型及主成分分析模型，结合SPSS 19.0软件的数据处理终得到特征代谢产物。结果成功建立了主成分分析模型及正交偏小二乘判别模型，同时从模型中筛选并鉴定了27种在AMI 1周组与对照组具有差异的特征代谢物，在这27种特征代谢物中溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺等差异明显。结论构建的代谢轮廓模型很好地拟合了AMI后期大鼠机体的代谢紊乱状态，筛选出的特征代谢产物可为该疾病治疗以及并发症的预防等提供参考和帮助。
-
淫羊藿苷对体外培养骨髓基质细胞成骨性分化的影响
目的：探讨淫羊藿苷( icariin, ICA)在无成骨分化诱导剂存在的条件下对体外培养大鼠骨髓基质细胞( bone marrow stromal cells, BMSCs)成骨性分化的影响。方法取Wistar大鼠BMSCs,用1×10-5 mol/L ICA对BMSCs进行干预,实时定量聚合酶链反应(real time-PCR, RT-PCR)检测Ⅰ型胶原(Collagen-Ⅰ)和Runt相关转录因子2(runt-relat-ed transcription factor 2, Runx-2)mRNA的表达水平；蛋白质印迹(Western blot, WB)检测CollagenⅠ和Runx-2蛋白的表达水平；试剂盒法检测碱性磷酸酶( alkaline phosphatase, ALP)活性。结果 1×10-5 mol/L ICA能直接提高CollagenⅠ和Runx-2 mRNA和蛋白表达的BMSCs ALP活性。结论 ICA直接促进大鼠BMSCs成骨性分化,并不依赖地塞米松。
-
三七总皂苷配伍雷公藤多苷对胶原诱导关节炎大鼠心血管损伤的保护作用
目的：观察植物药有效成分三七总皂苷( PNS)与雷公藤多苷( TG)配伍对胶原诱导关节炎( CIA)大鼠血管和心肌损伤的保护效应。方法 Wistar大鼠50只中选6只为对照组,其余皮内注射鸡II型胶原建立CIA模型,成模后随机分为模型组、雷公藤多苷组( TG)、TG+PNS(三七总皂苷)组,每组6只。对照组、模型组生理盐水灌胃, TG组雷公藤多苷灌胃,TG+PNS组三七总皂苷配伍雷公藤多苷灌胃,共42 d。治疗结束后,腹主动脉取血,采用蛋白芯片技术检测白介素( IL)-6、纤溶酶原激活物抑制剂( PAI-l)含量；采血后立即开胸,取胸主动脉及心脏,进行病理学观察。结果模型组及TG组、TG+PNS组造模第21天、给药4、6周后体重及体重增加值明显低于对照组( P <0．01),PAI-1、IL-6表达明显高于对照组(P<0．01)；给药第4、6周TG+PNS组体重增加值明显高于模型组(P<0．05, P<0．01),血清PAI-1、IL-6水平显著降低(P<0．01),且PNS+TG组优于TG组(P<0．05)。模型组胸主动脉内皮不完整,可见炎细胞浸润、脂质沉积及泡沫细胞形成,心肌可见广泛炎性病变；TG组可见部分单核细胞、淋巴细胞等聚集,部分心肌细胞肥大；PNS+TG组内皮完整,未见明显病理改变,心肌仅见零星炎性细胞。结论 CIA大鼠存在心血管损伤,TG联合PNS在治疗关节炎的同时可能具有心血管保护作用。
-
朱日很滴丸对大鼠急性心肌缺血的影响
目的：观察朱日很滴丸是否对垂体后叶素诱导的大鼠急性心肌缺血有保护作用。方法将大鼠随机分为正常对照组，模型组，丹参滴丸阳性对照组，朱日很滴丸高、中、低剂量组，连续给药10 d ，采用大鼠颈静脉注射垂体后叶素注射液（3．75 mg/kg ）造成急性心肌缺血模型，记录各组大鼠给予垂体后叶素前后的心电图变化，同时测定血清及心脏组织匀浆上清液的乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）含量。结果朱日很滴丸能够显著增加垂体后叶素引起的5 s时心率的降低，300 s时T波幅度的降低；300，1500 mg/kg朱日很滴丸能显著降低模型大鼠ΔST变化幅度；低、中、高剂量组无明显的量效关系；各组大鼠血清、心脏组织匀浆CK、LDH含量没有显著差异。结论朱日很滴丸能显著改善急性心肌缺血大鼠的心电图异常，量效关系不明显。
-
甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜组织中黏蛋白5AC的影响
目的：观察甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中黏蛋白5 AC （MUC5AC）的影响。方法：将72只Wistar大鼠分为正常对照组（12只）和造模组（60只），卵清蛋白致敏Wistar大鼠建立变态性鼻炎动物模型。造模成功后，大鼠随机分为模型对照组、氯雷他定组和甲基丁香酚小、中、大剂量组（10 mg／kg、20 mg／kg、40 mg／kg ），各组给药干预，分别在干预1周、2周、4周和6周后取材，采用免疫组织化学检测和实时定量PCR检测MUC5 AC mRNA及其蛋白的表达。结果：MUC5 AC蛋白阳性表达细胞百分率及MUC5 AC mRNA表达量小剂量组在整个干预过程中与模型对照组差异无统计学意义（均P＞0.05）；大、中剂量组分别在干预2周和4周后明显减少，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；氯雷他定组在干预1周后明显减少，差异有统计学意义（ P＜0.05）。与氯雷他定组MUC5 AC蛋白阳性表达细胞百分率比较：中剂量组在干预6周后依然较高（P＜0.05），大剂量组在干预6周后差异无统计学意义（ P＞0.05）。与氯雷他定组MUC5 AC mRNA表达量比较，大、中剂量组在干预4周后差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论：甲基丁香酚可以显著抑制变应性鼻炎大鼠鼻黏膜中黏蛋白MUC5 AC的表达，进而对变应性鼻炎有一定的抑制作用，可为临床应用研究提供依据。
