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金雀异黄素对骨肉瘤细胞U2OS细胞生长和分化的影响
[目的]探讨植物雌激素类药物金雀异黄素(genistein,GEN)对骨肉瘤细胞U2OS生长的影响作用.[方法]用不同浓度的GEN处理U2OS细胞,分别在24、48和72 h采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,用酶活性法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphate enzyme,AKP)活性和ELISA法检测骨钙素(osteocalcin,BGP)的表达.[结果]MTT检测显示,GEN对U2OS细胞生长的影响与GEN作用时间及浓度有密切关系,当GEN浓度增加至10 000 nmol/L时,OD值远低于对照组(P＜0.05),而在低浓度(0.1 nmol/L和1 nmol/L) GEN作用72 h后,OD值又远高于对照组(P＜0.05);AKP活性检测表明,高浓度(10 000 nmol/L)GEN作用48 h和72 h能明显抑制AKP的活性(P＜0.05),而低浓度(0.1 nmol/L) GEN却能增加AKP的活性(P＜0.05);ELISA实验表明,GEN处理U2OS细胞后对其BGP表达的影响作用也同样表现为与药物浓度及培养时间有关,作用48、72 h后,BGP的表达随着药物浓度的降低却有明显的增加.[结论]GEN除了能抑制U2OS细胞的增殖、具有抗肿瘤作用外,低剂量应用时具有促进成骨分化作用,其作用机制可能与其激活雌激素受体有关.
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PIM1在人骨肉瘤细胞中高表达及对增殖的影响
目的 探讨PIM1表达对人骨肉瘤细胞增殖的影响.方法 利用免疫组化SP法及多因素分析法探讨PIM1在人骨肉瘤组织及相应非癌组织中的表达情况;利用RNA干扰、细胞转染后CCK8法及平板克隆形成实验观察PIM1基因表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;通过细胞转染后CCK8法检测PIM1基因高表达对骨肉瘤细胞增殖能力的影响.结果 PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中阳性表达率为90.00％(108/120),在相应非癌组织中阳性表达率为73.33％(88/120),PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中的阳性表达率高于相应非癌组织(P<0.05);干扰了PIM1基因表达的骨肉瘤细胞MG63和U2OS细胞的克隆形成及增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著降低(P<0.05);转染了PIM1高表达质粒的骨肉瘤MG63和U2OS细胞增殖能力较阴性对照组及空白对照组显著升高(P<0.05).结论PIM1蛋白在人骨肉瘤组织中高表达,且与肿瘤大小、Enneking分期和T分期有关;PIM1表达可促进骨肉瘤MG63和U2OS细胞的增殖.
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构建裸鼠皮下荷瘤模型：人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS和143B
背景：多种细胞株参与骨肉瘤动物模型的和构建。目的：比较人骨肉瘤细胞株中MG63、U2OS和143B在裸鼠皮下的成瘤情况，为骨肉瘤的动物实验研究奠定基础。方法：将18只裸鼠随机等分成3组：MG63组、U2OS组和143B组，分别于各组裸鼠后侧背部皮下注射MG63、U2OS和143B三种细胞株，观察成瘤情况。结果与结论：MG63和U2OS细胞株注射的裸鼠未能成瘤。143B细胞株注射的裸鼠于(6±1) d成瘤，成瘤率100%(6/6)，肿瘤生长较迅速，2个月时平均瘤体体积为(3475±1544) mm3，荷瘤裸鼠存活时间为(68±10) d。苏木精-伊红染色显示瘤体组织中可见癌细胞成巢，核大深染，多分裂。说明143B细胞株成瘤良好，可用于骨肉瘤动物实验研究。
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熊果酸抑制骨肉瘤细胞的生物学功能
目的 检测熊果酸对骨肉瘤细胞生长转移的影响.方法 将不同浓度熊果酸分别作用于人骨肉瘤细胞系U2OS细胞,MTT实验检测细胞增殖情况,Hochest 33258染色检测细胞凋亡情况,Transwell实验检测细胞转移情况.利用Western blot方法检测熊果酸对相关蛋白的作用.结果 10、20、30 μg/mL熊果酸处理U2OS细胞24 h后,对其增殖的抑制率分别为39.51％±0.75％、48.91％±3.64％、56.49％±1.54％.熊果酸通过抑制cyclin d1蛋白抑制U2OS细胞的增殖,通过调节bcl-2和bax蛋白促进U2OS细胞的凋亡.Transwell实验发现,熊果酸可以剂量依赖的方式抑制U2OS细胞的迁移,其抑制作用是通过其对MMP2蛋白的抑制实现的.结论 熊果酸可以抑制骨肉瘤细胞系U2OS细胞的增殖与转移,可以作为临床骨肉瘤治疗的潜在化疗药物进行进一步探索.
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紫铆因对骨肉瘤细胞凋亡和转移的影响及其机制
目的:研究不同浓度的紫铆因对U2OS骨肉瘤细胞的凋亡及侵袭转移作用的影响,并探讨其相关的作用机制.方法:U2OS骨肉瘤细胞在不同浓度的紫铆因作用下处理24 h,CCK-8细胞活性试剂盒测定U2OS骨肉瘤细胞活性的变化;Western blot法测定U2OS骨肉瘤细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2,侵袭转移相关蛋白MMP-2、MMP-9,PI3K-Akt细胞信号通路相关蛋白的表达情况;Tunel法检测U2OS细胞的凋亡情况.结果:25、50、100μmol/L紫铆因处理组与0μmol/L紫铆因组比,细胞活性差异均有统计学意义(P<0.05);50、100μmol/L紫铆因处理组与0μmol/L紫铆因组比,Bax的表达量增加,Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达量降低,PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量下降,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:紫铆因可以促进U2OS骨肉瘤的凋亡并抑制其侵袭转移,这种作用可能是通过抑制PI3K-Akt信号通路来实现的.
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MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响
目的 探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响. 方法 通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM 2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量. 结果 miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P<0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P<0.05). 结论 miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖.
关键词： 骨肉瘤 MG63 U2OS MicroRNA-638 细胞增殖 -
胡萝卜素诱导人骨肉瘤细胞U2OS自噬和凋亡的作用及机制
目的 研究毒胡萝卜素(TG)诱导人骨肉瘤细胞U2OS自噬与凋亡的作用,并探讨两者发生以及相互关联的分子机制.方法 用Lipofectamine 2000转染GFP-LC3表达质粒,通过荧光显微镜观察U2OS细胞荧光斑的形成,从而明确TG诱导细胞自噬的作用;用TG或同时联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理U2OS细胞后,检测自噬蛋白LC3的表达,各组细胞凋亡情况以及细胞形态改变.结果 TG可诱导U2OS细胞发生自噬,可见GFP-LC3融合蛋白聚集,形成绿色荧光斑点,3-MA可明显抑制TG诱导的自噬作用的发生;TG诱导U2OS细胞介导自噬的过程中LC3-II表达增高,同时TG可诱导U2OS细胞发生凋亡,在TG给药前用3-MA处理后会增强这种凋亡作用.结论 TG能抑制U2OS细胞的生长,并诱导其发生凋亡和自噬.TG诱导的自噬作为保护性机制,可发挥拮抗凋亡的作用.
