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禽胰多肽对体外培养肝细胞分泌功能的影响
禽胰多肽(avian pancreatic polypeptide,APP)是由禽类胰腺合成并分泌的含36个氨基酸残基的直链多肽.研究表明,APP可促进动物采食,刺激胃肠道运动及其腺体的分泌.本实验室采用磷酸钙沉淀法从鸡的胰腺中分离出含APP活性组分的APP粗品,用该粗品添加于鸡饲料中发现,可提高鸡采食量,提高鸡腿肌重及单位肌组织中DNA及RNA的含量,促进鸡生长.
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pAdCMV-tk/pJM17同源重组及扩增方法的研究
目的:探讨磷酸钙沉淀法同源重组穿梭质粒pAdCMV-tk与腺病毒基因组改装质粒pJM17的可行性.方法:用磷酸钙沉淀法将质粒pAdCMV-tk与质粒pJM17共转染至293细胞,获得复制缺陷的重组腺病毒AdCMV-tk,将其在293细胞中扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化扩增病毒,空斑实验测定病毒滴度.结果:质粒AdCMV-tk与质粒pJM17在293细胞中同源重组后7~10天出现完全的细胞病变态反应.纯化后病毒滴度为3×1010pfu/ml.结论:磷酸钙沉淀法能成功获得同源重组病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒可得高滴度腺病毒.
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逆转录病毒介导的反义C-MYC的抗小鼠L6565白血病作用
目的和方法:L6565白血病是我国特有的T-S-Z淋巴瘤/白血病系统中的实验系统的瘤株之一,经检测c-myc基因高表达.本文针对c-myc基因构建一个含有小鼠反义c-myc基因片段的逆转录表达载体pGAM,用磷酸钙沉淀法将pGAM导入表达包装细胞PA317,经筛选获得病毒效价5×105 cfu/mL的病毒包装细胞,利用pGAM病毒成功的感染了L6565细胞,得到了G418抗性细胞L6565-as,经PCR分析病毒载体序列稳定地整合到PA317和L6565-as中,能够长期表达.结果:L6565-as和对照细胞光镜下形态均为圆形或椭圆形,细胞大小不一,但L6565as细胞核浆比例比对照细胞小.生长曲线和MTT法显示,L6565-as生长与对照细胞相比,生长明显受到抑制.流式细胞仪检测细胞周期:L6565as细胞G0-G1为45%,PGNsC对照和空白对照细胞分别为26%和29%.软琼脂克隆发现L6565as细胞形成克隆数量明显减少,为30个克隆/5000个细胞,空载病毒和空白对照分别为103和106个克隆/5000个细胞,二者有显著差异(P<0.001).免疫组化检测L6565as细胞c-myc蛋白表达为弱阳性(+),而对照细胞为强阳性(+++).Northern blot检测发现L6565as细胞c-myc mRNA表达比对照减少.结论:反义c-myc基因抑制了L6565白血病细胞的DNA合成,减缓了细胞的生长速度,并且使细胞恶性程度降低.本研究同时也是对我国T-S-Z系统白血病研究的一种深入.