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  • pAdCMV-tk/pJM17同源重组及扩增方法的研究

    作者:黄蓉;管怀进;顾星星

    目的:探讨磷酸钙沉淀法同源重组穿梭质粒pAdCMV-tk与腺病毒基因组改装质粒pJM17的可行性.方法:用磷酸钙沉淀法将质粒pAdCMV-tk与质粒pJM17共转染至293细胞,获得复制缺陷的重组腺病毒AdCMV-tk,将其在293细胞中扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化扩增病毒,空斑实验测定病毒滴度.结果:质粒AdCMV-tk与质粒pJM17在293细胞中同源重组后7~10天出现完全的细胞病变态反应.纯化后病毒滴度为3×1010pfu/ml.结论:磷酸钙沉淀法能成功获得同源重组病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒可得高滴度腺病毒.

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