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Chelex-100法提取真核表达质粒pcDNA3-HERG的应用体会
目的 探讨Chelex-100法提取先天性长QT综合征相关人类真核表达质粒pcDNA3-HERG的可行性.方法 分别用Chelex-100法和碱裂解法提取pcDNA3-HERG质粒,将环状质性DNA酶切为线性,0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测质粒提取的有效性.结果 用Chelex-100法和碱裂解法提取的pcDNA3-HERG质粒的OD(A260/A280)比较差异无统计学意义[分别为(1.8±0.6),(1.9±0.4),P>0.05],经0.8%琼脂糖凝胶电泳后紫外灯下检测均有特定的清晰条带.结论 两种方法均能提取纯度较高的大肠杆菌质粒DNA,Chelex-100法简便、省时,值得推广.
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8种不同检材提取DNA的结果分析
果有实际指导意义,在后分析阶段也有不同的效果.
关键词： Chelex-100法 磁珠法 DNA -
提取大鼠毛发核酸3种方法的比较
目的:探讨提取大鼠毛发核酸的可靠方法.方法:分别用PCR缓冲液法、SDS-蛋白酶K法和Chelex-100法从大鼠毛发中提取核酸,对所提核酸进行PCR扩增及电泳分析,并对3种方法进行比较.结果:从毛囊提取mtDNA的成功率,SDS-蛋白酶K法(22.50%)分别与PCR缓冲液法(64.17%)和Chelex-100法(67.50%)比较,差异均有统计学意义(X12=42.421,X22=28.800,均P＜0.01);PCR缓冲液法与Chelex-100法比较,差异无统计学意义(X2=0.296,P＞0.05).提取核DNA的成功率,SDS-蛋白酶K法(60.00%)分别与PCR缓冲液法(90.00%)和Chelex-100法(90.83%)比较,差异均有统计学意义(X12=49.091,X22=30.767,均P ＜0.01);PCR缓冲液法与Chelex-100法比较,差异无统计学意义(X2=0.048,P＞0.05).PCR缓冲液法不能从毛干中提取核酸,SDS-蛋白酶K法不能从1、2根鼠毛中提取mtDNA,而Chelex-100法可从毛干和单根鼠毛中提取mtD-NA和DNA.结论:Chelex-100法对从毛发中提取核酸较为合适.
关键词： 毛发 核酸 PCR缓冲液法 SDS-蛋白酶K法 Chelex-100法 -
两种获取牙龈卟啉单胞菌基因组DNA方法比较
目的:筛选方便、快捷、有效地获取细菌基因组DNA的方法.方法:采用UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒法和Chelex-100法获取患者龈下菌斑DNA,比较作为PCR扩增模板检测牙龈卟啉单胞菌感染位点的检出率差异,并对2种方法进行比较.结果:试剂盒法与Chelex-100法对牙龈卟啉单胞菌的感染位点检出率差异无统计学意义,但Chelex-100法提取DNA更简单、快速.结论:Chelex-100法抽提细菌基因组DNA适用于对大样本牙周炎患者作细菌学检测分析.
关键词： DNA 牙龈卟啉单胞菌 试剂盒法 Chelex-100法 -
DNA数据库建设中批量样本直接扩增检验法的应用
目的 研究批量样本直接扩增法在DNA数据库建设中的应用.方法 打孔机打取血滤纸600份,剪取芝麻大小的口腔拭子300份,放入96孔扩增板,加入扩增试剂后直接扩增,并对其中200份血滤纸用磁珠法,100份口腔拭子用96孔板Chelex-100法,经DNA提取后扩增检验进行比较.结果 血滤纸采用直接扩增法及磁珠法STR检测成功率均为100%;口腔拭子采用直接扩增法的成功率为95%,采用96孔板Chelex-100法的成功率为94%.结论 血滤纸和口腔拭子通过直接扩增均能获得很好的DNA分型结果 ,该方法 省时省力,可用于DNA数据库建设.
关键词： 法医物证学 DNA数据库 直接扩增法 磁珠法 Chelex-100法 -
Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究
目的 研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系.方法 113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型. 结果 各种生物检材提取的DNA浓度分别为: 37份滤纸、纱布血痕0.042～5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15～4.21ng/μl,18份烟头0.016～1.46ng/μl,10份肋软骨0.531～14.40ng/μl,8份肌肉5.75～24.80ng/μl,7份指甲0.788～11.50ng/μl,17份精斑0.79～99.50ng/μl.在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5～3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型.结论 Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5～3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好.
关键词： 法医物证学 实时定量PCR Chelex-100法 DNA定量 复合STR扩增 -
DNA数据库建设中批量样品不同DNA提取方法的比较
目的 比较和选择自动化工作平台提取DNA的方法,并用于DNA数据库建设.方法 用手工Chelex-100法、Biomek3000自动化工作平台结合Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法对实验室收集的建库滤纸血样进行DNA提取,荧光定量技术对上述3种方法提取的模板DNA进行测定;扩增产物用3100基因分析仪检测并用基因分析软件分析.结果 手工Chelex-100法、自动化Chelex-100法及DNA-IQTM磁珠法提取的DNA模板浓度分别为0.593ng±0.131ng/μl、0.579ng±0.096ng/μl、0.447ng±0.056ng/μl;成功率分别为100%、98.9%、99.5%.结论 本文建立的自动化Chelex-100法可用于大规模DNA数据库建设.
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高度腐败组织不同DNA提取方法的比较
在法医实践中,一般采用Chelex-100法提取DNA可得到理想的STR分型,但对一些高度腐败组织,由于细胞自溶速度快,DNA降解严重,单纯依靠此法往往得不到理想的分型结果[1].为提高腐败检材检验成功率,本文运用Chelex-100联合DNA-IQ磁珠法和有机法联合QIAquick PCR纯化试剂盒法对高度腐败组织进行DNA提取,并比较其DNA提取的检测成功率.
关键词： 法医物证学 Chelex-100法 DNA-IQ磁珠法 有机法 -
烟头上脱落细胞3种DNA提取方法的比较
目的 比较采用3种方法提取烟头上脱落细胞DNA的成功率,评价其应用价值.方法 91枚实际检案中积累的烟头,按过滤嘴的水松纸材质颜色分为深色(68枚)和浅色(23枚)两组;采用Chelex-100法、DNA-IQ磁珠法和骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱,提取烟头上的脱落细胞DNA;Identifiler-Plus试剂盒进行扩增、AB 3130xL型遗传分析仪及GeneMapper ID-X v1.2基因软件进行检测,对两组检验成功率进行比较.结果 采用Chelex-100法、磁珠法和联合纯化柱提取各组DNA的分型成功率在浅色组分别为:82.6％、91.3％和95.7％,不同方法之间比较无显著性差异(P＞0.25);深色组分别为:60.3％、29.4％和91.2％,不同方法之间比较有显著性差异(P＜0.01).结论 本文3种方法中,骨孵化液联合QIAquick PCR纯化柱方法更能适应不同材质过滤嘴外层纸上脱落细胞的DNA提取,可在相关检验中选择使用.
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尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型效果比较
目的 探讨尼龙植绒拭子与棉拭子血痕DNA分型检验的效果.方法 取抗凝全血用去离子水倍量稀释2、4、8、16、32、64、128倍,各取1μL分别滴加于尼龙植绒拭子与棉拭子头部,干燥制成血痕,应用Chelex-100提取每个浓度两种材质拭子的血痕样本DNA,采用Identifiler Plus试剂盒进行复合扩增,3500XL型遗传分析仪进行检测,对比各组DNA分型检验成功率.结果 ①检验成功率:稀释16～64倍尼龙植绒拭子血痕均明显高于相同稀释倍数的棉拭子血痕(P＜0.001);其余浓度血痕两种材质拭子的检验成功率无明显差异;②分型图谱峰高和均衡性:不同浓度尼龙植绒拭子血痕峰高多为棉拭子血痕的2倍以上,16 ～64倍稀释血痕尼龙植绒拭子均衡性更好.结论 尼龙植绒血痕拭子的检验效果优于棉拭子血痕,在微量血痕检验时优势更明显.
关键词： 法医物证学 尼龙植绒拭子 棉拭子 血痕 Chelex-100法 -
Chelex-100法联合磁珠法检测泥土精斑DNA 1例
1 案例某日,某女在一偏僻河道的绿化带内被强奸、抢劫.提取受害人的阴道擦拭物和内裤,PAA试剂条检验,均为阴性,镜检未检出精子.勘验人员遂对现场进行复勘,在现场提取到5.1 cm×4.6 cm的泥土1块.
关键词： 法医遗传学 精子 Chelex-100法 磁珠法 土壤 -
相关DNA证据认定强奸案1例
1 案例2007年5月某日凌晨,受害人陈某到公安机关报案称其在熟睡中遭刘某强奸.据陈某称,其熟睡时被刘某强奸,当其醒时遂将刘某推开,感觉刘某并未射精.而陈某被刘某强奸前当晚曾与男友杨某发生性行为.刘某被抓获后拒不承认与陈某发生性行为.
关键词： 法医生物学 DNA鉴定 Chelex-100法 -
氨基比林血痕预试验处理血痕后样本的DNA定量
目的：探讨氨基比林血痕预试验处理血痕后样本DNA含量的变化及对STR分型检测的影响。方法10名健康无关个体EDTA抗凝血液制成滤纸血痕，氨基比林血痕预试验检测，按试验后血样干燥保存时间分30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h共6个实验组，并采用磁珠法、QIAcube DNA纯化法、Chelex-100法三种方法提取样本DNA，应用荧光定量PCR检测样本DNA含量，PCR-STR荧光技术进行STR分型。结果提取方法相同时，氨基比林血痕预试验后血样随干燥保存时间的延长，样本DNA含量呈逐渐降低的趋势。保存时间相同时，不同DNA提取方法间，样本DNA含量差异也有统计学意义。90.56%样本均可获得16个STR基因座明确分型。结论氨基比林血痕预试验对血痕样本DNA有损伤，24 h内多可获有效STR分型。磁珠法提取样本DNA进行STR分型，效果好。
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MPure-12全自动核酸纯化仪与Chelex-100法的比较
目的 通过对DNA含量不同的血痕和多种类型生物学检材进行DNA提取和STR分型检测,探讨MPure-12全自动核酸纯化仪(MPure-12法)在DNA提取中的法医学应用价值.方法 收集血痕、精斑、唾液等9种类型的生物学检材,应用MPure-12法和传统Chelex-100法提取DNA,经过PCR扩增和电泳,获取STR分型图谱.结果 MPure-12法对发根、口香糖、烟蒂、肌肉组织、唾液斑、血痕、精斑这些检材能够成功分型,唾液出现了个别等位基因丢失现象,接触拭子分型较差.Chelex-100法对血量为20μL、15μL、10μL、5μL、1μL制成的血痕均有完整分型结果,MPure-12法在血量为1μL时出现等位基因丢失现象.结论 MPure-12法适用于一定浓度血样的检验,而对于微量血样,Chelex-100法提取DNA的效果可能更优.仪器应用于DNA提取具有操作简单、快速、提取效率高,分型成功率高,减少人为污染等优势.
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接触性生物检材DNA提取方法的比较
在现代犯罪行为中,现场物证呈现多样化、微量化的趋势,接触性生物检材所占比例越来越大. 接触性生物检材DNA模板量低,检验分型效果不稳定,随着法医DNA检验技术的不断提高、各种纯化试剂盒和检验设备的研发和应用,其检出率逐渐提高[1-2]. 本研究采用Chelex-100法与DNA IQTM System(DC6700,美国Promega公司)分别对本实验室近年来实际检案中的接触性检材进行DNA提取,分析比较两种方法的提取效果,报道如下.
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Chelex-100法和QIAcube纯化法在接触性检材检验中的比较
在法医DNA检验中，能否提取到足够浓度与纯度的DNA模板，是决定DNA检验成败的关键之一。本研究分别采用Chelex-100法与QIAamp DNA Investiga-tor试剂盒结合QIAcube核酸自动化提取仪（QIAcube纯化法）提取实际检案中的 DNA ，同等条件下进行PCR扩增与电泳，比较分析二者的图谱，报道如下。
关键词： 法医遗传学 Chelex-100法 QIAcube纯化法 -
输卵管妊娠组织中绒毛DNA的提取
目前,对直接从孕妇腹腔抽取的胎儿绒毛组织进行DNA提取的方法已经很成熟[1],但对于特殊案例,如从输卵管妊娠(宫外孕)组织中获取纯粹胎儿的DNA报道较少.笔者通过将输卵管妊娠组织中的绒毛组织分离出来,联合采用Chelex- 100和盐析法提取DNA,成功进行了STR分型.现报道如下.
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两种DNA提取法对腐败胎盘组织STR分型结果的比较
在法医物证检验工作中.对于新鲜的人体组织检材,一般采用Chelex-100法提取DNA就可得到理想的STR分型结果,但是对于高度腐败的人体组织,单纯地依靠此法检测存在失败的可能.笔者运用两种不同的DNA提取法对高度腐败的胎盘组织进行了DNA提取,并对其STR基因座分型的检出率、DNA含量及纯度进行了比较.
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两种DNA提取法对不同色泽肋软骨STR分型成功率的比较
目的 比较两种DNA提取法对不同色泽肋软骨的DNA STR分型结果的影响.方法 利用Chelex-100法和酚-氯仿法,分别对30例不同色泽的腐败尸体肋软骨进行DNA提取,STR复合扩增,ABI 3100型基因分析仪对扩增产物进行检测.结果 用酚-氯仿法提取的30例腐败尸体肋软骨,均检测到全部STR基因座的等位基因型.用Chelex-100法提取的肋软骨中,22例(11例白色、8例淡黄色、3例黄色)检测出全部STR基因座的等位基因型;7例(3例黄色、4例黄褐色)检测出部分STR基因座的等位基因型;1例黑灰色的腐败尸体肋软骨,未检测出STR基因座的等位基因型.结论 根据肋软骨的色泽,选择适宜的DNA提取方法.对于颜色较深的肋软骨,用酚-氯仿法进行DNA提取有助于提高其STR基因座的检出率.
关键词： Chelex-100法 酚-氯仿法 DNA提取 肋软骨
