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基于多聚鸟氨酸海藻酸微囊化人正常肝细胞系的体外培养
目的 观察海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸(alginate-PLO-alginate,A-PLO-A)微囊和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸(Ba-alginate-PLO-alginate,B-PLO-A)两种微囊包裹人正常肝细胞系HL-7702细胞后,肝细胞形态和功能的变化,评价PLO对微囊化肝细胞的生物学行为的影响.方法 采用优化的微囊制备条件,制备A-PLO-A微囊、B-PLO-A微囊,并包裹HL-7702细胞,观察肝细胞在基于多聚鸟氨酸的微囊中的生长增殖的情况及代谢产物浓度水平.结果 A-PLO-A和B-PLO-A两种微囊包裹肝细胞后,体外培养1周,细胞均可在两种微囊内形成不同大小和形态的肝细胞聚集体,微囊光滑无破损现象,台盼兰染色计数的结果显示,包囊前细胞存活率为94％；A-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为92％,B-PLO-A微囊包囊后细胞存活率为91％.两种微囊化HL-7702细胞各时间点ALB、BUN分泌量差异均无统计学意义.结论 微囊囊膜的存在并未对具有贴壁生长和接触抑制性特征的HL-7702细胞的增殖和生理功能产生明显的不利影响.基于多聚鸟氨酸的新型海藻酸微囊在一定程度上可以满足微囊化肝细胞生存的需要,并可维持其正常的生理功能.
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Corning? CellBIND?表面培养皿促进脐带源间充质干细胞生长
背景：培养体系微环境影响干细胞体外扩增，寻找有效的促进细胞贴壁和增殖的培养方法尤为重要。
目的：比较不同细胞培养材质对细胞体外扩增的影响。
方法：将5.0×104培养的人脐带源间充质干细胞分别接种于包被/不包被鸟氨酸Corning?聚苯乙烯培养皿或Corning? Cel BIND?表面培养皿中培养，分别观察细胞的贴壁、增殖状态、与细胞黏附和细胞增殖有关的蛋白的表达及细胞标志物的表达。
结果与结论：与其他类型的培养皿相比，包被多聚鸟氨酸的Corning? Cel BIND?表面培养皿在24 h内能够促进人脐带源间充质干细胞贴壁，同时也能使培养的人脐带源间充质干细胞较早的进入对数生长期，细胞增殖数量相对较多，虽然对人脐带源间充质干细胞表面标志物CD73， CD90和CD105的表达没有影响，但能促进细胞中黏附蛋白的表达。且Corning? Cel BIND?表面培养皿较Corning?聚苯乙烯培养皿更能促进人脐带源间充质干细胞的贴壁和增殖，同时也对细胞表型的表达无影响。提示Corning? Cel BIND?表面培养皿能够促进细胞吸附，增加细胞数量，且对细胞周期蛋白以及细胞表型的表达没有影响，且包被多聚鸟氨酸能够进一步促进细胞的贴壁和增殖，并稳定表达人脐带源间充质干细胞的细胞表型。 -
中药视神经保护有效成分筛选的方法学研究
目的:(1)建立大鼠视网膜神经细胞体外培养模型;(2)建立视网膜神经节细胞(RGCs)培养模型;(3)用噻唑兰比色法(MTT法)测试不同培养时间视网膜神经细胞及RGCs存活率;(4)绘制体外培养视网膜神经细胞和RGCs存活曲线.方法:(1)取出生72h内的SD乳鼠视网膜,制成细胞悬液,放于已包被多聚鸟氨酸和层粘连蛋白的培养皿中,加20%EMDM培养液、于5%二氧化碳孵箱中培养,分别于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(2)在混合培养的视网膜神经细胞中加入5'-溴-2'-脱氧脲苷(Brdu),并于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(3)利用羊抗鼠IgG和小鼠抗大鼠Thy1.1抗体纯化视网膜神经节细胞,分别于4小时,24小时,48小时,72小时观测细胞存活情况;(4)采用MTT法测定体外培养的视网膜混合细胞和RGCs在体外培养4小时,24小时,48小时的存活率,绘制细胞生长曲线.
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基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊化肝细胞体内移植治疗肝衰竭大鼠的研究
本研究探讨海藻酸钠-多聚鸟氨酸-海藻酸(A-PLO-A)和海藻酸钡-多聚鸟氨酸-海藻酸(B-PLO-A)两种新型微囊作为细胞移植载体的效果.两种微囊包裹小鼠肝细胞后,植入D-氨基半乳糖腹腔注射法制备的急性肝衰竭模型大鼠体内,观察大鼠死亡率,检测微囊内肝细胞的生长、增殖、代谢的情况,以及能否有效改善肝衰大鼠的肝功能.实验分为A-PLO-A空微囊、B-PLO-A空微囊、移植游离的肝细胞、A-PLO-A微囊化肝细胞、B-PLO-A微囊化肝细胞五组.研究结果表明,单纯的空微囊对肝衰大鼠病情无缓解作用,移植后两个空囊移植组3d死亡率均达到了100％.游离肝细胞组、A-PLO-A微囊化肝细胞组和B-PLO-A微囊化肝细胞组大鼠的ALT、AST、ALB水平均有所恢复,4周时微囊移植组的上述指标均优于游离肝细胞组,说明微囊化肝细胞移植有效缓解了肝脏损伤的程度,治疗效果好于游离肝细胞组.微囊化肝细胞组大鼠的存活率明显高于空囊移植组和游离肝细胞移植组;4周后回收的微囊表面光滑,无细胞包裹,无纤维化.研究结果提示基于多聚鸟氨酸的海藻酸微囊物理稳定性和生物相容性良好,适合作为肝细胞体内移植的载体.
