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脐带源间充质干细胞治疗帕金森病的临床研究
目的 探讨脐带源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchumal stem cells,HUMSCs)移植治疗帕金森病患者神经功能的疗效.方法 取胎儿脐带组织体外培养扩增并进行鉴定,将3 ～6 mL含有细胞5×106～1×107的细胞悬液,通过颈动脉移植途径植入10例帕金森病患者体内.每周1次,移植3次后,对患者进行移植前后帕金森病统一评分量表(UPDRS)和改良的Webster评分,并评估移植后不良反应.结果 脐带源间充质干细胞贴壁成漩涡状生长,CD73,CD90,CD105呈阳性表达;CD14,CD19,CD34,CD45,HLA-DR呈阴性表达.经颈动脉移植后,患者移植前后UPDRS评分具有显著性差异(P＜0.01),Webster评分有效改善患者行走姿势、震颤程度,自主运动及坐、起运动能力得到提高.结论 患者移植HUMSCs后能够有效控制帕金森病的发病进程,有效改善受损的脑组织功能,提高患者生活质量.
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人脐带和骨髓源间充质干细胞生物学特征的对比研究
为了对比人脐带组织源闻充质干细胞(UC-MSC)与骨髓源间充质干细胞(BM-MSC)的生物学特性,从足月胎儿脐带组织和成人骨髓中分离出间充质干细胞(MSC).用有限稀释法、流式细胞术、倒置显微镜检及RT-PCR等方法检测UC-MSC和BM-MSC的分离成功率、细胞产量、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F)、增殖特性、免疫表型和多向诱导分化能力等并对比性研究二者的生物学特性.结果表明,UC-MSC和BM-MSC的分离成功率均达100%;虽然由脐带组织中分离的有核细胞数低于骨髓(1×106/cm us 5.5×107/ml)(p=0.0002),但在培养第14天由脐带和骨髓中得到的贴壁细胞数无差异(8.6×105/cm 135 8.4×105/ml)(p＞0.05);UC-MSC形态、大多数分子表型、细胞周期状态、脂肪和骨诱导分化能力与BM-MSC相似,但UC-MSC的CFU-F比例(1:1609±0.18)高于BM-MSC的CFU-F比例(1:35700±0.01)(p＜0.05).此外,UC-MSC具有比BM-MSC更强的增殖能力(p＜0.05).UC-MSC HLA-ABC和CD106分子表达低于BM-MSC(p＜0.05).结论:脐带组织源间充质干细胞产量和绝大多数生物学特征与BM-MSC的相似,且具有比BM-MSC更高的增殖能力、较低的HLA-ABC和HLA-DR表达,UC-MSC有望成为BM-MSC理想的替代来源.
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脐带源间充质干细胞移植治疗难治性系统性红斑狼疮
目的 脐带源(UC)间充质干细胞(MSCs)具有自我更新和分化潜能.MSCs移植(MSCT)在自身免疫性疾病中的应用还没有足够多的数据.这项研究的目的 就是评价异体干细胞移植在严重系统性红斑狼疮患者的有效性和安全性.方法 难治性系统性红斑狼疮患者2例.对标准治疗无效或威胁生命的脏器并发症.对移植前后的狼疮活动指数(SLEDAI)进行评价.结果 2例患者的临床症状完全缓解,异常免疫学指标基本恢复正常,抗体全部阴转,肾功能、尿常规恢复正常.结论 我们的研究结果表明,MSCT在控制系统性红斑狼疮疾病活动,改善血清学方面有作用.这些试验为治疗严重和治疗难治性系统性红斑狼疮提供了数据.
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人脐带源间充质干细胞移植对再生障碍性贫血小鼠免疫保护的研究
①目的探讨人脐带源间充质干细胞（umbilical cord-mesenchymal stem cells，UC-MSCs）对免疫介导的再生障碍性贫血（AA）小鼠模型的治疗作用及其发挥免疫抑制作用的机制。②方法自然贴壁法分离、纯化 UC-MSCs 并进行体外培养和扩增；制备免疫介导的 AA 小鼠模型。模型制成后，将培养的 UC-MSCs以1×106／kg的剂量经尾静脉注入模型鼠体内。RT-PCR法检测 UC-MSCs对AA小鼠外周血及骨髓中单个核细胞γ-干扰素（IFN-γ）mRNA 表达的影响，MTT 法测定 UC-MSCs对异基因淋巴细胞增殖效应的影响，进一步探讨其发挥免疫抑制作用的机制。③结果输注UC-MSCs后AA小鼠外周血象、骨髓病理学特征等明显改善；UC-MSCs对异基因淋巴细胞增殖有明显抑制作用；与模型组比较，输注UC-MSCs 可明显降低造血负调控因子 IFN-γmRNA 表达水平（P＜0．05），恢复造血。④结论 AA小鼠输注 UC-MSCs可使其骨髓造血衰竭情况明显改善；其机制与UC-MSCs可抑制T淋巴细胞的增殖及抑制造血负调控因子 IFN-γmRNA表达有关。
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人脐带源间充质干细胞移植改善四氯化碳诱导肝硬化大鼠的肝纤维化
背景:干细胞移植作为一种全新的肝硬化治疗方法的可行性和有效性,在国内外文献中报道极少.目的:观察人脐带源间充质干细胞移植对四氯化碳诱导肝硬化大鼠肝纤维化的影响.方法:32 只Wistar 大鼠随机分为2 组,对照组经尾静脉内注射生理盐水,肝硬化组采用四氯化碳植物油皮下注射8 周制成肝硬化大鼠模型,再随机分为3 组,盐水对照组、人脐带源间充质干细胞移植组分别经尾静脉内注射生理盐水和人脐带源间充质干细胞混悬液,8 周肝硬化组无其他干预.结果与结论:对照组血清碱性磷酸酶水平明显低于其他3 组(P < 0.05);人脐带源间充质干细胞移植组血清白蛋白和胆固醇水平与对照鼠相近(P > 0.05),与8 周肝硬化组和盐水对照组相比明显升高(P < 0.05).血清碱性磷酸酶水平也出现了明显下降(P < 0.05).肝硬化8 周组大鼠肝组织中有大量胶原纤维增生并形成假小叶;盐水对照组与肝硬化8 周组相似;仅在人脐带源间充质干细胞移植组大鼠肝中观察到散在的绿色抗人抗核抗体阳性细胞,肝组织中胶原纤维的量明显小于盐水对照组.提示经尾静脉移植人脐带源间充质干细胞,可明显改善四氯化碳诱导肝硬化大鼠的肝纤维化程度.
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Corning? CellBIND?表面培养皿促进脐带源间充质干细胞生长
背景：培养体系微环境影响干细胞体外扩增，寻找有效的促进细胞贴壁和增殖的培养方法尤为重要。
目的：比较不同细胞培养材质对细胞体外扩增的影响。
方法：将5.0×104培养的人脐带源间充质干细胞分别接种于包被/不包被鸟氨酸Corning?聚苯乙烯培养皿或Corning? Cel BIND?表面培养皿中培养，分别观察细胞的贴壁、增殖状态、与细胞黏附和细胞增殖有关的蛋白的表达及细胞标志物的表达。
结果与结论：与其他类型的培养皿相比，包被多聚鸟氨酸的Corning? Cel BIND?表面培养皿在24 h内能够促进人脐带源间充质干细胞贴壁，同时也能使培养的人脐带源间充质干细胞较早的进入对数生长期，细胞增殖数量相对较多，虽然对人脐带源间充质干细胞表面标志物CD73， CD90和CD105的表达没有影响，但能促进细胞中黏附蛋白的表达。且Corning? Cel BIND?表面培养皿较Corning?聚苯乙烯培养皿更能促进人脐带源间充质干细胞的贴壁和增殖，同时也对细胞表型的表达无影响。提示Corning? Cel BIND?表面培养皿能够促进细胞吸附，增加细胞数量，且对细胞周期蛋白以及细胞表型的表达没有影响，且包被多聚鸟氨酸能够进一步促进细胞的贴壁和增殖，并稳定表达人脐带源间充质干细胞的细胞表型。 -
不同保存液及放置时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响
背景：干细胞制备完成后的放置时间与其存活率的关系是临床应用安全、有效的基础。目的：观察不同保存液及不同保存时间对脐带源间充质干细胞存活率的影响，为干细胞有效期的确定提供重要依据。方法：选用脐带源间充质干细胞制备干细胞制剂，分别采用生理盐水、培养基、培养基+生理盐水、生理盐水含表皮生长因子、培养基含低分子肝素钙悬浮保存。使用冷藏箱模拟细胞运输条件，分别在第0，6，12，18，24，30，36，42，48小时取样，进行细胞总数和细胞活率的检测。结果与结论：各组在24 h内的细胞数量和细胞活率差别不大。24 h后，培养基组和培养基含低分子肝素钙组的细胞总数和细胞活率优于生理盐水含因子组、生理盐水组、培养基+生理盐水组。干细胞制剂制备完成后，冷藏运输24 h内细胞活率可达90%以上，保存液中的营养成分及合适的pH值，可使细胞活率显著提高。
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间充质干细胞与白细胞介素10对四氯化碳诱发的肝纤维化大鼠的治疗作用
目的：探究人脐带源间充质干细胞（ MSCs）的分离、培养方法，通过对MSCs与IL－10联合治疗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的研究，观察其协同效应，为临床治疗肝纤维化寻找新方法，并阐明其在肝纤维化治疗中的部分机制。方法：自然贴壁法分离、纯化人脐带间充质干细胞并进行体外培养和扩增。50只大鼠随机选取5只入选正常对照组（n＝5），其余45只大鼠采用皮下多点注射CCl4方法制备大鼠肝纤维化模型，造模成功后随机分为模型损伤组（n＝15）、细胞移植组（n＝15）和联合用药组（ n＝15）。细胞移植组在模型制备成功后的第1周、第2周、第3周经尾静脉给予1×106脐带间充质干细胞治疗；联合治疗组在给予细胞移植组相同的细胞治疗基础上，给予腹腔内注射IL－10（4μg／kg），每周4次。4周后将大鼠处死，收集各组大鼠血液检测肝功能、肝纤维化指标；摘取肝脏行苏木精－伊红染色，观察病理变化；RT－PCR法检测MMP－2 mRNA表达情况，Western blot法检测TGF－β蛋白的表达。结果：细胞移植组与联合治疗组大鼠肝功能、肝纤维化指标均明显改善，与对照组比较，差异有显著性意义（ P＜0．05），且联合治疗组改善更明显（ P＜0．05）；大鼠肝组织苏木精－伊红染色提示，细胞移植组、联合治疗组肝纤维化程度明显改善，联合治疗组肝脏病理更接近于正常；损伤组、细胞移植组MMP－2 mRNA表达明显增高，明显高于正常对照组（P＜0．05），联合治疗组MMP－2 mRNA表达增高，与正常对照组比较无显著性差异（P＞0．05）；与正常对照组比较，其他组TGF－β蛋白的表达都有所增高（P＜0．05），其中损伤组TGF－β蛋白的表达增高明显（P＜0．05），细胞移植组、联合治疗组TGF－β蛋白的表达较损伤组均有不同程度的降低（P＜0．05），联合治疗组与细胞移植组比较TGF－β蛋白的表达也有显著降低（P＜0．05）。结论：脐带间充质干细胞单独移植或与IL－10联合治疗均可以改善肝纤维化大鼠外周血液的生化特性和肝的组织学结构，且IL－10联合治疗效果更佳，这可能是由于间充质干细胞与IL－10可下调MMP－2 mRNA的表达，保护肝小叶结构；抑制TGF－β蛋白的表达，减少肝星状细胞的激活等原因。
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脐带源间充质干细胞可增强自然杀伤细胞对树突状细胞的杀伤活性
目的 观察脐带源间充质干细胞对自然杀伤细胞杀伤树突状细胞的影响,初步探讨其作用机制.方法 胶原酶消化整个脐带组织,体外培养间充质干细胞；分离健康人外周血单个核细胞,磁珠分选树突状细胞.在白介素-4和粒单-集落刺激因子共同作用下获得大量未成熟树突状细胞,将脐带源间充质干细胞与未成熟树突状细胞共培养2d,同时加入肿瘤坏死因子α,诱导树突状细胞成熟.流式细胞术检测诱导后树突状细胞CDllc和CD86的表达,ELISA法检测培养液中白介素-12的含量,乳酸脱氢酶释放法检测自然杀伤细胞对树突状细胞的杀伤活性,流式细胞术检测树突状细胞表面自然杀伤细胞活化性受体的配体(MICA/B和ULBPl-3)的表达.结果 与单纯细胞因子诱导比较,脐带源间充质干细胞诱导后树突状细胞CD11c的表达无明显差异,但CD86的表达降低,IL-12的分泌量降低.自然杀伤细胞对脐带源间充质干细胞诱导后的树突状细胞的杀伤效率明显高于单纯细胞因子诱导后的树突状细胞.与单纯细胞因子诱导比较,脐带源间充质干细胞诱导后的树突状细胞活化性受体的配体(MICA和MICB)的表达增高.结论 脐带源间充质干细胞能增强自然杀伤细胞对树突状细胞的杀伤活性,这可能与脐带源间充质干细胞抑制树突状细胞成熟,上调树突状细胞表面自然杀伤细胞活化性受体的配体有关.
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脐带源间充质干细胞脑室内移植治疗脑瘫的临床观察
目的:观察脐带源间充质干细胞移植对脑瘫的治疗效果.方法:对脑瘫患者在脑室额角穿刺行第一次干细胞移植,将硅胶导管预留置头皮下行第二次移植,1周后自此将干细胞移植到脑室;观察语言、肌力、肌张力改善程度.结果:经干细胞移植术后,患者肌张力高症状及姿势异常均有所改善,肌力提高1级,语言功能有所改善.结论:脐带源间充质干细胞移植对脑瘫有治疗效果.
