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蛋氨酸脑啡肽对SH-SY5Y细胞的生长抑制作用及其对细胞内钙离子浓度的影响
目的 研究蛋氨酸脑啡肽抗肿瘤作用及对SH-SY5Y细胞内钙离子浓度影响.方法 用CCK-8法,检测蛋氨酸脑啡肽对SH-SYSY细胞的生长抑制作用；显微镜下记录给药前后细胞生长情况；流式细胞术结合Fluo 4-AM染色法,检测细胞内钙离子浓度变化,用SAS 9.1统计分析.结果 蛋氨酸脑啡肽可通过降低细胞内钙离子浓度对SH-SY5Y细胞生长产生浓度特异性抑制作用.结论 细胞内钙离子浓度变化参与蛋氨酸脑啡肽抑制SH-SYSY肿瘤细胞的生长.
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蛋氨酸脑啡肽与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用研究
目的:探讨蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)与多柔比星联用对神经母细胞瘤SH-SY5Y的生长抑制及凋亡作用,为Met-ENK临床联合用药的可行性提供参考.方法:采用CCK-8法检测协同生长抑制率;采用流式细胞术法检测细胞凋亡情况;根据生长抑制率情况运用金氏公式求出协同指数(q),明确Met-ENK与多柔比星的协同作用;采用SAS9.0软件对不同组别产生的生长抑制率、凋亡数据进行统计分析.结果:Met-ENK与多柔比星分别单独使用及联合用药作用于神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制率依次为0.29%、0.71%、0.82%,且Met-ENK与多柔比星的协同指数q = 2.19(q > 2.0);单用Met-ENK几乎不引起肿瘤凋亡,单用多柔比星的肿瘤凋亡率为49.1%,二者联用的肿瘤细胞凋亡率为65.2%,与单用多柔比星比较,差异有统计学意义(P < 0.01).结论:Met-ENK可显著提升神经母细胞瘤SH-SY5Y对多柔比星的敏感性,增强其对肿瘤细胞生长的抑制作用及肿瘤细胞凋亡率.
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蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤细胞生长周期的影响及其机制研究
目的：：研究蛋氨酸脑啡肽（Met-ENK）对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的生长抑制作用及细胞周期的抑制机制。方法：采用MTT法检测细胞生长抑制率；流式细胞术检测Met-ENK作用后肿瘤细胞周期变化；Real-time PCR法检测Met-ENK作用后细胞内P21，P53基因转录量变化；Western blot法检测细胞内P21，P16，磷酸Rb蛋白表达量的变化情况。结果：MTT法结果显示，Met-ENK对SH-SY5Y细胞有生长抑制作用，在Met-ENK浓度为10-5 mol· L-1时抑制率为40%；流式细胞术证实Met-ENK作用后大多数细胞被抑制于细胞周期的G0/G1期，该期细胞数由63.97%变为87.73%；P21的基因转录量是用药前的3倍，P53基因转录量是用药前的5倍；P21，P16蛋白表达量明显增加，磷酸Rb蛋白表达量明显降低。结论：Met-ENK可以通过上调细胞周期蛋白依靠性激酶抑制因子P21及抑癌基因P53的转录和蛋白表达量，下调Rb蛋白的磷酸化水平将SH-SY5Y细胞的增殖抑制于生长周期的G0/G1期，表明Met-ENK的G0/G1期特异性周期抑瘤作用可以通过调节该途径产生。
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蛋氨酸脑啡肽调控骨髓巨噬细胞前体分化信号通路的研究
目的 通过骨髓细胞的体外诱导实验,揭示蛋氨酸脑啡肽(MENK)对骨髓巨噬细胞前体分化的信号转导调控作用,探讨蛋氨酸脑啡肽调控巨噬细胞分化抗肿瘤的作用机制.方法 应用流式细胞分析技术定量分析骨髓来源巨噬细胞细胞膜特异性标志物(F4/80)及功能表型CD64、CD206分子的表达；应用蛋白免疫印迹(Western-blotting)技术定量分析骨髓巨噬细胞前体信号转导通路相关蛋白NF-kB及STAT6的表达.结果 MENK(10-12 mol·L-1)可明显上调骨髓来源巨噬细胞CD64分子的表达,下调CD206的表达.MENK处理组CD64的表达明显高于RPMI 1640组(P＜0.01),但与MENK+ LPS+ IFN-γ处理组及LPS+ IFN-γ处理组比较无显著差异(P＞0.05),而MENK+ IL-4处理组较IL-4处理组显著升高(P＜0.01).与IL-4处理组比较,MENK+ IL-4处理组CD206的表达明显下调(P＜0.01).MENK可明显上调骨髓巨噬细胞前体NF-κB的表达,与未加MENK刺激组比较有显著差异(P＜0.01),同时MENK可显著下调由IL-4介导的STAT6的表达(P＜0.05).结论 本实验结果表明,MENK可通过抑制由IL-4介导的STAT6信号通路的激活,有效上调NF-κB的表达,有利于M1型细胞因子和NF-kB位点的结合,从而有效调控巨噬细胞由M2型向M1型转化.
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蛋氨酸脑啡肽免疫调节作用的研究进展
蛋氨酸脑啡肽(MENK)作为一种内源性神经肽被认为是联系神经内分泌系统、免疫系统两大系统的重要物质,具有独特的生物学活性,近年来日益受到广泛关注.机体免疫细胞表面广泛存在着MENK受体,MENK通过与这些受体的相互作用而起到免疫调节作用.目前,MENK应用于免疫系统相关疾病的治疗已经取得很大进展.该文就MENK的免疫调节作用及其受体等方面的研究进展予以综述,并展望其应用于癌症、艾滋病等免疫相关疾病治疗方面的广阔前景.
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蛋氨酸脑啡肽研究进展及其应用前景
由于蛋氨酸脑啡肽联系着神经、免疫两大系统,具有独特的生物学活性,多年来一直受到广泛重视.目前,蛋氨酸脑啡肽应用于免疫相关疾病治疗的研究已经取得显著进展.本文综述了蛋氨酸脑啡肽的生物学功能的研究进展及其作用机制,并展望了其应用于癌症、艾滋病等重大免疫相关疾病的广阔前景.
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蛋氨酸脑啡肽联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞HepG2的增殖和凋亡的影响
目的 探讨蛋氨酸脑啡肽(methionine enkephalin,MENK)及蛋氨酸脑啡肽联合5-氟尿嘧啶对肝癌细胞HepG2的增殖和凋亡的影响.方法 采用MTS法检测细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色法观察用MENK及MENK联合5-氟尿嘧啶处理后的HepG2细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MENK(5 mmol/L)及MENK联合5-氟尿嘧啶(5 mmol/L+0.05 mmol/L)在用药24h后,对肝癌HepG2细胞具有显著的生长抑制作用(t=14.58、40.37,P＜0.05),在用药48 h后,抑制作用也非常明显(t=13.14、29.85,P＜0.05);Hoechst33258荧光染色后,MENK及MENK联合5-氟尿嘧啶处理组的细胞出现典型的凋亡形态学变化;流式细胞仪检测结果显示,与空白组比较,MENK组细胞凋亡率为15.6％(t=3.942,P＜0.05),MENK联合5-氟尿嘧啶处理组的细胞凋亡率为47.7％(t=17.19,P＜0.05).结论 MENK及MENK联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,并诱导细胞凋亡,且联合用药组的抑制作用强于单独用药组.
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蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及TLR-4表达的协同作用
观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟及TLR-4表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源DCs免疫功能的调节机制.体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7d后用RT-PCR法检测TLR-4的mRNA表达,用western-blot检测TLR-4蛋白的表达,同时用流式细胞仪(FACS)分析DC表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC的功能.结果显示MENK协同诱导组树突状细胞TLR-4和共刺激分子的表达高于正常对照组(P＜0.01)和GM-CSF诱导组(P＜0.05)并具有强的激发MLR的能力.提示MENK可以促进DC成熟及TLR-4的表达,增强DC免疫功能.
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赛庚啶治疗偏头痛和对血浆内β内啡肽和蛋氨酸脑啡肽的影响
目的:观察赛庚啶对偏头痛疗效及血浆β-内啡肽和蛋氨酸脑啡肽的影响.方法:采用前瞻性、双盲法给10例健康志愿者和38例偏头痛病人(男性15例,女性23例,年龄37 a±s 10 a)分别服用赛庚啶4 mg,8 mg和12 mg,bid×12 wk.于wk 4,wk8,wk 12后观察头痛日数和指数的改变,并测定发作期和间歇期血浆内上述2种阿片肽.结果:赛庚啶和安慰剂均使头痛日数和指数明显下降,使发作期和间歇期2种阿片肽血浆浓度显著升高.结论:赛庚啶可促进β-内啡肽分泌,减少活性物质释放,促进蛋氨酸脑啡肽分泌使对疼痛的抑制增强,在8 mg剂量或以上时对偏头痛有效.
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多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用
目的 探讨多柔比星联合蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长抑制及Tau蛋白磷酸化的调节作用.方法 阳性对照组SH-SY5Y细胞以1.25 mg·L-1的多柔比星处理,低、中、高剂量实验组SH-SY5Y细胞分别以1.25 mg·L-1的多柔比星+10-7、10-5、10-3 mol·mL-1 Met-ENK处理,阴性对照组细胞以等量生理盐水处理.MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率,流式细胞术和Hoeschest 33258细胞核染色检测各组SH-SY5Y细胞凋亡情况,Western Blot法检测各组SH-SY5Y细胞p-Tau蛋白表达情况.结果 与阴性对照组比较,干预24、48、72 h后,阳性对照组和各实验组细胞存活率降低,且实验组低于阳性对照组,实验组细胞存活率随着Met-ENK浓度的增大逐渐降低(P<0.05).与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例显著升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P<0.05);阳性对照组和各实验组S期细胞比例显著降低,中、高剂量实验组低于阳性对照组(P<0.05).与阴性对照组比较,阳性对照组和各实验组细胞p-Tau蛋白相对表达量明显升高,中、高剂量实验组高于阳性对照组(P<0.05).结论 多柔比星联合Met-ENK可抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长,并促进其凋亡,这可能与上调Tau蛋白磷酸化水平有关.
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蛋氨酸脑啡肽小鼠体内抗癌活性初探
目的：研究蛋氨酸脑啡肽（MEK）是否具有抗癌、增加化疗药物疗效和增强或保护免疫功能的作用。方法BALB／c小鼠40只，右腋皮下接种H22癌细胞，接种24 h后随机分为5组，依次为阴性对照组（生理盐水0.2 mL／kg）、5‐Fu组（10 mg／kg）、MEK组（200 mg／kg）、5‐Fu＋MEK联合给药组（10 mg／kg＋200 mg／kg）和阳性对照组（20 mg／kg 5‐Fu）。腹腔注射受试药品，每日1次，连续给药8 d ，处死动物。计算肿瘤抑制率、胸腺和脾脏脏器指数以及测定CD3＋和CD4＋ T细胞表达。结果单独给予MEK 200 mg／kg或5‐Fu 10 mg／kg时两组对肿瘤的抑制作用相近，对肿瘤的抑制率分别为75.13％和74.26％；联合给予MEK和5‐Fu时，其抑瘤率为88.25％，明显高于单独使用5‐Fu。MEK对小鼠脾脏及胸腺无明显抑制作用，与5‐Fu合用时能显著减轻5‐Fu对免疫脏器胸腺的抑制作用。单独给予MEK 200 mg／kg时，能明显提高荷瘤小鼠的CD3＋和CD4＋ T细胞表达，与阴性对照组和5‐Fu各剂量组比较差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。结论 MEK具有良好的抗肿瘤活性及增强机体免疫功能的作用，与化疗药物合用能增强其疗效同时减轻其毒性，对免疫脏器有保护作用。
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蛋氨酸脑啡肽对MCF-7/ADR生长抑制作用机制的初步研究
目的 研究阿片生长因子蛋氨酸脑啡肽(Met-ENK)对MCF-7/ADR肿瘤细胞的抑制作用的效果及机制的初步研究.方法 采用CCK-8法检测不同剂量的Met-ENK(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7 mol/L)对乳腺癌细胞MCF-7/ADR作用48 h后的肿瘤抑制率;采用细胞计数法绘制Met-ENK孵育0、24、36、48及 72 h后的MCF-7/ADR的生长曲线;采用流式细胞术及PI染色法记录用药孵育48 h后,MCF-7/ADR细胞周期变化情况.结果 结果显示与空白对照组相比,Met-ENK对MCF-7/ADR细胞的生长有明显的抑制作用,呈时间依赖性,但不呈剂量依赖性,10-6 mol/L浓度时,Met-ENK抑制肿瘤细胞生长效应强;在Met-ENK作用后主要将细胞抑制于生长周期的G0/G1期.结论 Met-ENK对MCF-7/ADR肿瘤细胞有明显的抑制作用,且主要是通过影响细胞周期阻滞来发挥抑制肿瘤细胞生长的作用.但其机制仍需进一步研究及证实.
关键词： 蛋氨酸脑啡肽 MCF-7/ADR细胞株 G0/G1期 抑制作用 -
不同浓度蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4+T细胞表面三种阿片受体作用的比较研究
目的:从基因水平探讨不同浓度蛋氨酸脑啡肽(MENK)对小鼠CD4+T细胞表面OGFr mRNA转录的影响.方法:6～8周龄BALB/c雌性小鼠体外不同浓度MENK刺激.采用RT-PCR技术检测OGFr mRNA的表达量,所得不同浓度MENK刺激的OGFr mRNA和β-actin条带密度比值作为相对表达强度,数据采用SPSS17.0软件进行统计分析.结果:10-12mol/ml的MENK体外刺激能显著促进小鼠CD4+T细胞OGFrmRNA表达,P＜0.05.结论:适当浓度的MENK体外刺激能促进小鼠CD4+T细胞OGFr mRNA高效表达.
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蛋氨酸脑啡肽联合低剂量纳曲酮治疗胰腺癌的实验研究
目的:通过单独应用MENK、NTX与联合应用MENK与NTX的体内外实验,探讨MENK、NTX及二者联合时对胰腺癌的抑制作用.方法:体外实验中,MTS方法检测各实验组中胰腺癌增殖细胞的抑制情况;体内实验中,通过建立胰腺癌荷瘤小鼠模型,检测各实验处理组中胰腺癌的抑制情况.WB法检测荷瘤小鼠胰腺癌组织阿片受体蛋白表达量;流式细胞术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群(CTL、Treg、NK、γδT)的增殖情况.结果:在体外实验中,MENK在浓度为10-6 mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用强;NTX在浓度为10-5 mol/L时对胰腺癌细胞的抑制作用强;二者相比较,MENK的作用更加显著,具有统计学意义(P<0.05);在体内实验中,MENK与NTX联合应用在48小时后与对照组相比较,具有统计学意义(P<0.05),在96小时,与MENK组和NTX组相比较抑癌率升高,具有统计学意义(P<0.05);在体内实验中,在1次/24 h的给药方式下,MENK在剂量为20 mg/kg时抑癌效果显著;NTX在剂量为5 mg/kg时抑癌效果显著;MENK组与NTX组相比较作用更加显著,具有统计学意义(P<0.05);MENK与NTX联合应用时,MENK在剂量为20 mg/kg 1次/24 h与NTX在剂量为5 mg/kg 1次/96 h给药方式时,抑癌效果显著,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05);Western-blot技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织阿片受体的蛋白的表达含量,NTX组与MENK+NTX组肿瘤组织阿片受体蛋白表达量增加,NTX组高于MENK+NTX组,具有统计学意义(P<0.05);流式细胞技术检测荷瘤小鼠淋巴细胞亚群增殖情况,MENK组、NTX组与MENK+NTX组都可以促进淋巴细胞亚群(CTL、NK、γδT)增殖,抑制Treg增殖,与对照组相比具有统计学意义(P<0.05).结论:MENK在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,NTX在体内外能够抑制胰腺癌细胞增殖,两者相比MENK作用更加显著;MENK与NTX联合应用,在NTX给药72小时后具有协同作用;NTX在体内能够上调肿瘤组织阿片受体的蛋白表达;MENK和NTX均能在体内能够促进CTL、NK、γδT细胞的增殖,抑制Treg细胞的增殖,二者联合具有协同作用.
