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CD61阳性人脂肪来源细胞体外软骨分化潜能的初步研究
目的：利用流式细胞仪分选人脂肪来源细胞（adipose derived cells, ADCs）软骨潜能亚群并初步检测其体外成软骨能力。方法采用酶消化法分离ADCs，以CD61为表面标志，通过流式细胞仪分选纯化，所得CD61+和CD61-两群细胞进行体外成软骨诱导，3周后进行软骨特异性细胞外基质二型胶原免疫荧光染色和软骨特异性基因SOX9和COL II定量PCR检测。结果采用CD61作为分选标志可通过流式细胞仪分选纯化获得两群细胞亚群。免疫荧光染色结果显示两群细胞经软骨诱导后均表达二型胶原。定量PCR结果表明CD61+组SOX9和COL II表达高于CD61-组（p<0.05）。结论CD61+ADCs具有较强体外软骨分化能力，CD61有望成为ADCs软骨潜能亚群体外分选标志。
关键词： 脂肪干细胞软骨潜能亚群 CD61 分选纯化 -
一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究
目的 通过对一氧化碳中毒迟发记忆障碍小鼠血小板膜糖蛋白CD61的研究,探索一氧化碳中毒迟发脑病的发病机制.方法 筛选出急性中毒迟发记忆障碍小鼠,测其血CD61表达情况.结果 急性一氧化碳中毒小鼠中有10%出现迟发记忆障碍,其血CD61的表达量明显高于对照组.结论 血小板活化和血栓形成可能是迟发脑病的发病机制之一.
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丹参多酚酸盐对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者血小板和内皮细胞功能的影响
目的 探讨丹参多酚酸盐(DSM)对重度慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者血小板和血管内皮细胞功能变化的影响.方法 将40例中重度AECOPD患者按随机数字表法分为常规治疗组、DSM组,每组20例;并选择同期20例健康者作为健康对照组.两组常规治疗相同;DSM组每日加用DSM0.2 g静脉滴注,连用2周.应用酶联免疫吸附法检测血浆膜糖蛋白140(GMP140)和血管性血友病因子(vMF),应用流式细胞术检测血小板膜糖蛋白P-选择素/血小板质膜蛋白(CD62P/CD61)表达双阳性血小板百分率.结果 两个治疗组治疗前GMP140C常规治疗组(17.51±2.75)μg/L,DSM组(16.94±2.57)μg/L]、vMF水平(常规治疗组(13.64±2.37)μg/L,DSM组(14.14±2.17)μg/L]及CD62P/CD61双阳性血小板百分率[常规治疗组(20.24±2.64)%,DSM组(19.54±2.69)%]较健康对照组[(9.25±1.80)μg/L、(6.13±1.17)μg/L、(11.21±1.11)%]均显著上升(均P<0.01);治疗后两组GMP140、vMF水平及CD62P/CD61双阳性血小板百分率显著降低,且DSM组的下降幅度[GMP140(3.91±0.57)μg/L,vWF(3.86±0.71)μg/L,CD62P/CD61(3.69±0.62)%]较常规治疗组[GMP140(2.30±0.33)μg/L,vWF(2.72±0.45)μg/L,CD62P/CD61(2.24±0.45)%]更为显著(均P<0.01),但是均高于正常水平.结论 DSM有显著抑制血管内皮细胞和血小板活化的作用,可预防血栓性疾病.
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血小板活化状态与肝硬化
目的:探讨肝硬化(LC)患者血小板功能的异常在其中的作用.方法:肝硬化35例,正常人30例,利用流式细胞仪技术检测.结果:LC患者和正常人血小板表面膜蛋白CD61、CD63、纤维蛋白原受体(PAC-1),分别为(78.27±30.23)、(3.52±6.01)、(4.32±3.28)和(42.18±14.92)、(0.51±0.34)、(0.36±0.31),LC患者比正常人明显升高(P＜0.05,P＜0.05,P＜0.01).结论:CD61、CD63、PAC-1可以作为LC患者诊断及疗效观察的一个指标.
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流式细胞术计数血小板
目的建立流式细胞仪计数血小板的实验方法.方法用PE标记抗人CD61抗体标记全血中血小板,同时加入5 μl已知浓度的FITC-微球溶液.流式细胞仪检测血小板(FL2)和微球(FL1)的数量,换算出患者血小板浓度. 结果流式细胞仪法与血细胞计数仪法计数结果无显著性差异,低血小板组两法相关程度低于正常血小板组,提示流式细胞仪计数血小板能排除多种干扰因素,低检出血小板量为0.150×109/L.该方法CV=5.4%(Plt=220×109/L)和11.1%(Pl t=1.57×109/L). 结论流式细胞仪法适合对低血小板标本血小板的精确计数.
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复方丹参液对内毒素引起细胞黏附分子表达的影响
目的研究复方丹参对内毒素引起细胞黏附分子CD11a、CD61和ICAM-1表达的影响,进一步深入探讨复方丹参液预防细胞黏附的作用机理.方法复方丹参液大剂量组大鼠每天用0.5g复方丹参颗粒水溶液灌胃2次/d,小剂量组每天用0.3mg灌胃2次/d,喂药10 d,正常组和对照组不给药.各组大鼠由尾静脉注入内毒索1 mg/kg,注入后2、4 h分别进行CD11a、CD61、ICAM-1的测定,正常组不给内毒素.结果大鼠注入内毒索2 h后,血小板CD61表达明显比正常组高.复方丹参液大剂量、复方丹参液小剂量用药组血小板CD61表达比对照组明显减少,与正常组相近.复方丹参液对CD11a和ICAM1的表达与对照组无明显差别.结论复方丹参液可通过减少血小板黏附蛋白CD61的表达,减轻血小板黏附和聚集,降低血液的黏度,改变红细胞的变形性,达到改善或促进微循环的作用.
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云南白药对大鼠血小板聚集及膜糖蛋白表达的影响
目的研究大鼠服用云南白药后,血小板在ADP及花生四烯酸诱导下聚集率的变化,以及血小板糖蛋白CD61及CD62P在静息及ADP诱导条件下在膜表面表达的变化.方法大鼠ig给药3d后,取血,用血小板聚集仪测定血小板的聚集率以及用流式细胞仪测定CD61和CD62P的表达.结果无论在ADP或花生四烯酸诱导下,云南白药组的血小板聚集率都显著高于对照组(P<0.01);在静息条件下,CD61及CD62P在膜表面的表达虽有少量增加,但与对照组相比没有显著差异(P>0.05),但在ADP刺激条件下,给药组CD61及CD62P表达比对照组都有显著增加(P<0.01).结论在诱导条件下,云南白药可以促进血小板聚集及血小板膜上CD61及CD62P的表达,但不会增加静息血小板表面CD41及CD62P的表达,不会形成促血栓倾向.
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三七对脑出血合并VTE大鼠血小板活化因子的影响
目的 探索三七对脑出血合并VTE大鼠的血小板活化因子的影响.方法 将50只大鼠按随机数字表法分为空白对照组、假手术组、脑出血合并VTE模型组、阳性对照组、三七组(浓度为2.5 g/kg),每组10只,分别采取相应处理及造模;在脑出血建模成功后24 h对大鼠行头颅MRI,VTE造模后48 h结扎血管组织进行苏木精-伊红(HE)染色,并采用流式检测分析血小板活化因子CD61及CD62P表达.结果 大鼠头颅MRI示三七组大鼠出血量、血肿程度和梗死面积明显比模型组少或减轻;大鼠结扎血管组织HE染色镜下示模型组血管栓塞严重,而三七组血管栓塞明显好转.各组大鼠脑组织中CD61的表达量无明显差异(F=2.76,P>0.05),与空白对照组比较,模型组、阳性对照组和三七组大鼠脑组织中CD62P的表达量明显上调(t分别=-2.79、-2.06、-3.38,P均<0.05);与模型组比较,三七组大鼠脑组织中CD62P的表达量明显上调(t=-0.59,P<0.05).各组大鼠结扎血管段组织中CD61的表达量无明显差异(F=1.76,P>0.05),与空白对照组比较,模型组、阳性对照组和三七组大鼠结扎血管段组织中CD62P的表达量明显上调(t分别=-7.69、-5.73、-4.37,P均<0.05);与模型组比较,三七组大鼠结扎血管段组织中CD62P的表达量明显下调(t=3.32,P<0.05).结论 三七能一定程度上双向调节血小板活化因子CD61和CD62P的表达,对脑出血合并VTE大鼠有一定改善作用.
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川崎病患者血小板活化状态及血小板参数的观察及临床意义
目的:探讨川崎病患儿血小板膜糖蛋白CD61、CD62P以及血小板参数PLT、MPV、PDW的变化及意义.方法:采用流式细胞术测定50例川崎病患者血小板活表面活性标记糖蛋白CD61、CD62P的表达,同时应用全自动血球分析仪对血小板的参数进行测量,并与对照组比较.结果:川崎病患儿血小板CD61、CD62P、PLT和MPV水平明显高于正常对照组(P＜0.01)；川崎病合并冠状动脉病变组患者与非冠状动脉病变组患者相比,血小板CD61、CD62P水平增高(P＜0.01或P＜0.05)；血小板CD61、CD62P与MPV、PLT之间呈显著正相关关系(均P＜0.01);CD61、CD62P表达之间显著正相关(P＜0.01).结论:血小板活化参与了川崎病的病理过程,而且CD61和CD62P与川崎病冠状动脉病变有一定的关系.
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血小板膜糖蛋白CD61、CD62P在小鼠脓毒症炎性反应中的调控作用
目的 观察血小板膜糖蛋白CD61,CD62P在脓毒症小鼠炎性反应中的调控作用.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作小鼠脓毒症模型;将60只BALB/c雄性小鼠随机分为阴性对照组、假手术组、CLP组、CLP+血小板膜糖蛋白受体拮抗剂替罗非班组(替罗非班组).检测处理后24 h外周血血小板CD61、CD62P和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6的表达.结果 CLP组血小板计数为(167.0 ±31.4)×106/L较阴性对照组[(289.7 ±45.9)×106/L]、假手术组[(267.7±25.4)×106/L]、替罗非班组[(217.0 ±29.7) ×106/L]明显降低(P＜0.01);CLP组CD61、CD62P[(91.22 ±2.96)％、(7.87±2.90)％]及TNF-α、IL-6[(723.51±96.65)、(757.35±131.48) ng/L]表达较对照组明显升高(P＜0.01),替罗非班组CD61、CD62P[(67.50±8.67)％、(3.53±0.78)％]及TNF-α、IL-6[(426.38±16.69)、(482.32±56.73)ng/L]表达较CLP组降低(P＜0.01);脓毒症小鼠血小板膜糖蛋白CD61、CD62P表达与炎性因子的表达呈正相关.结论 血小板膜糖蛋白CD61、CD62P可能通过调控炎性因子表达参与脓毒症炎性反应的病理生理过程.
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CD61和CD62p动态变化在川崎病中的临床意义
目的 分析CD61和CD62P动态变化与川崎病(Kawasaki disease,KD)及其合并冠状动脉损伤之间的关系,探讨KD的发病机制.方法 将70例KD患儿按照冠脉损伤程度分为对照组40例,观察组30例,应用流式细胞技术(FCM)检测患儿血小板CD61和CD62P在人院即刻、5d、10d、15d的表达水平及同时应用心脏彩超对冠脉内径进行测量,并行分析.结果 两组患儿治疗前CD61、CD62p、冠脉内径比较差异有统计学意义,(P＜0.05);两组患儿治疗后CD61、CD62p、冠脉内径比较,差异有统计学意义(R0.05).结论 血小板CD61、CD62p水平变化可有效预测冠状动脉狭窄及本病的诊治具有比较重要的临床意义.
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流式细胞术检测特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒
目的 建立CD61与Annexin V双染法检测外周血中循环血小板微粒的方法,探讨血小板微粒在特发性血小板减少性紫癜患者中的临床意义.方法 使用流式细胞术检测了12例特发性血小板减少性紫癜患者和15例健康对照者外周血中血小板微粒的含量.采用CD61与Annexin V双染法,CD61弱阳性并且Annexin V强阳性者定义为血小板微粒,分析血小板微粒的百分含量.结果 CD61与Annexin V双染法能够清楚地区分出富血小板血浆中血小板微粒.特发性血小板减少性紫癜患者血小板微粒为12.3%士5.4%,健康对照组为1.1%士0.3%,P＜0.05,差异显著.结论 CD61与AnnexinV双染法能够准确检出外周血中循环的血小板微粒.血小板微粒检测在特发性血小板减少性紫癜患者中有一定的临床意义.
关键词： CD61 AnnexinV 血小板微粒 流式细胞术 特发性血小板减少性紫癜 -
血栓形成时间的推断
目的 观察大鼠静脉血栓形成时间的变化规律,为血栓致死的法医学案件中关于血栓形成时间推断提供新的思路与方法. 方法 80只大鼠随机分为术后0h、3h、6h、12h、1d、3d、1周、2周、3周、4周组共10组,通过“狭窄法”建立大鼠静脉血栓模型,采用HE染色、Perls染色、Von Kossa染色观察血栓形成、机化和再通过程中含铁血黄素、钙盐的变化特点,并运用免疫组织化学染色方法检测CD61、α-SMA、CD34的表达变化.结果 术后3h血小板黏附于裸露血管内膜,术后1d血小板反复堆积形成血小板小梁,术后3d管壁增生、成纤维细胞长入血栓内部、血栓机化,内皮细胞覆于血栓表面形成新的血管,血流重建再通.血栓形成3h及血栓再形成时期(4周)CD61表达,并于血栓形成1d达其峰值;血栓形成3d含铁血黄素析出、α-SMA开始表达;血栓形成1周钙盐沉着、CD34阳性表达出现.结论 含铁血黄素、钙盐、CD61、α-SMA和CD34在血栓形成过程中均出现时间依从性变化特点,有望为血栓致死的法医学案件关于血栓形成时间的推断提供参考.
