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CYP1A1和CYP1A2基因多态性与汉族女性乳腺癌的关系
目的 探讨CYP1A1基因MspⅠ位点与CYP1A2基因C734A位点多态性与汉族女性乳腺癌的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术和限制性核酸内切酶酶切的方法,检测2011年9月至2012年8月在四川省医学科学院四川省人民医院确诊的144例女性乳腺癌患者(乳腺癌组)和152例同期健康体检正常女性(对照组)CYP1A1基因MspⅠ与CYP1A2基因C734A多态性位点的基因型,用χ2检验比较两组等位基因频率的差异.结果 在乳腺癌组与对照组中,CYP1A1基因MspⅠ位点T等位基因频率分别为0.73和0.65,两者差异有统计学意义(χ2=4.94,P=0.03),C等位基因与T等位基因相比,乳腺癌发病风险OR为0.67 (95%CI:0.47～0.96);CYP1A2基因C734A位点C等位基因频率分别为0.26和0.29,两者差异无统计学意义 (χ2=0.63,P=0.43).将乳腺癌组按照ER、PR表达与否进一步分组后,CYP1A1基因MspⅠ与CYP1A 2基因C734A 2个多态性位点的等位基因频率在ER(+)与ER(-)组之间以及PR(+)与PR(-)组之间差异均无统计学意义[ER(+)组比ER(-)组:χ2=0.34、0.01;PR(+)组比PR(-)组:χ2=0.60、0.68;P均>0.05].结论 汉族女性CYP1A1基因MspⅠ位点多态性与乳腺癌相关联.
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黄酮类化合物对细胞色素P450 CYP1A2的抑制作用及其构效关系研究
利用本实验室已建立的体外肝微粒体模型, 测定36个黄酮类单体化合物对人细胞色素P450 CYP1A2 的抑制活性, 并使用三维定量构效关系方法研究化合物的分子结构参数与其抑制活性之间的关系. CoMSIA 模型证实黄酮类化合物的结构参数与其 CYP1A2 抑制活性存在明显的相关性(模型的相关系数R2为0.948), 且有良好的预测能力(交叉验证相关系数 q2 为0.630), 同时使用"留五法"证实模型的稳定性和可靠性.结果表明, 相对于黄酮, α-萘黄酮的π-π共轭体系更有利于提高化合物的抑制活性.根据获得的模型的三维等势图, 在α-萘黄酮基础上, 6、3′、4′位引入带正电基团或是疏水基团,同时5位引入带负电基团,能有效改善化合物的 CYP1A2 抑制活性.
关键词： 细胞色素P450 CYP1A2 抑制活性 黄酮类化合物 定量构效关系 药物设计 -
地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用
目的 试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制.方法 给SD大鼠腹腔注射地非三唑,采用Trizol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1, 2及4 d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平.结果 地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加,空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040, 诱导1, 2及4 d的吸光度比值分别为0.343±0.055, 0.417±0.045及0.603±0.083;空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189, 而诱导1,2及4 d的吸光度比值分别为1.510±0.226, 3.057±0.518及4.120±0.458.随着诱导时间的增加,细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加,诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563.结论 地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用.
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注射用丹参总酚酸(冻干)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用
目的 探讨注射用丹参总酚酸(冻干)(SLI)对人CYP450酶和P-糖蛋白体外抑制作用以及对大鼠CYP1A2和CYP3A体内诱导作用.方法 ①应用P450-GloTM CYP450检测试剂盒,通过化学发光法测定SLI和经典抑制剂对细胞色素P4501 A2(CYP1A2),CYP2 D6,CYP3A4,CYP2 C19和CYP2C9的IC50值,通过比较SLI和经典抑制剂对相应细胞色素P450亚型的IC50值来判断SLI对人CYP450酶的体外抑制作用.②Wistar大鼠分别iv给予SLI 3,10和30 mg· kg-1和诱导剂苯巴比妥钠20 mg· kg-1,采用探针底物法,通过比较代谢产物的生成速率来评价SLI对大鼠CYP1 A2和CYP3A的诱导作用.③应用ATP酶检测试剂盒,通过化学发光法测定ATP酶活性来评价SLI是否为P-gp的底物或抑制剂.结果 ①CYP1 A2,CYP2 C9,CYP2 C19,CYP2 D6和CYP3A4抑制剂的IC50与SLI对其的IC50进行比较(CYP1A2:0.12 μm0l·L-1vs840 μm ol·L-1;CYP2C9:3.362 μmol·L-1vs704 μmol·L-1;CYP2C19:3.236 μmol·L-1vs306 μm ol·L-1;CYP2D6:0.117 μm ol·L-1 vs2660 μm0l·L-1;CYP3A4:0.078 μmol·L-1 vs 1780 μmol·L-1).②与空白对照组(86.4±6.3)nmol· g-1· min-1相比,SLI3,10和30 mg· kg-1组CYP1 A2活性分别为83.4±6.6,82.5 ±4.0和(83.4±6.6)nmol ·g-1· min-1.与空白对照组(16.1±0.9)nmol·g-1· min-1比较,SLI3,10和30 mg· kg-1组CYP3A活性分别为15.7±0.6,15.9±0.7和(15.9 ±1.0)nmol·g-1 ·min-1,无显著性差异.③以临床血药浓度为依据设计的一系列浓度的SLI 0.0002,0.0006,0.002,0.006,0.017,0.052,0.156和0.468 g·L-1的ATP酶活性分别与空白对照组进行比较(5.8,5.3,5.8,5.5,5.8,5.2,,5.8,5.3,vs 5.75 μmol·g-1 ·min-1),无显著性差异.结论 SLI临床给药剂量既不能体外抑制人CYP1A2,CYP2 D6,CYP3A4,CYP2 C19和CYP2C9酶活性,也不能诱导大鼠CYP1 A2和CYP3A,同时也不是P-gp的体外抑制剂或底物.
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细胞色素P450的工具药选择及种属差异的研究进展
药物对代谢酶的影响以及代谢产生的药物相互作用与药物安全性密切相关.细胞色素P450( CYP)是参与内、外源性化合物Ⅰ相代谢反应的重要超家族酶系.特异性探针、诱导剂、抑制剂以及实验动物模型广泛应用于CYP介导的代谢途径以及药物相互作用研究.已知CYP底物存在明显重叠性,且表达调控机制种属差异显著,故研究中选择适当的实验动物以及特异性的探针、诱导剂和抑制剂,成为影响数据外推的关键问题.本文简要综述了CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4/5的常用体内外探针、诱导剂、抑制剂以及动物种属表达调控的差异.
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注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响
目的 研究注射用盐酸头孢他美对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系CYP1A2、CYP3A4和CYP2E1活性的影响.方法 将SD大鼠分成盐酸头孢他美给药组和生理盐水空白组,每组6只,雌雄各半,给药组尾静脉注射盐酸头孢他美50mg/(kg·d),连续给药7d,每天2次.HPLC法同时测定CYP450的3种同工酶特异性探针底物在SD大鼠肝微粒体内代谢产物生成量和原型探针底物降解量,判断酶亚型活性变化.分析柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流速1.0 mL/min.CYP1A2代谢样品测定条件为甲醇(0.1％甲酸)(A)-水(0.1％甲酸)(B),0～5 min:18％A,5～10 min:18％～60％A,10～15 min:60％A,检测波长为247 nm; CYP3A4代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(0.02％甲酸)(B),0～11 min:40％～60％A,检测波长为223 nm;CYP2E1代谢样品测定条件为甲醇(A)-水(B),0～10 min:37％～75％A,检测波长为287nm.结果 探针底物及其代谢产物在测定浓度范围内线性关系良好(r≥0.999 7),精密度RSD＜6％(n=5),提取回收率83.2％～97.5％.SD大鼠连续注射给予盐酸头孢他美后,CYP3A4的活性与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),可能存在诱导作用;CYP1 A2和CYP2E1的活性与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 静注给予盐酸头孢他美能诱导SD大鼠肝微粒体CYP3A4,对CYP1A2和CYP2E1没有诱导或抑制作用.提示经CYP3A4代谢的药物在临床上与注射用盐酸头孢他美合用时,可能存在潜在药物-药物相互作用.
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雌激素代谢基因CYP1A2和COMT单核苷酸多态性与妊娠期肝内胆汁淤积症关系的研究
目的:探讨参与雌激素代谢的CYP1A2和COMT基因多态性与成都地区妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对成都地区100例ICP患者(ICP组)和100例正常孕妇(对照组)的CYP1A2基因5'-侧翼区G-2964A多态和COMT基因第4外显子第158号密码子G→A点突变所引起的缬氨酸→蛋氨酸(Val 158 Met)的错义突变多态进行分析.结果:CYP1A2 GA杂合基因型明显增加ICP的发病风险(P=0.029,OR=1.896),COMT含V等位基因的VV和VM基因型也明显增加ICP的发病风险(P=0.027,OR=3.996);两基因组合分析表明同时具有CYP1A2等位基因G和COMT等位基因V的个体发生ICP的风险显著增加(P=0.011,OR=2.852).结论:CYP1A2和COMT基因单核苷酸多态性与成都地区ICP的易感性有关.
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中国人肝微粒体中细胞色素P450酶含量和活性的个体间差异
比较不同中国人肝微粒体中几种重要细胞色素P450(CYP)的酶含量和活性。方法：运用West-ern斑点分析和光密度扫描，对17个汉族、17个壮族和8个苗族受试者肝微粒体中的细胞色素P4501A2(CYP1A2)、2C9及3A4进行定量；非那西丁、甲磺丁脲、异喹胍和奥美拉唑分别用于体外测量CYPIA2、2C9、2D6及3A4的活性。结果：CYP1A2、2C9及3A4的含量和活性具有很大的个体间变异，另外CYP2D6的活性在各样本间也有很大差异；CYP3A4(32％)是中国人肝微粒体中含量丰富的CYP，CYP2C9(19％)和CYP1A2(16％)的含量也很可观；除了CYP1A2的含量和活性具有一定的种族和性别差异外，未发现其它CYP具有种族和性别差异；CYP1A2、2C9和3A4的酶蛋白含量分别和它们的活性具有很好的相关性。结论：我们的结果为在中国人中进行药物代谢研究提供了非常有价值的信息。
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体外研究人细胞色素P450在雌二醇代谢中的作用
目的:研究雌二醇在cDNA表达的P450和人肝微粒体中的代谢机制,为在体内研究细胞色素P450活性与肿瘤发生的关系提供依据.方法:用HPLC-ECD法测定雌二醇的代谢产物.通过雌二醇在不同cDNA表达的P450中代谢,13例人肝微粒体中相关性研究,抑制剂对代谢的影响以及微粒体中17β-羟基脱氢化和2-羟基化代谢的催化动力学的研究来推断雌二醇的代谢机理.结果:在cDNA表达的P450中,催化2-羟基化代谢的P450按活性排列依次为CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9.CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8均具有较高的催化17β-羟基脱氢化活性.抑制CYP1A2与抑制CYP3A4对2-羟基化代谢产物生成的影响相似,可认为CYP1A2和CYP3A4在人肝微粒体中催化2-羟基化代谢的作用相近.雌二醇代谢的途径与底物浓度有关,低浓度时(1,10 μmol/L)17β-羟基脱氢化为主要代谢途径;高浓度时(100μmol/L),2-羟基化成为主要代谢途径.结论:高底物浓度时,雌二醇主要由CYP1A2和CYP3A4催化代谢为2-羟基化产物.低底物浓度时,主要由CYP2C9、CYP2C19和CYP2C8催化生成17β-羟基去氢化产物.
