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子宫颈癌癌前病变和早期子宫颈鳞癌组织中血小板源性生长因子的表达及其临床意义
肿瘤组织的新生血管和新生淋巴管发生受许多因素的调控,其中血小板源性生长因子(platelet-derived growthfactor,PDGF)家族成员及其受体在肿瘤组织新生血管及淋巴管的发生过程中发挥着重要作用;PDGF-A和PDGF-B在宫颈癌细胞中有表达[1].研究表明,宫颈癌组织中存在PDGF受体(PDGFR)的表达,被认为是潜在的抑癌位点[2].动物实验发现,PDGF-A、B均能促进肿瘤淋巴管的新生,其中PDGF-B对淋巴管新生具有较强的作用[3];PDGF-A可以促进非小细胞肺癌的血管新生[4].PDGF-C、D是近年来发现的PDGF家族新成员,在多种肿瘤细胞系中有表达,PDGF C具有促进血管新生的作用[5-6],然而,两者在人类疾病中的作用机制有待深入研究.本研究旨在定量检测宫颈病变组织中的PDGF-A、B、C、D基因的表达水平,并探讨其与淋巴管内皮标志物——同源框转录因子Prox-1代表的微淋巴管新生之间的关系.
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PDGF- A、PDGFR-α在单纯创伤和照射复合创伤愈合过程中伤口成纤维细胞内的表达与意义
目的探讨局部照射对创伤愈合过程中伤口成纤维细胞PDGF-A及PDGFR-α表达的影响及意义.方法将132只Wistar大鼠分为单纯创伤组(对照组)和照射复合创伤组(照射组),用免疫组织化学、原位RT PCR和图像分析方法检测两组伤口伤后1～60 d各时间点PDGF-A、PDGFR-α蛋白及PDGF-A mRNA的表达规律.结果局部照射使伤口愈合各阶段滞后、延长.对照组伤口成纤维细胞PDGF-A和PDGFR-α表达有明显的时相性,PDGF-A在伤后2～21 d可见表达,5 d为表达高峰;照射组在伤后各时间点其表达均减弱,且表达时相延长,伤后28 d仍有表达;PDGFR-α在对照组于伤后2～15 d有表达,5 d时达高峰,照射组PDGFR-α表达减弱,但其表达时相与对照组一致.结论 照射抑制伤口成纤维细胞内源性PDGF-A及PDGFR-α的表达,表明照射使成纤维细胞自分泌PDGF-A功能减弱并对外源性PDGF-A的反应性减弱,进而导致伤口愈合延迟.
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银屑病患者骨髓基质细胞分泌EGF、PDGF-A和PDGF-B水平研究
目的 通过比较银屑病患者与对照组骨髓基质细胞分泌表皮生长因子(EGF)、血小板源性生长因子-A(PDGF-A)和血小板源性生长因子-B(PDGF-B)水平的差异,揭示银屑病患者骨髓造血微环境的异常.方法 采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,收集传3代后又培养72 h的骨髓基质细胞及培养上清,用流式细胞仪鉴定细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中EGF、PDGF-A和PDGF-B的水平.结果 90%以上细胞表面抗原高表达CD29,而CD34、CIM5及HLA-DR表达阴性,即骨髓基质细胞纯度在90%以上;患者组骨髓基质细胞分泌EGF和PDGF-B均显著低于对照组(P＜0.05),而PDGF-A的分泌水平两组间无统计学差异(P＞0.05).结论 银屑病患者骨髓基质细胞分泌的某些细胞因子存在异常,表明患者骨髓造血微环境可能存在异常.
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PDGF-A和MVD在大肠癌中的表达及预后意义
目的:探讨血小板衍生生长因子A(Platelet-Derived Growth Factor-A,PDGF-A)和微血管密度(Microvessel Density,MVD)在大肠癌组织中表达与患者生存预后关系.方法:收集10年间收治生存期≥5年及≤3年大肠癌患者标本各30例,应用免疫组织化学测定这60例大肠癌组织中PDGF-A和MVD表达,分析检测结果与临床病理特点及患者预后关系.结果:≥5年30例大肠癌患者其PDGF-A,MVD表达强度与≤3年30例大肠癌患者在病理学分级,淋巴结转移间比较,均有显著性差异(P<0.05),而性别,年龄,TNM分期及浸润深度差异性不显著(P>0.050),且PDGF-A与MVD表达两者呈正相关(r=0.965,P<0.05 ).结论:PDGF-A对大肠癌生长和转移可能有促进作用,PDGF-A和MVD可以作为判断大肠癌患者预后重要参考指标.
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氟和地塞米松对成骨细胞生长因子表达的影响
目的观察低浓度氟和地塞米松对成骨细胞生长因子或其受体表达的影响,探讨其对成骨细胞发育、分化的可能机制.方法体外培养MC3T3-E1成骨细胞,利用免疫组化方法检测成骨细胞内血小板衍化生长因子-A (PDGF-A)和胰岛素样生长因子-Ⅰ的α受体(IGF-Ⅰ-Rα)表达,并对其结果作图像分析.结果氟和地塞米松对PDGF-A表达在各个时期都没有影响,而在细胞培养早期均促进了IGF-Ⅰ-Rα表达,地塞米松的促进作用尤为明显.结论低浓度氟和地塞米松均促进幼稚成骨细胞中IGF-Ⅰ-Rα表达,IGF-Ⅰ-Rα表达增高可能与其对成骨细胞增殖、分化影响有关.
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子痫前期和子痫患者胎盘和血浆PDGF-A表达及意义
目的 比较正常妊娠和子痫前期、子痫患者胎盘组织血小板源性生长因子(PDGF)-A mRNA、PDGF-AA的表达和血浆PDGF-AA蛋白水平,探讨PDGF-A与子痫前期发病的关系.方法 对子痫前期和子痫患者43例、正常妊娠20例,分别用RT-PCR检测胎盘绒毛组织PDGF-A mRNA表达水平,用免疫组化SABC法结合计算机显微图像分析软件,检测胎盘绒毛组织PDGF-AA蛋白的表达水平,用ELISA检测血浆中PDGF-AA蛋白表达水平.结果 子痫前期、子痫组及正常妊娠组胎盘组织的PDGF-A mRNA和PDGF-AA蛋白表达,病例组均高于正常组,且与病情轻重呈正相关;病例组血清PDGF-AA蛋白水平均高于正常组,也与病情轻重呈正相关.结论 子痫前期和子痫患者胎盘组织及血浆高度表达的PDGF-A可促进动脉粥样硬化形成,可能在子痫前期患者的胎盘血管病变中起重要作用,并参与子痫前期的发生和发展.
关键词： 子痫 血小板源性生长因子(PDGF) PDGF-A 子痫前期 动脉粥样硬化 -
人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化
目的克隆血小板衍生的生长因子A链(PDGF-A)的基因,并在大肠杆菌中表达.方法利用RT-PCR法,从人肝癌细胞系(HHCC)的总RNA中,扩增PDGF-A的全长cDNA,再用PCR法扩增PDGF-A成熟蛋白的全长编码序列.编码序列经测序验证后,克隆入表达载体pGEX-4T-1中,构建PDGF-A的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白,并进行谷胱甘肽(GST)亲和层析纯化.结果以RT-PCR扩增的PDGF-A基因的全长为1 255 bp,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为531 bp.构建了PDGF-A基因的原核高效表达载体pGEX-PDGF-A,表达产物主要位于包涵体内.对包涵体蛋白进行变性和复性处理后,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白.结论成功地扩增到PDGF-A成熟蛋白的编码序列,并在大肠杆菌高效表达,为进一步对PDGF-A功能的研究提供了有利的工具.
