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WAVE1和高迁移率族蛋白-1在兔尿源性脓毒血症肺组织内的表达关系
目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)和高迁移率族蛋白-1(HMGB1)在兔尿源性脓毒血症肺组织中表达上调中的关系.方法 30只健康雄性家兔随机分为假手术组(Sham组)和尿源性脓毒血症组(US组).采用肾盂内高压法制备家兔尿源性脓毒血症模型.免疫组织化学染色SABC法分别于术后12h、24 h、36h检测家兔肺组织WAVE1蛋白表达水平及肺组织中HMGB1含量及HMGB1 mRNA表达.结果 与Sham组比较,US组肺组织HMGB1含量、HMGB1mRNA表达活性升高(P＜0.05);免疫组织化学结果显示,US组肺组织中WAVE1 80.00％(12/15))呈强阳性表达,在Sham组肺组织中,WAVE1 86.67％(13/15))呈低表达或不表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 尿源性脓毒血症急性肺损伤中WAVE1与HMGB1可能具有相关性.
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儿童急性髓细胞性白血病WAVEl基因对耐药相关基因表达影响的研究
目的 探讨儿童急性髓细胞性白血病(AML)中WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因参与P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRPl)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达和调控的机制.方法 将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解(CCR)分为难治/复发组和缓解组,应用实时定量PCR(RQ-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞(BMMCs)中WAVE1、p-gp、MRPl、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平.将PCDNA3.1-WAVE1真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVE1高表达HL-60细胞,将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA(WAVE1 siRNA)转染HL60/ADR构建WAVE1低表达HL60/ADR细胞;Western blot和RQ-PCR法检测基因转染前后白血病细胞系WAVE1、MRPl及BCRP蛋白及基因的表达水平.结果 ①复发/难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平(P<0.05);②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平(P<0.05);③与HL60细胞相比较,HI.60/ADR细胞WAVE1 mRNA及蛋白表达水平增加3.53倍及95%;④转染WAVE1后HL60细胞系MRPl mRNA和蛋白表达水平分别增加16.54倍、129%,BCRP mRNA和蛋白表达水平分别增加4.93倍及96%,而转染WAVE1 siRNA的HL60/ADR细胞MRPl mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0.11倍及43%,BCRP mRNA和蛋白的表达水平为转染前的0.14倍及71%.结论 WAVE1与儿童AML的病程及预后相关,参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRPl等多个重要的耐药相关基因的表达和作用.
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WAVE1基因在K562/A02白血病细胞多药耐药中的作用
目的 探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因在K562/A02白血病细胞多药耐药机制中的作用.方法 将pEFBOS-WAVE1真核表达质粒转染K562细胞构建WAVE1高表达的K562细胞,将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA(WAVE1 siRNA)转染K562/A02细胞构建WAVE1低表达的K562/A02细胞.Western blot和RT-PCR法检测基因转染前后K562/A02细胞及K562细胞WAVE1基因及蛋白的表达;可溶性噻唑盐WST-8染色法检测阿霉素对转染前后细胞的半数抑制浓度(IC50);Hoechest33258染色法检测细胞形态学改变并计算凋亡细胞百分率;RT-PCR检测多药耐药基因mdr1 mRNA表达;Western blot检测Bcl-2表达.结果 ①与K562细胞相比,K562/A02细胞WAVE1 mRNA表达水平增加70%,蛋白表达水平增加63%.②转染WAVE1基因的K562细胞WAVE1过表达,并降低了对阿霉素的药物敏感性,使IC50从转染前的(0.05±0.00)μg/ml,增加到(2.99±0.12)μg/ml,在阿霉素浓度为1、5 μg/ml时,凋亡细胞分别下降30%、35%.③转染WAVE1siRNA的K562/A02细胞WAVE1蛋白表达水平与未转染组相比明显降低,并可增强对阿霉素的药物敏感性,使IC50从转染前的(4.29±0.15)μg/ml下降到(1.85±0.07)μg/ml,阿霉素浓度为1、5 μg/ml时,凋亡细胞分别增加24%、21%.④转染WAVE1的K562细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平均增高,而转染WAVE1 siRNA的K562/A02细胞mdr1基因和Bcl-2蛋白表达水平比转染前明显降低.结论 WAVE1参与了K562/A02细胞多药耐药的形成,其机制可能与调控mdr1和Bcl-2水平有关.
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Cdc42和WAVE1在非小细胞肺癌中的表达及临床病理意义
目的：探讨Cdc42和WAVE1在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学法检测106例经石蜡包埋的NSCLC组织及46例癌旁正常肺组织中Cdc42和WAVE1的表达情况。结果：Cdc42和WAVE1在NSCLC组织中的表达明显高于正常肺组织。Cdc42的表达强度与肿瘤的分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况之间差异有统计学意义（P<0.05）；WAVE1的表达强度与TNM分期及淋巴结转移情况之间差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。NSCLC组织中Cdc42和WAVE1的表达呈正相关（r=0.469，P<0.01）。Cdc42高表达组的3年生存率（44.16%）低于低表达组（72.41%），WAVE1高表达组的3年生存率（39.44%）亦低于低表达组（77.14%），且差异均有统计学意义（P<0.01）。淋巴结转移、Cdc42和WAVE1共同高表达是影响NSCLC患者预后的独立因素。结论：Cdc42和WAVE1在NSCLC组织中异常高表达，且呈现较好的相关性，可能共同参与并促进NSCLC的恶性进程，检测两者的表达会对NSCLC患者的临床病理学特征及预后起一定的提示作用。
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急性淋巴细胞白血病患儿WAVE1和p22phox的表达及WAVE1与氧化应激的关系
目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1(WAVE1)及NADPH氧化酶亚基p22phox的表达并探讨WAVE1表达与白血病病程及氧化应激的关系.方法 实时定量PCR法测定41例ALL儿童及10例正常对照儿童PBMCs中WAVE1和p22phox的表达水平.黄嘌呤氧化酶法(羟胺法)和二硫代二硝基苯甲酸法(DTNB法)分别测定外周血血浆总超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 ①儿童ALL活动期组(初治+复发)PBMCs中WAVE1,p22phox的表达水平与正常对照组和完全缓解组相比均显著增高(P<0.01);ALL完全缓解组中,WAVE1,p22phox表达高于正常对照组(P<0.05);②正常对照组、活动期组和缓解组血浆SOD活力分别为166.35±27.93,22.62±7.39,107.11±28.57 U/mL;GSH-Px活力分别为490.94±39.38,91.73±28.88,267.56±82.64 μmol/L.ALL活动期组外周血血浆总SOD,GSH-Px活性较完全缓解和正常儿童明显降低(P<0.01);③随着WAVE1和p22phox的高表达,血浆中SOD,GSH-Px活性呈现下降趋势.WAVE1的表达水平与p22phox表达水平呈正相关(r=0.34,P<0.05),与血浆SOD,GSH-Px活性呈负相关(r分别为-0.336和-0.408,P<0.05).结论 与正常对照组相比,WAVE1和p22phox在儿童ALL PBMCs中表达增高,而且其变化与ALL病程相关.ALL患儿氧化应激可能参与了WAVE1表达的调控.
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儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究
目的 初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)在急性淋巴细胞白血病(ALL)发病中可能的作用及意义.方法 运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法和蛋白质印迹(Western blotting)分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平.以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞:①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达.结果 ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组(P＜0.01).阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应(P＜0.05);阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P＜0.05);细胞WAVEI mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.05).结论 WAVEI在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标.
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WAVE1、MMP-2及MMP-9在卵巢癌组织中的表达及意义
目的 探讨WASP家族富含脯氨酸同源蛋白1(WASP-family verprolin-homologous protein 1,WAVE1)及基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在卵巢癌的表达及临床意义.方法 采用免疫组化SABC三步法检测47例卵巢癌、30例卵巢良性肿瘤和21例正常卵巢组织中WAVE1、MMP-2、MMP-9的表达,并对卵巢癌组织WAVE1与MMP-2、MMP-9的表达进行相关性分析.结果 ①WAVE1、MMP-2及MMP-9在卵巢癌中的表达均高于在正常卵巢组织及卵巢良性组织中的表达,差异有统计学意义(P＜0.05)；Spearman相关分析显示,WAVE1和MMP-2、MMP-9两两表达成正相关(r=0.773,r=0.664,P＜0.05).②WAVE1的表达与卵巢癌的临床分期、组织分化及Ca-125水平有关(P＜0.05),与年龄、肿瘤的直径无关(P＞0.05).MMP-2、MMP-9表达与卵巢癌的临床分期有关(P＜0.05),与年龄、组织分化、Ca-125水平及肿瘤直径无关(P＞0.05).结论WAVE1和MMP-2、MMP-9在卵巢癌中呈现高表达,早期联合筛查WAVE1和MMP-2、MMP-9指标对卵巢癌病情演变和预后评估有着重要的临床意义.
