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雄激素对前列腺癌细胞内游离钙离子浓度的影响
目的 探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及其机制.方法 应用Fura-2/乙酸甲酯(Fura-2/AM)Ca2+荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统实时检测不同浓度的DHT刺激以及Ca2+通道阻滞剂干预后LNCaP细胞[Ca2+]i的变化.结果 DHT能快速诱导[Ca2+]i升高,在20 s～3 min升至峰值.DHT浓度为1、10、100和1000nmol/L时能诱导[Ca2+]i分别从基础值(28±5)、(29±5)、(28±4)和(28±9)nmol/L上升至峰值31±3(P＞0.05)、65±9(P＜0.01)、193±33(P＜0.001)和(208±42)nmol/L(P＜0.001).DHT浓度为100和1000 mol/L时,[Ca2+]i峰值间差异无统计学意义(P＞0.05).细胞外液无Ca2+时,1000 nmol/L DHT未能诱导[Ca2+]i升高.细胞膜L-型电压门控Ca2+通道阻滞剂维拉帕米(50μmol/L)、地尔硫卓(100 μmol/L)或硝苯地平(5 mmol/L)37℃孵育细胞5 min后,能完全抑制1000nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高.磷脂酶C抑制剂新霉素(1 mmol/L)37 ℃孵育细胞5 min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50 mmol/L)37℃孵育细胞3 min后,对1000 nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高没有影响.结论 DHT可快速、剂量依赖性诱导LNCaP细胞[Ca2+]i升高;DHT诱导LN-CaP细胞[Ca2+]i的升高是细胞外Ca2+经细胞膜L-型电压门控Ca2+通道流入细胞内实现的,细胞内贮钙库未释放Ca2+.
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5α-还原酶抑制剂对过度训练大鼠雄激素作用的影响
目的探讨非甾体类5α-还原酶抑制剂DQI对大运动量游泳训练大鼠血清雄激素水平、EPO水平及肾脏组织EPO合成能力的影响.方法以渐增游泳训练为大鼠运动应激模型,运用酶免和放免分析法观察了血睾、血清EPO及血清5α-双氢睾酮的含量,以及运用RT-PCR法观察了肾脏组织EPOmRNA的表达水平.结果本运动模型可提高靶组织睾酮向5α-双氢睾酮的转化,而DQI可以显著抑制这一过程,并可以提高肾脏组织EPO的合成能力及血清EPO含量.结论非甾体类5α-还原酶抑制剂DQI对维持及恢复运动能力有一定作用.其机制与整合内源性睾酮及增加内源性EPO有关.
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5α-双氢睾酮对解聚素金属蛋白酶9表达水平的影响
目的 研究5α-双氢睾酮(5α-DHT)对解聚素金属蛋白酶9(ADAM9)表达水平的影响.方法 应用盐析法提取人类基因组DNA,扩增ADAM9基因启动子区目的 片断,构建表达ADAM9启动子的报告基因质粒.应用脂质体转染法,分别转染入人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)、人前列腺癌细胞(LNCaP)和人宫颈癌上皮细胞(HeLa)内.5α-DHT处理各组细胞后,检测ADAM9启动子转录效率.结果 我们扩增了ADAM9启动子区1676bp目的 片断,构建了ADAM9启动子报告基因质粒pGL-ADAM9,将其瞬时转染入上述细胞内.5α-DHT干预细胞后,ADAM9启动子转录活性与非处理组相比差异无统计学意义(P> 0.05).结论 上述三种细胞中,5α-DHT对ADAM9启动子表达水平无显著影响.
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5α-双氢睾酮对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动和细胞生长的影响
目的:探讨5α-双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞钙离子移动的影响及其机制.方法:应用Fura-2/AM Ca2+ 荧光探针法结合MiraCal荧光成像系统动态检测DHT刺激以及Ca2+通道阻滞剂干预后LNCaP细胞内钙离子浓度(Ca2+]i) 的变化.应用MTT法观察细胞活力.流式细胞仪观察早期细胞凋亡率.结果:DHT浓度为1、10、100和1000 nmol/L时,能快速诱导[Ca2+]i升高,在20 s～3 min升至峰值.细胞外液无(Ca2+,1000 nmol/L DHT未能诱导[Ca2+]i升高.细胞膜L一型电压门控Ca2+通道阻滞剂维拉帕米(50 ìmol/L)、地尔硫革(100 ìmol/L)或硝苯地平(5 mmol/L)37℃孵育细胞5 min后,能完全抑制1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2-]i升高.磷脂酶C抑制剂新霉素(1mmol/L)37℃孵育细胞5min或兰尼定受体阻滞剂普鲁卡因(50 mmol/L)37 C孵育细胞3 min后.对1 000 nmol/L DHT诱导的[Ca2+]i升高没有影响.1000 nmol/LDHT作用细胞48 h后,与1 000 nmol/L DHT作用前用维拉帕米预孵细胞相比.细胞光密度(D)值[(0.67士0.10)VS(2.13士0.16))和早期细胞凋亡率[(14.3l±2.29)%VS(1.07士0.1 9)%]差异有统计学意义(P<0.01).结论:DHT可快速地、剂量依赖性地诱导I.NCaP细胞[Ca2+]i升高;DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i的升高是通过细胞外Ca2+经细胞膜L-型电压门控Ca2+通道流入细胞内实现的.细胞内贮钙库未释放Ca2+.DHT诱导的LNCaP细胞[Ca2+]i升高促进细胞凋亡、抑制细胞生长.
