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Yes-相关蛋白和大肿瘤抑制基因1在肾透明细胞癌中的表达及意义
目的 探讨Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)和大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)组织中的表达及意义. 方法 RCCC标本30例,男15例,女15例.年龄36～77岁,中位年龄63岁.Ⅰ～Ⅱ期17例,Ⅲ～Ⅳ期13例.高分化8例,中分化13例,低分化9例.采用逆转录聚合酶链反应及免疫组化技术检测30例RCCC组织及相应正常肾组织中YAP、LATS1 mRNA及其蛋白的表达,结合临床资料进行分析. 结果 RCCC组织中YAP mRNA表达量为0.569±0.066,正常肾组织为0.515±0.068,组间差异有统计学意义(P =0.003)；LATS1 mRNA表达量分别为0.454±0.115、0.514±0.093,组间差异有统计学意义(P =0.029).YAP蛋白表达阳性率分别为63.3％和33.3％,组间差异有统计学意义(P =0.020)；LATS1蛋白表达阳性率分别为46.7％和76.7％,组间差异有统计学意义(P=0.017).高、中、低分化组织中YAP蛋白表达阳性率分别为33.3％、61.5％、88.9％,组间差异有统计学意义(P=0.018)；LATS1蛋白表达阳性率分别为75.0％、53.8％、11.1％,组间差异有统计学意义(P=0.024).Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期组织中YAP蛋白表达阳性率分别为47.1％、84.6％,组间差异有统计学意义(P =0.034)；LATS1蛋白表达阳性率分别为64.7％、23.1％,组间差异有统计学意义(P =0.024). 结论 YAP与LATS1在RCCC发生和发展过程中起重要作用,有望成为RCCC治疗的新靶点之一.
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卵巢癌组织中 YAP、P73的表达变化及意义
目的：观察卵巢癌组织中Yes-相关蛋白（ YAP）、P73的表达变化，并探讨其意义。方法卵巢癌患者157例、卵巢交界性肿瘤患者52例、卵巢良性肿瘤患者37例，术中留取肿瘤组织。采用免疫组化EliVision法检测YAP、P73，并分析二者与卵巢癌临床病理参数的关系。结果卵巢癌组织、卵巢交界性肿瘤组织、卵巢良性肿瘤组织中YAP阳性表达率分别为42．68％、59．62％、67．57％，P73阳性表达率分别为65．61％、38．46％、35．14％；卵巢癌组织中YAP、P73的阳性表达率与卵巢良性肿瘤及交界性肿瘤相比，P均＜0．01。不同组织学类型、腹水情况的卵巢癌组织中YAP表达相比，P均＜0．05。不同WHO病理分级、FIGO临床分期、淋巴结转移情况、腹水情况的卵巢癌组织中P73表达相比，P均＜0．05。卵巢癌组织中YAP、P73的表达无相关性（r＝－0．080，P＝0．319）。结论卵巢癌组织中YAP 阳性表达率降低，P73阳性表达率增高，二者可能参与了卵巢癌的发病和进展。
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卵巢癌组织中Yes-相关蛋白和p73的表达及其临床意义
目的 探讨卵巢癌组织中Yes-相关蛋白(YAP)和p73的表达及其意义.方法 选取2013年1月至2016年6月在我院治疗的卵巢癌患者81例(病例组),同时选取卵巢良性肿瘤患者70例作为对照组,检测两组患者的YAP和p73蛋白表达.结果 病例组患者的YAP和p73蛋白阳性表达率分别为60.49%和67.90%,明显高于对照组的11.43%和30.00%,差异均有统计学意义(P<0.05);病例组Ⅲ~Ⅳ期患者的YAP蛋白和p73蛋白阳性率为79.49%和82.05%,明显高于Ⅰ~Ⅱ期的42.86%和54.76%,差异均有统计学意义(P<0.05);病例组病理分级G3患者YAP蛋白和p73蛋白阳性率为71.67%和80.00%,明显高于G1和G2级的28.57%和33.33%,差异均有统计学意义(P<0.05);淋巴结转移患者的p73蛋白阳性率为86.96%,明显高于无淋巴结转移的60.34%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌组织YAP和p73蛋白表达增强,可能参与了卵巢癌的发生发展,其中p73与卵巢癌淋巴转移有一定关系.
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慢病毒介导shRNA沉默YAP基因对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体的影响
目的:探讨慢病毒介导shRNA沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响.方法:3条针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体感染LNCaP细胞,经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系,real-time PCR、Western blot分别检测感染后各组细胞YAP、AR mRNA和蛋白水平;选取沉默效果佳shRNA慢病毒干扰载体组,以细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成实验(colony formation)检测LNCaP细胞增殖能力;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测LNCaP细胞凋亡改变.结果:重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCaP细胞,经嘌呤霉素筛选后感染效率达95％以上,获得稳定沉默YAP基因LNCaP细胞系.与空白对照组和阴性对照组比较,感染shRNA慢病毒干扰载体各组中YAP、AR mRNA及蛋白表达水平明显下调(P=0.000),细胞增殖受到明显抑制(P=0.000),细胞凋亡明显增加(P=0.000).结论:慢病毒介导shRNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCaP细胞中表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节.
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shRNA沉默YAP基因对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法:用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况;构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞.RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-O细胞前后YAP mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期的变化.结果:786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核;shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4d后,可明显下调786-O细胞YAP mRNA及蛋白表达水平(P=0.000),并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡(P=0.000);细胞周期紊乱,G1期细胞明显增加,S期细胞明显降低(P=0.000).结论:YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡.
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LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响
目的 探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响.方法 利用RT-PCR检测人肾透明细胞癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因1(largetumor suppressor gene 1,LATS1) mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(yes-associated protein,YAP) mRNA的表达水平,用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析,5-氮杂-2脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,DAC)处理786-O和HEK-293后,用RT-PCR、Western blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期,CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况.结果 786-O较HEK-293 LATS1mRNA表达水平显著降低(P＜0.05),YAP mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后,LATS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),周期停滞在G0/G1期(P＜0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05)、细胞凋亡显著增加(P＜0.05),而HEK-293组均无明显变化(P＞0.05).结论 LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达,抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡.LATS1基因甲基化在肾癌发生中起重要作用.
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基于生物信息学探讨Yes-相关蛋白在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达
目的 验证通过生物信息学技术筛选出Yes-相关蛋白(YAP)在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的表达情况,为后期进一步研究奠定基础.方法 利用生物信息学技术分析大鼠心肌缺血再灌注损伤的差异基因,应用KOBAS2.0以及KEGG数据库筛选出相关的信号通路和关键基因.将18只Sprague Dawley大鼠随机分配为正常组(n=6)、假手术组(n=6)、缺血再灌注损伤组(模型组,n=6),采用免疫组织化学、逆转录荧光定量聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测筛选出的靶基因的表达情况.结果 通过生物信息学技术筛选出差异表达基因共345条,上调181条,下调164条;筛选出的差异基因主要富集于Wnt、HIPPO、MAKP、Jak-STAT等信号通路;该课题组关注HIPPO信号通路,发现与正常组和假手术组比较,模型组中其关键蛋白YAP在基因以及蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经生物信息学筛选出来的HIPPO信号通路关键蛋白YAP在大鼠心肌缺血再灌注损伤中表达增加.
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YAP在肾癌组织中的表达及其与肾癌生物学行为的关系
目的:探讨Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在肾癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)组织中的表达及其与肾癌生物学行为的关系.方法:半定量免疫组织化学法检测YAP在RCC组织及良性病变肾组织中的表达,分析其与RCC生物学行为的关系.结果:YAP在良性病变肾组织中的表达率为35.0％(7/20),明显低于RCC组织中的表达率78.7(59/75),差异具有统计学意义(X2 =14.196,P＜0.05);YAP的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径大小及肾静脉是否受侵无明显关联(P＞0.05);但与肿瘤分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移显著相关,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:YAP在RCC组织中呈高表达,可能参与了RCC的发生及进展.
