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Yes-相关蛋白和大肿瘤抑制基因1在肾透明细胞癌中的表达及意义
目的 探讨Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)和大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)组织中的表达及意义. 方法 RCCC标本30例,男15例,女15例.年龄36～77岁,中位年龄63岁.Ⅰ～Ⅱ期17例,Ⅲ～Ⅳ期13例.高分化8例,中分化13例,低分化9例.采用逆转录聚合酶链反应及免疫组化技术检测30例RCCC组织及相应正常肾组织中YAP、LATS1 mRNA及其蛋白的表达,结合临床资料进行分析. 结果 RCCC组织中YAP mRNA表达量为0.569±0.066,正常肾组织为0.515±0.068,组间差异有统计学意义(P =0.003)；LATS1 mRNA表达量分别为0.454±0.115、0.514±0.093,组间差异有统计学意义(P =0.029).YAP蛋白表达阳性率分别为63.3％和33.3％,组间差异有统计学意义(P =0.020)；LATS1蛋白表达阳性率分别为46.7％和76.7％,组间差异有统计学意义(P=0.017).高、中、低分化组织中YAP蛋白表达阳性率分别为33.3％、61.5％、88.9％,组间差异有统计学意义(P=0.018)；LATS1蛋白表达阳性率分别为75.0％、53.8％、11.1％,组间差异有统计学意义(P=0.024).Ⅰ～Ⅱ、Ⅲ～Ⅳ期组织中YAP蛋白表达阳性率分别为47.1％、84.6％,组间差异有统计学意义(P =0.034)；LATS1蛋白表达阳性率分别为64.7％、23.1％,组间差异有统计学意义(P =0.024). 结论 YAP与LATS1在RCCC发生和发展过程中起重要作用,有望成为RCCC治疗的新靶点之一.
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大肿瘤抑制基因1在胃腺癌中的表达及其对胃癌细胞增殖和转移的影响
目的 检测大肿瘤抑制基因1(LATS1)在人胃腺癌组织的表达,探讨LATS1过表达对胃癌细胞增殖和转移的作用及其分子机制.方法 免疫组织化学法和实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测LATS1在30例人胃腺癌及癌旁组织的表达.利用慢病毒载体构建稳定过表达LATS1的胃癌SGC-7901细胞株,Western blot检测LATS1、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达水平.噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测LATS1过表达对胃癌细胞增殖和转移的影响.结果 与癌旁组织(1.53±0.63)比较,LATS1 mRNA在胃腺癌的表达量约为0.41±0.12,其蛋白在胃腺癌组织的阳性表达较低(30.0％比60.0％,P＜0.05).体外实验显示,LATS1上调表达能减少PCNA和MMP-2蛋白的表达,并抑制胃癌细胞增殖活性.与对照组[(90.25±10.33)个]和空载组[(87.20±8.40)个]穿过小室的细胞数比较,LATS1组胃癌侵袭转移细胞数[(43.33±6.33)个]明显减少(P＜0.01).结论 LATS1在人胃腺癌组织低表达,其过表达能抑制胃癌细胞的增殖和侵袭潜能.
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LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响
目的 探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响.方法 利用RT-PCR检测人肾透明细胞癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因1(largetumor suppressor gene 1,LATS1) mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(yes-associated protein,YAP) mRNA的表达水平,用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析,5-氮杂-2脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,DAC)处理786-O和HEK-293后,用RT-PCR、Western blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期,CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况.结果 786-O较HEK-293 LATS1mRNA表达水平显著降低(P＜0.05),YAP mRNA表达水平显著升高(P＜0.05),BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后,LATS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),周期停滞在G0/G1期(P＜0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05)、细胞凋亡显著增加(P＜0.05),而HEK-293组均无明显变化(P＞0.05).结论 LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达,抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡.LATS1基因甲基化在肾癌发生中起重要作用.
