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时间温度梯度凝胶电泳结合基因测序对乳癌体细胞全线粒体DNA扫描及突变检测
目的 线粒体主要通过氧化磷酸化途径以三磷酸腺苷(ATP)的形式产生能量在细胞内发挥作用。
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高分辨率熔解曲线分析:一种新的用于遗传病基因突变筛查的技术
目前,DNA碱基变异如突变或单核苷酸多态性(single nucleotide polymorplaism,SNP)的检测方法有2种:一是针对特定的位点合成序列特异性探针,如Taqman探针法、位点特异寡核苷酸分析、反向斑点杂交及基因芯片等,用于检测已知突变;二是以核酸的物理性质为基础的检测方法,如变性一高效液相层析、单链构象多态性、变性梯度凝胶电泳、温度梯度凝胶电泳及构象敏感凝胶电泳等,此类方法可用作突变筛查,但无法明确突变性质.
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应用PCR与温度梯度凝胶电泳分析龈上菌斑微生物群落
目的应用PCR与温度梯度凝胶电泳(PCR-TGGE)分子技术对成年健康口腔的龈上菌斑中微生物群落组成进行分析.方法8例成年个体包括4男4女,年龄19~29岁,分别采取每例个体上下颌牙周龈上菌斑样品,共18份(个体Subl间隔10天采集2次样品).提取菌斑DNA,PCR扩增16S rDNA V3可变区,产物经TGGE后进行相似系数分析.结果同一个体的上下颌微生物群落组成相似性系数为81%~95%,而不同个体的龈上菌斑微生物群落组成相似性系数,均在60%以下.结论不同个体具有其独特的牙周微生物群落,而且在一定时期内组成稳定.
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一种分析大分子结构的新方法--TGGE SYSTEM
TGGE即温度梯度凝胶电泳方法是近年发展起来并逐步得到广泛应用的一种分析大分子结构的新方法.它利用Tm值不同的大分子在温度梯度凝胶电泳过程中形成不同空间构象而得以分离,具有操作简易、省时、灵敏、检出率高、假阳性率低等特点.在dsDNA点突变检测、RNA二级结构分析、蛋白质结构转换及蛋白分子与核酸分子相互作用的热稳定性分析等方面的应用已日益得到人们的重视.
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变性梯度凝胶电泳的原理、应用及其进展
变性梯度凝胶电泳(DGGE)主要是基于突变型和野生型核酸序列的不同而导致其变性浓度的差异,利用变性梯度胶进行分离.恒定变性凝胶电泳(CDGE)、瞬时温度梯度电泳(TTGE)和温度梯度凝胶电泳(TGGE)是由DGGE经改进而成.它们在突变分析上都有着重要的作用.
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轮状病毒感染与健康儿童肠道菌群结构的比较
目的 比较轮状病毒(RV)感染与健康儿童肠道菌群结构的差异,为临床治疗提供有价值的参考依据.方法 采集20例RV感染及6例健康儿童粪便样品,提取粪便样品中细菌的混合DNA,先通过肠道菌重复性基因内一致性序列(ERIC)-聚合酶链反应(PCR)结合分子杂交技术分析两组儿童之间肠道微生物组成的相似性;再扩增粪便样品中菌群的16 S rDNA基因V3区,利用PCR-TGGE技术分析肠道菌群的组成情况,研究两组儿童肠道微生物菌群组成的差异.结果 肠道菌群的组成有很强的宿主专一性.RV感染与健康儿童相比,肠道菌群中糖皮质激素(GC)水平较低的细菌明显减少.微生态制剂治疗组温度梯度凝胶电泳(TGGE)条带数有一个逐渐增加的过程.结论 轮状病毒感染时,可致患儿肠道菌群紊乱,但用抗生素治疗将更致肠道微生态失调,不利于患儿肠道菌群恢复,建议临床医师在轮状病毒感染时,慎用抗生素.
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应用温度梯度凝胶电泳筛选冠心病人β2-AR的Gln27Glu突变
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反向杂交法检测基因突变的研究进展
基因突变的检测是分子生物学、遗传学、诊断学、肿瘤学研究的热点,其检测方法也随着生命学科的发展而迅速发展.基因突变的检测技术种类繁多,如单链构象多态性(SSCP)、温度梯度凝胶电泳等.其中反向杂交法由于其具有操作简单、可重复性好、灵敏度高、一次可检测多个突变的特点,在临床诊断中具有很高的开发价值.本文对反向杂交法在基因突变检测方面的应用进行了总结.
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DGGE/TGGE技术在微生物基因分类鉴定中的应用
变性梯度凝胶电泳/ 温度梯度凝胶电泳(DGGE/TGGE)是一种新的电泳技术,该技术具有分辨能力高、重复性好、操作简易和节省时间等特点.现就DGGE/TGGE技术原理及目前在微生物分类鉴定研究中的应用作一综述.
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应用温度梯度凝胶电泳分析非缺失型α-地中海贫血突变
目的 建立用于非缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变筛查的温度梯度凝胶电泳(temperature gradient gel electrophoresis, TGGE)技术。方法 以不同基因型人基因组DNA为模板,选择性扩增全长α2-珠蛋白基因,继以巢式PCR扩增突变热点区域,然后建立并优化TGGE参数。在此基础上,筛查表型阳性的15例非缺失型α-地贫疑诊样品,阳性样品经DNA序列测定确认突变。结果 建立了分析543 bp PCR片段和α2珠蛋白基因全长1085 bp片段的TGGE技术,可检测出中国人群中常见的两种α-地贫点突变:Hb Constant Spring (Hb CS)和Hb Quong Sze(Hb QS)及Hb Westmead α2 CD122CAC→CAG(His→Gln)。15例样品中,10例为Hb CS,2例为Hb QS,2例为Hb Westmead, 1例为新的与Hb H病相关的突变α2 CD31 AGG→AAG(Arg→Lys)。结论 所建立的PCR-TGGE技术可用于非缺失型α-地贫点突变和α-珠蛋白基因多态性的分子筛查。