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miR-16和miR-21作为冠脉不稳定斑块生物标志物的研究
目的：探讨循环miRNA作为识别冠状动脉粥样硬化不稳定斑块生物标志物的价值，为冠脉斑块不稳定性的无创性早期识别提供新的途径。
方法：选取2011年9月-2012年12月于中国医学科学院阜外心血管病医院就诊的门诊患者，以64排螺旋CT检查和急性冠脉综合征的临床症状入选非钙化斑块、钙化斑块患者及正常对照组。有急性冠脉综合征的临床症状，经CT检查一支上的冠脉主干存在典型单纯非钙化斑块（CT值<50 HU），各支冠脉无钙化斑块、混合斑块者入组非钙化斑块组；无急性冠脉综合征的临床症状，经CT检查一支上的冠脉主干存在典型钙化斑块（CT值>50 HU），各冠脉无非钙化、混合斑块者入组钙化斑块组；无临床症状和其它慢性病史，血清学检查肝肾功能正常，经CT检查冠脉光滑、无斑块者入组正常对照组。受试者于清晨空腹采集静脉血5毫升，1 h内分离血清-80℃冻存用于RNA提取。初筛每组入选12例，采用TaqMan法qRT-PCR对斑块不稳定相关的11种miRNA进行检测；通过相对定量分析，对非斑块组较正常组表达差异倍数>1的miRNA进一步扩大样本量（每组50例）进行验证。测定结果取对数转换为正态，用SPSS17.0进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。 -
多重连接依赖性探针扩增技术及其在临床中的应用
多重连接依赖性探针扩增(Multiplex Ligation dependent Probe Amplification,MLPA)技术是一种高效、特异、快速、简便,针对待检核苷酸序列进行定性和相对定量分析的技术.2002年Schouten等[1]在多重扩增探针杂交(Multiplex amplifiable probe hybridisation,MAPH)技术基础上进行改进而建立了MLPA技术.该技术在一次性反应中可检测45个核苷酸序列拷贝数的改变,目前已广泛应用于染色体数目异常、基因缺失/重复、DNA甲基化检测等多个分子生物学诊断领域.
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肝组织和外周血中AFPmRNA定量分析及临床应用的研究
目的:通过检测AFP mRNA在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者肝组织和外周血中的基因表达,探讨AFP mRNA相对定量值作为HCC微转移指标的可能性,建立HCCAFP mRNA相对定量分析法.方法:建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系(Nested-RT-PCR),对肝组织和外周血中的AFP mRNA进行相对定量值分析.结果:在49例HCC及其癌旁和远癌组织、12例非肝肿瘤组织和8例正常肝组织中AFP mRNA相对定量值阳性分别为35例(71.4%)、20例(40.8%)、3例(6.1%)、0例、0例;35例肝癌患者中有23例术前外周血AFP mRNA相对定量值为阳性(657%),明显高于肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎患者和正常人外周血;HCC患者外周血术后72 h AFP mRNA相对定量值的阳性率22.9%(8/35),与术前比较差异有统计学意义,P<0.01.结论:肝组织和外周血中AFP mRNA相对定量分析可提高HCC阳性诊断率,并可作为HCC微转移的早期检测指标.治疗前后的变化对指导临床治疗及评价HCC治疗效果有重要参考价值.
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膀胱癌组织端粒酶活性定量分析及临床应用的研究
目的:组装简便实用的端粒酶活性相对定量检测试剂盒,建立了膀胱肿瘤端粒酶活性非同位素相对定量检测技术.方法:用银染-TRAP略行改良,对54例膀胱癌组织、癌旁组织、12例正常膀胱黏膜,其中46例膀胱癌患者同时收集了尿液及膀胱冲洗液的脱落细胞进行端粒酶活性相对定量值分析.结果:54例膀胱癌组织中端粒酶活性相对定量值阳性率与正常膀胱黏膜和癌旁组织端粒酶活性相对定量值相比,差异有显著性(P＜0.001,P＜0.001);癌旁组织略高于正常膀胱黏膜,但差异无显著性(P＞0.05),46例膀胱癌膀胱冲洗液与尿液相比差异有显著性(P＜0.01);46例膀胱癌尿液与10例正常尿液相比差异有显著性(P＜0.01);54例膀胱癌与癌旁组织中端粒酶活性相对定量均值及标准差相比,差异有显著性(P＜0.001);46例膀胱癌冲洗液与尿液端粒酶活性相对定量均值及标准差相比差异有显著性(P＜0.05).结论:建立了膀胱肿瘤端粒酶活性的非同位素相对定量分析方法,具有特异性强、灵敏性高的特点,该方法可作为恶性肿瘤诊断和预后的指标之一.肿瘤防治杂志,2001,8(4):375-379
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质子磁共振波谱在神经系统疾病中的应用
质子磁共振波谱(1H-MRS)是近年来用于临床的一门磁共振诊断技术,是迄今为止惟一能进行活体组织代谢定量分析的无创检测手段,能测出不同化合物在强磁场作用下所产生的不同化学位移(通常用PPM表示)峰值,从而对机体内多种不同化合物进行相对定量分析.
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解脲脲原体相对定量方法的建立及临床应用
目的 建立解脲脲原体(Uu)相对定量方法,并探讨Uu在细菌性阴道病(BV)的作用.方法 建立Uu荧光定量PCR方法,检测标本中的Uu含量,同时检测标本中的宿主细胞数(GAPDH基因),计算103宿主细胞中Uu的相对含量;从281例BV患者和137例健康女性采集阴道分泌物,对其中的Uu进行相对定量分析.结果 建立的荧光定量PCR方法能直接检测分泌物中的Uu,与其他阴道常见微生物无交叉反应,灵敏度为102 copy/μl;Uu在BV患者和健康女性中的阳性率分别为36.3％和17.5％,差异具有统计学意义(P＜0.05);相对定量分析显示BV患者阴道中Uu的含量为183 copy/103细胞,显著高于健康女性的4 copy/103细胞),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Uu相对定量方法能克服标本采集差异对检测结果的影响,客观反映Uu的致病能力,适合临床应用.
