模拟缺血再灌对乳兔窦房结细胞起搏电流的影响

目的：探讨双酶解法结合差速贴壁分离、培养乳兔窦房结细胞的有效性和可行性，观察模拟缺血再灌注对乳兔窦房结细胞形态及起搏电流的影响，阐明缺血再灌制备窦房结细胞损伤模型的电生理机制。

模拟缺血再灌注对窦房结细胞自发性动作电位的影响及Pinacidil的干预作用

当归挥发油通过激活ERK信号通路以减轻缺血再灌注神经细胞凋亡的作用

目的 研究当归挥发油(EOAS)对缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响.方法 将高分化PC12细胞分为空白组、模型组、对照组及当大中小3个剂量实验组.除空白组外,其余各组用含10 mmol·L-1连二亚硫酸钠(Na2S2O4)的无糖培养基缺氧缺糖损伤1h,大中小3个剂量实验组加入终浓度分别为25.00,12.50,6.25ug·mL-1 EOAS,对照组加入10 μmol·L-1依达拉奉,复氧48 h.用MTT比色法检测当归挥发油对细胞增殖的影响,以试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,用流式细胞仪检测细胞凋亡,以AO/PI免疫荧光染色观察凋亡细胞形态,以比色法检测细胞caspase-3的活性,以免疫印迹法检测p-ERK1/2蛋白的表达.结果 与空白组相比,模型组细胞存活率降至(67.4±0.10)％,差异有统计学意义(P＜0.01).与模型组相比,对照组和大剂量实验组的细胞存活率分别升至(86.2±0.10)％,(94.5±0.05)％,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与空白组比较,模型组细胞LDH活性、MDA含量分别升高至(912.53±16.71)U ·L-1及(9.05±0.25) iμmol·L-;而SOD水平降至(12.53±0.29)U·mL-1,差异均有统计学意义(均P＜0.01).与模型组相比,大剂量实验组的LDH活性降低至(565.61±11.72)U·L-1,而SOD水平升高至(12.53±0.29)U·mL-1,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,大中2个剂量实验组MDA含量分别降至(3.32±0.68),(5.79±0.68) μmol·L-1,差异均有统计学意义(均P＜0.01).模型组与大中小3个剂量实验组细胞的光密度(A)分别为0.75±0.06,0.10±0.02,0.16±0.03及0.49±0.04,与模型组相比,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).与空白组相比,模型组细胞凋亡率为(31.17±2.44)％,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组相比,大中2个剂量组细胞凋亡率分别为(4.57±0.32)％,(5.93±0.81)％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).与模型组相比,大剂量实验组能够明显促进细胞p-ERK1/2蛋白的表达(P＜0.01).结论 EOAS通过激活ERK信号通路抑制拟缺血再灌注神经细胞凋亡.

当归挥发油通过抑制自噬减轻拟缺血再灌注神经细胞损伤

目的:探讨自噬在拟缺血再灌注损伤神经细胞中的作用以及当归挥发油对自噬的影响.方法:采用“缺糖-复糖”结合”缺氧-复氧”的方法,在体外用连二亚硫酸钠(NaS204)处理高分化PC12细胞,模拟”缺血再灌注”损伤,用CCK-8比色法检测当归挥发油对细胞增殖的影响,AO荧光染色观察自噬细胞形态,Westem-blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、Atg5、LC3B-Ⅱ的表达.结果:在6.25～25 μg/ml的浓度范围内,当归挥发能够显著提高PC12细胞存活率,减少受损细胞酸性自噬泡的数量,25μg/ml的当归挥发油能够抑制自噬相关蛋白Beclin-1、At95、LC3B-Ⅱ的表达.结论:当归挥发油可能通过抑制自噬减轻拟缺血再灌注神经细胞的损伤.

CBN对拟缺血再灌注神经细胞损伤的保护作用

目的:观察CBN对拟缺血再灌注神经细胞的保护作用.方法:采用"缺糖-复糖"结合"缺氧-复氧"的方法,在体外用小鼠胎鼠神经细胞模拟"缺血再灌注"损伤,观察了在LDH、SOD活性、MDA含量方面CBN对神经细胞的保护作用.结果:CBN可显著减少拟缺血再灌注神经细胞LDH的释放,保护SOD活性,减少MDA的生成.结论:CBN对拟缺血再灌注样神经细胞具有保护作用.