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下调miR-10a表达对人胰腺癌细胞AsPC-1迁移和侵袭的影响
目的 探讨miR-10a表达对人胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭力的影响及其作用机制.方法 构建针对miR-10a的小干扰RNA(miR-10a-siRNA),转染处理人胰腺癌AsPC-1细胞,同时设阴性对照siRNA(NC-siRNA)组和空白对照组.采用荧光实时定量PCR法检测3组细胞中miR-10a的表达水平,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭能力,ELISA法检测各组癌细胞培养上清液中基质金属蛋白质酶13(MMP-13)含量.结果 对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞miR-10a表达水平分别为1.05±0.08、1.03 ±0.06、0.02±0.01,穿膜细胞数分别为(150±2.6)、(145±2.2)、(62±1.8)个,培养上清中MMP-13表达量分别为(108.5±2.8)、(107.8±2.5)、(35.8±1.5) pg/ml,miR-10a-siRNA组均显著低于对照组和NC-siRNA组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).对照组、NC-siRNA组和miR-10a-siRNA组AsPC-1细胞的迁移后间距分别为(385 ±15)、(395±13)、(736±18)μm,miR-10a-siRNA组显著大于对照组和NC-siRNA组,差异有统计学意义(P值均＜0.01).结论 下调miR-10a表达可抑制胰腺癌AsPC-1细胞迁移和侵袭能力,其机制可能与MMP-13表达下调有关.
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miRNA-10a在消化系统疾病分子机制中的研究进展
miR-10a是miR-10家族的成员之一,属于miR家族,miR-10a参与调节消化系统多种疾病的发生、 诊断、侵袭、转移和预后等过程.该文就miR-10a在消化系统多种疾病的关系进行综述.
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表达miR-10a的重组腺病毒的构建与鉴定
目的 构建表达miR-10a的重组腺病毒(adenovirus,Ad)载体.方法 用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP-U6的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因.利用表达siRNA的策略,合成编码miR-10a的长链DNA序列,双链退火后克隆至pDC316-mCherry-U6获得pDC316-mCherry-U6-miR-10a.pDC316-mCherry-U6-miR-10a与骨架质粒pBHGlox△E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10a,空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒.Ad-miR-10a感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达,用RT-qPCR检测miR-10a表达.结果 构建的pDC316-mCherry-U6-miR-10a序列正确,荧光显微镜下可见mCherry的表达,重组腺病毒Ad-miR-10a滴度为1.8 × 107pfu/mL,感染HeLa细胞后miR-10a表达较mock高40倍.结论 成功构建了表达miR-10a的重组腺病毒,siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达.
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miR-10a在胰腺癌侵袭转移中的作用
目的 探讨microRNA-10a(miR-10a)在胰腺癌侵袭转移中的作用. 方法 选取2014年1月至2016年12月在赣南医学院第一附属医院切除的胰腺癌组织标本68例,同时选取癌旁组织作为对照,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本miR-10a表达;同时选取胰腺癌细胞株Capan-1细胞,以脂质体转染法将miR-10a重组正、反义真核表达质粒载体转染Capan-1细胞,采用RT-PCR检测转染细胞miR-10a表达,Transwell和Matrigel试验观察转染细胞的迁移和侵袭能力,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力. 结果 胰腺癌组织miR-10a相对表达量为(0.213±0.024),明显高于癌旁组织(P<0.01);中低分化胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.212±0.011),明显高于高分化胰腺癌(P<0.01);有淋巴结转移胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.217±0.017),明显高于无淋巴结转移胰腺癌(P<0.05);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期胰腺癌miR-10a相对表达量为(0.230±0.015),明显高于Ⅰ~Ⅱ期胰腺癌(P<0.01).转染48 h后,正义组miR-10a相对表达量为(0.021±0.010),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组miR-10a相对表达量为(0.003±0.001),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05).正义组24 h和48 h 光密度(OD)值分别为(0.602±0.018)和(0.753±0.041),明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组24 h和48 h OD值分别为(0.451±0.023)和(0.591±0.038),明显低于空载组和空白对照组(P<0.05).正义组迁移和侵袭细胞数分别为(85.22±12.10)个和(140.24±30.54)个,明显高于反义组、空载组和空白对照组(P<0.05);反义组迁移和侵袭细胞数分别为(12.52±3.22)个和(20.41±8.66)个,明显低于空载组和空白对照组(P<0.05). 结论 miR-10a过表达可对胰腺癌有生长促进、增强侵袭和迁移的作用,值得进一步研究.
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miR-10 a在子宫内膜癌中的表达及意义
目的：探讨子宫内膜癌组织中miR-10a的表达及意义。方法收集40例子宫内膜癌、20例子宫内膜不典型增生及30例正常子宫内膜组织,采用多聚腺苷酸加尾实时荧光定量逆转录聚合酶链反应[ poly( A)-RT-qPCR]检测miR-10a在不同子宫内膜组织中的表达,并将检测结果和临床及病理资料进行统计学分析。结果 miR-10a在子宫内膜癌组织中的表达高于不典型增生和正常子宫内膜组织,3组间差异有统计学意义( P<0．01)；miR-10a在Ⅲ+Ⅳ期子宫内膜癌患者中的表达量高于Ⅰ+Ⅱ期；病理分级为3级的患者中的表达量高于1+2级；肌层浸润深度≥1/2的患者中的表达量高于肌层浸润深度<1/2者；有淋巴结转移的患者中的表达量高于无转移者,差异均有统计学意义(P<0．05)；不同年龄、病理类型及雌激素受体、孕激素受体是否阳性的子宫内膜癌患者中其表达量差异无统计学意义(P>0．05)。结论 miR-10a在子宫内膜癌组织中高表达,可能作为癌基因调控了子宫内膜癌的发生及发展。
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MicroRNA-10a促进人胎盘间充质干细胞向内胚层细胞的分化
目的 研究microRNA-10a(miR-10a)参与的转录后调控,提高人胎盘间充质干细胞(PMSC)向内胚层细胞分化的能力.方法 利用慢病毒过表达miR-10a前体和反义寡核苷酸抑制miR-10a表达,分析miR-10a与其调控的靶基因Hoxa1的表达关系；并采用实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫荧光细胞化学染色检测miR-10a过表达后,PMSC向内胚层细胞分化能力的变化.结果 PMSC中过表达和抑制表达miR-10a,能反向调控其靶基因Hoxa1的表达；miR-10a过表达后,内胚层细胞特异性基因FoxA2、Sox-17、Pdx-1和Cdx2的表达量显著上升,FOXA2、SOX-17和PDX-1阳性细胞数量明显增多.结论 miR-10a在化学诱导向内胚层细胞分化的PMSC中呈现高表达；miR-10a可能通过抑制其靶基因Hoxa1的表达,调控下游内胚层基因表达上调,从而促进胎盘间充质干细胞向内胚层细胞分化.
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Pre-miR-10a重组腺病毒载体对K562细胞增殖的抑制作用
目的:观察在K562细胞高表达miR-10a对细胞增殖及凋亡的影响.方法:用pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体感染K562细胞,采用RT-PCR检测感染后K562细胞中miR-10a和bcr/abl融合基因的表达水平,Western blot法检测BCR/ABL融合蛋白表达水平,MTT、流式细胞术(FCM)分别检测感染后K562细胞的增殖及凋亡.结果:与对照组相比,K562细胞在转染pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体后,其miR-10a表达水平明显升高、bcr/ab1融合基因水平显著降低；BCR/ABL融合蛋白表达明显下调、K562细胞增殖活力被抑制、细胞凋亡增加,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:pAd-pre-miR-10a重组腺病毒载体能明显抑制K562细胞的增殖、促进细胞凋亡.
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miR-10a在肿瘤中的研究进展
miR-10a作为微小RNA(miRNA)家族的成员之一,属于miR-10家族,定位于17号染色体短臂的HOXB4与HOXB5基因之间.miR-10a在多种人体肿瘤中异常表达,与肿瘤的发生、发展及预后密切相关.文章就miR-10a与多种肿瘤的关系进行综述.
