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转移潜能不同人肝癌细胞系差异蛋白S100A4的再验证及功能分析
目的解析比较蛋白质组学筛出的差异蛋白S100A4的生物学功能,验证其是否在肝癌转移复发中发挥作用.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(WB)及细胞免疫化学法分别对差异蛋白S100A4在转移潜能不同人肝癌细胞系中的表达情况进行再验证;然后,用构建S100A4反义表达质粒,转染高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97H,通过系列与侵袭转移有关的检测,观察S100A4表达降低对MHCC97H细胞生物学行为的影响.结果验证结果均证实,S100A4在有转移潜能人肝癌细胞系MHCC97L、MHCC97H中呈高表达.转染S100A4反义重组表达质粒后的侵袭试验显示,穿过人工基底膜细胞数分别是:5.0±1.4 [MHCC97H / pcDNA3.1(+) AS S100A4],16.4±1.6 [MHCC97H /pcDNA3.1(+)],16.9±1.5 (MHCC97H);运动试验穿过上室底膜的细胞数为:11.1±3.3[MHCC97H / pcDNA3.1(+) AS S100A4],18.9±2.0[MHCC97H /pcDNA3.1(+)],21.9±3.4(MHCC97H);细胞培养上清液中MMP9的定量结果依次为18.2[MHCC97H/ pcDNA3.1(+) AS S100A4]、28.0[MHCC97H /pcDNA3.1(+)]、31.9 ng/ml(MHCC97H);MMP2定量结果依次为29.8[MHCC97H / pcDNA3.1(+) AS S100A4]、26.4[MHCC97H/ pcDNA3.1(+)]、26.5 ng/ml(MHCC97H).明胶酶谱分析细胞培养上清液基质金属蛋白酶(MMP)显示,S100A4表达降低的MHCC97H细胞分泌的MMP9活性明显弱于对照组.结论 pcDNA3.1(+) AS S100A4转染MHCC97H细胞后,细胞的运动与侵袭潜能均明显降低.细胞MMP9分泌量也显著降低.而细胞分泌MMP2的量则变化不明显.提示差异蛋白S100A4通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调MMP的分泌参与肝癌细胞的侵袭转移过程.
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miR-214对人肝细胞癌增殖能力影响的体外实验研究
目的探讨微小 RNA（miR）-214对肝细胞癌（肝癌）增殖能力的影响及其相关机制。方法应用终浓度50 nmol/L 的 miR-214模拟物 mimics 及其阴性对照 mimics 分别转染 MHCC97L 肝癌细胞建立 M214组、阴性对照组（NC214组），另设未转染对照组（Ctrl 组）。采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测3组肝癌细胞 miR-214含量。采用细胞计数试剂盒（CCK）-8法检测细胞增殖抑制率，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法（Western blot）检测 c-myc、Bax、B 细胞淋巴瘤（Bcl）-2蛋白表达。3组比较采用单因素方差分析，两两比较采用 LSD-t 检验。结果 M214组 MHCC97L 细胞 miR-214的含量为 Ctrl 组的（2536±7）倍，差异有统计学意义（LSD-t=58.75，P<0.05）。M214组24、48、72 h 时细胞增殖抑制率分别为（15.33±0.62）%、（24.07±0.75）%和（41.02±0.91）%，与 Ctrl 组比较差异有统计学意义(LSD-t =14.64，19.87，31.86；P<0.05)。M214组细胞平板克隆形成数量（5.3±0.7）个/孔，明显低于 Ctrl 组的（37.1±1.0）个/孔(LSD-t =-12.51，P<0.05)。M214组细胞凋亡率（42.1±3.2）%明显高于 Ctrl 组的（7.0±0.7）%(LSD-t=35.66，P<0.05)。M214组 c-myc、Bcl-2蛋白表达量降低，Bax 蛋白表达量升高。结论miR-214可能通过下调 c-myc 蛋白表达及 Bcl-2/Bax 比值抑制人肝癌细胞的增殖能力。
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MBD4基因的单核苷酸多态与肝细胞肝癌遗传易感性研究
目的:探索DNA损伤修复基因hMBD4的遗传多态Glu346Lys与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)易感性的关系.方法: 对96例原发性HCC患者和96例对照外周血DNA进行测序分型.结果: 我们发现正常人群Glu/Glu、Glu/Lys、 Lys/Lys基因型频率分别为40.4%、46.8%和12.8%,HCC组为41.7%、48.8%和9.5%.等位基因Lys频率在病例和对照分别为33.9%和36.2%,两组比较差异无统计学意义,P>0.05.结论: DNA修复基因hMBD4的Lys等位基因可能与HCC的遗传易感性无关.
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TACE 联合冷冻消融治疗不可切除性大肝癌的临床分析
目的：探讨经导管肝动脉化疗栓塞（TACE）联合冷冻消融治疗不可切除性大肝癌疗效与安全性。方法回顾性分析2011年11月至2015年7月中山大学附属第一医院诊治的122例不可切除性大肝癌病例，分为 TACE 联合冷冻消融组（研究组，58例）和单纯 TACE 组（对照组，64例），对比观察其疗效与不良反应。结果研究组和对照组首次治疗的客观有效率为29．3％和10．9％（P ＝0．011），疾病控制率为79．3％和62．5％（P ＝0．042），中位生存期为11．0（95％ CI 7．4～14．6）和5．0个月（95％ CI 4．0～6．0），6、12、18个月的总生存率分别为84．5％、49．5％、26．8％和48．1％、17．8％、11．1％（均P ＜0．01）。无远处转移、巴塞罗那分期 B 期、中性粒细胞与淋巴细胞比值≤5、甲胎蛋白＜400μg／L 及采用联合治疗、首次治疗有效是预后独立保护因素。两组首次治疗后均无严重不良反应及围手术期死亡病例发生。结论TACE 联合冷冻消融治疗不可切除大肝癌近期疗效好，生存期长，严重不良反应发生率低，是一种高效、安全的治疗方案。
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过继免疫细胞治疗预防肝癌肝移植术后复发的新思路探究
我国是肝病大国，也是全球原发性肝癌（肝癌）的第一大国。我省更是肝炎、终末期肝病、肝癌的重灾区，广东地区肝脏疾病发病率高达近20％，严重危害着民众的健康。肝细胞癌（ hepatocellular carcinoma ， HCC ）是我国常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居恶性肿瘤死亡率的第2位，每年大约有11万人死于HCC，占全世界HCC死亡人数的45％［1-2］。2011年中国肝移植注册网（ http：／／www.cltr.org）的统计数据显示，肝癌患者占我国肝移植受体总数的百分率超过40％。随着近年来肝移植外科手术成熟和术后管理的不断完善，肝癌肝移植患者的生存率有所提高，但肝癌复发仍是影响肝癌肝移植远期疗效的核心问题。随着肝移植适应证标准的拓展（肿瘤数目、肿瘤直径），肝癌复发风险增加，生存率下降，即使是符合米兰（ Milan ）标准的肝癌，肝移植术后仍有8％～15％的复发率。
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肝癌肝移植--进展与展望
原发性肝癌（肝癌）的发病率和死亡率均高居我国恶性肿瘤的第2位，因其恶性程度高、预后差而被称为“癌中之王”。随着肝移植手术技术和术后管理水平的不断提高，肝移植治疗肝癌的作用受到愈来愈多的关注。我国在1980年至2011年间共实施肝移植手术20877例［1］，其中肝癌肝移植手术8874例（42.51％），但肝癌肝移植受者术后1、3、5年累积生存率分别为76.57％、57.00％、49.80％，明显低于良性肝脏疾病受者的累积生存率（分别为81.42％、76.48％、73.19％），其中31.68％的肝癌患者死亡原因为肝癌肝移植术后复发和转移，明显高于国外文献报道的肝癌移植术后复发率（10％～20％）。如何有效地预防肝癌肝移植术后复发，是进一步提高我国肝癌肝移植整体疗效的关键所在。
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肝癌肝移植免疫抑制治疗中激素的撤离
肝移植开展初期，由于缺乏可供选择的免疫抑制剂，肾上腺皮质激素（激素）在肝移植术后免疫抑制治疗中占据主导地位，且对提高肝移植手术的成功率作出了重要的贡献。随着新型免疫抑制剂的不断研发，免疫反应作用机制认识的逐步深入，以及激素引发的多种不良反应，如代谢性疾病、感染，以及原发病［原发性肝癌（肝癌）、病毒性肝炎］复发等，国内外众多学者一直在研究相对理想的激素撤离方案。本文就目前肝癌肝移植免疫治疗中激素的撤离方案作一简述。
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肝癌肝移植术后复发靶向预防和治疗的新希望：索拉非尼
原发性肝癌（肝癌）是常见的恶性肿瘤，在肿瘤患者死亡原因中排第3位［1］。肝移植对部分肝癌患者疗效肯定。目前欧洲和美国每年因肝癌接受肝移植的患者分别占肝移植患者总数的25％及35％［2］，而我国该比例达48.2％［3］。肝癌肝移植术后复发已成为制约肝移植手术应用于肝癌患者的重要因素。据报道，肝癌肝移植术后1、3、5年累积复发率分别为19.8％、30.5％及35.8％［4］。一项多中心回顾性分析显示我国肝癌肝移植术后总复发率为42.6％（496／1163例）［5］。为降低术后复发率，提高生存率，米兰标准、加州大学旧金山分校（ University of California at San Francisco ， UCSF）标准等严格筛选受者的标准应运而生。虽然应用这些筛选标准取得了一定的成效，但限制了肝移植在肝癌中的临床应用［2，6］。因此，如何采取合理有效的综合治疗措施，拓展手术适应证、降低肝癌复发率及延长术后复发患者的生存期，是目前肝癌肝移植手术面临的极具挑战性的问题。
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肝癌肝移植适应证标准的发展及展望
肝移植是目前公认的治疗终末期肝病的有效措施之一。自1963年第1例人原位肝移植术成功实施以来，肝移植术已经历了50余年的发展历史，迄今全世界已累积实施肝移植手术超过10万例。随着外科技术的不断发展、新型免疫抑制剂的应用和临床经验的不断积累，肝移植围手术期并发症和死亡率显著下降，术后存活率不断提高、存活时间不断延长。因此，肝移植术的适应证亦逐步扩大。对于原发性肝癌（肝癌）患者，在合理掌握适应证的情况下，肝移植也能够获得良好的疗效。肝癌肝移植适应证标准的确立经历了从无到有、从简到繁的发展过程，逐步形成体系，本文就这方面作详细介绍。
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肝癌肝移植术后复发转移的综合防治策略--第六届羊城肝脏移植高峰论坛会议纪要
2014年第六届羊城肝脏移植高峰论坛于2月11～12日在广东广州隆重召开，共有国内外百余名移植专家参会。根据高峰论坛会议精神，总结出肝癌移植术后复发转移的综合防治策略，现汇报如下。
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肝细胞癌中趋化因子CXCL5及其受体CXCR2的表达及意义
目的：检测趋化因子5（C-X-C motif ligand 5，CXCL5）及其受体CXCR2在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的表达，探讨其与临床病理特征的关系及其在预后评估中的意义。方法：采用免疫组化EnVision 两步法检测51例 HCC 病例中 CXCL5、CXCR2的表达，分析其与临床病理特征及微血管密度（microvessel density，MVD）的关系。结果：（1）HCC中CXCL5、CXCR2蛋白高表达率分别为64．7％、68．6％，高于癌旁组织（17．6％、15．7％，P＜0．05）；CXCL5蛋白的表达与肿瘤大小、病理分级、TNM分期及血管浸润有关；CXCR2蛋白的表达与病理分级及血管浸润有关。（2）HCC 中的 MVD 水平高于癌旁组织（P ＜0．001），与CXCL5、CXCR2的蛋白表达均呈正相关。（3）CXCL5、CXCR2蛋白高表达组，HCC 复发率及转移率均较高。结论：CXCL5、CXCR2高表达可能促进了HCC的发生发展及HCC内微血管生成，可用于HCC的预后评估。
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慢性乙型肝炎、肝癌病人肝细胞染色体制备法初探
目的探讨慢性乙型肝炎、肝癌病人肝细胞染色体标本制备方法.方法应用肝脏组织直接进行染色体制备及使用短期培养两种方法制备染色体,并对其结果进行分析比较,找出佳肝细胞染色体制备方法.结果短期培养法获得的单个细胞数目较多,细胞单个游离,获得的细胞中期分裂相较多,染色体分散好.而肝脏组织直接进行染色体制备获得的单个细胞数目少,常聚集成团,获得的细胞中期分裂相较少,染色体普遍分散不良.结论在慢性乙型肝炎、肝癌病人肝细胞染色体标本制备过程中,使用短期培养法可以获得数量和质量都满意的染色体,以满足科研的需要.
