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四株临床分离百日咳鲍特菌主要抗原基因序列分析
目的 了解石家庄地区分离的百日咳鲍特菌4种抗原基因百日咳毒素S1亚单位(ptxS1)、外膜蛋白(Prn)、凝集素2(Fim2)和凝集素3(Fim3)的基因特征.方法 收集4株临床分离的百日咳鲍特菌,这4株菌于2002年分离自河北石家庄地区.分别对这4株茵的ptxS1、Prn、Fim2、Fim3主要抗原基因进行PCR扩增和测序,并与我国的百日咳鲍特菌疫苗生产株抗原基因序列以及GenBank中收录的百日咳基因序列进行比较、分析.结果 序列分析显示,新近分离的4株菌的S1基因亚型与我国疫苗生产菌株不同,均为A亚型,发现3种Prn基因亚型和3种Fim3基因亚型,核苷酸和氨基酸序列与我国疫苗生产菌株同源性均在99%以上.基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高.结论 我国的临床分离菌株与疫苗生产菌株的主要抗原基因序列存在一定变异,为百日咳的流行病学研究和疫苗的研制积累理论依据.
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百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用
目的 建立快速、准确、特异的定量检测百日咳杆菌的方法,并进行临床应用研究.方法 根据百日咳杆菌IS481基因序列,设计并合成引物和荧光探针,建立百日咳杆菌荧光定量PCR检测方法,并对方法的特异度、重复性和灵敏度进行评价,检测百日咳疑似患者咽拭子225份和健康者咽拭子30份.结果 该方法的标准曲线显示模板浓度在102～108拷贝/μl线性范围与其循环阈值(Ct)具有较好的线性关系,相关系数(r)为0.998,小检出量为102拷贝.特异度较好,灵敏度较高,重复性实验结果显示在同一时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μ1)10次,连续检测5次,变异系数(CV)为5.78%～16.7%.在不同时间检测高低浓度阳性克隆质粒(2×107与3×103拷贝/μl),连续7次,CV为8.25%～14.9%.经检测,疑似患者的咽拭子有41份样本为阳性,30份健康人咽拭子均为阴性.结论 由于本实验建立的荧光定量PCR方法快速、灵敏度高、特异度好,适合临床实验室进行临床标本的百日咳杆菌的定量检测,有较大的应用前景.
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3月龄以下婴儿迁延性咳嗽百日咳感染状况调查
目的 调查3月龄以下(≤3个月)的住院患儿中迁延性咳嗽(咳嗽2周以上)婴儿博德特百日咳杆菌感染状况.方法 对2011年1月至2012年1月首都儿科研究所附属儿童医院收治的3月龄以下迁延性咳嗽患儿采集血清和深部呼吸道分泌物,分别采用酶联免疫吸附实验及多重PCR方法检测博德特百日咳杆菌毒素抗体及博德特百日咳杆菌.结果 入组患儿59例,男32例、女27例,均未接种白百破疫苗.多重PCR检测博德特百日咳杆菌阳性患儿17例(28.8％),3例年龄＜1个月,4例1～2个月,10例2～3个月；3例婴儿有家庭内慢性咳嗽患者的密切接触史,其家庭成员百日咳血清抗体阳性.百日咳杆菌阳性患儿中16例有阵发性痉挛性咳嗽,5例有吸气末鸡鸣样吼声,7例有结膜出血,10例有淋巴细胞升高为主的白细胞升高.结论 未接种白百破疫苗、博德特百日咳杆菌感染是3月龄以下患儿迁延性咳嗽的重要致病因素；百日咳杆菌多重PCR检测快速、敏感,可用于临床早期诊断；未诊断的成人百日咳可能是婴儿的重要传染源.
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迁延性咳嗽婴幼儿百日咳感染临床情况调查
目的 调查迁延性咳嗽(咳嗽≥2周)的未免疫或未完全免疫婴幼儿博德特百日咳杆菌感染情况.方法 2011年1月1日至2012年12月31日,采用前瞻性研究方法对首都儿科研究所附属儿童医院就诊或收治的迁延性咳嗽(咳嗽≥2周)未免疫及未完成全程免疫患儿采集呼吸道分泌物及血清,分别采用多重PCR方法及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测博德特百日咳杆菌及博德特百日咳杆菌毒素抗体,收集患儿的临床及流行病学资料.结果 入组患儿176例,百日咳博德特菌感染率29.0％ (51/176),百日咳多重PCR检测阳性51例,血清学检测阳性18例.51例百日咳患儿年龄23d～4岁,＜1岁者46例(90.2％),≥1岁者5例(9.8％)；男31例,女20例.＜1岁未接种百白破疫苗婴儿35例,其中＜3个月龄者31例,3 ～ 12个月龄4例；＜1岁未完成全程接种11例；≥1岁5例患儿均未接种.百日咳春夏季发病较多,秋冬发病较少.9例患儿有家庭内咳嗽患者接触史,与其接触的有慢性咳嗽家庭成员12例,检测百日咳血清抗体阳性12例,百日咳多重PCR阳性3例.百日咳重症、有合并症患儿15例(15/51,29.4％),合并症包括重症肺炎、呼吸衰竭、脑病,腹股沟斜疝嵌顿等.结论 博德特百日咳杆菌感染是未免疫或未获得完全免疫的婴幼儿迁延性咳嗽的重要致病因素之一；百日咳发病以春夏为多；百日咳感染婴儿病情重,合并症发生率高；未诊断的成人或年长儿百日咳可能是婴儿的重要传染源.百日咳杆菌多重PCR检测快速、敏感,可用于临床早期诊断.
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青少年和成人用DTaP5的评价
百日咳在青少年和成人及其他接触者中的发病率较高.相对于广泛的儿童免疫而言,青少年和成人免疫是减少疾病的一种新策略.ADACEL是一种用于青少年与成人的DTaP,已获准在澳大利亚、加拿大、德国和美国使用.临床试验显示此疫苗能诱导强烈的免疫应答,其反应原性是可以接受的.加拿大的监测数据表明,连续几年在儿童免疫接种的同时实施青少年和成人ADACEL接种,可进一步降低百日咳的发病率.
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百日咳的预防策略
对于未进行免疫接种的幼婴,百日咳杆菌仍是导致其发病和死亡的主要原因.尽管儿童百日咳疫苗接种计划已经大大降低了儿童百日咳的发病率,但随着疫苗诱导的免疫力减退,青少年和成人的百日咳发病率开始升高,他们转而又将疾病传播给尚未免疫或未完成免疫接种的婴儿.全球17个国家的专家提出了全球百日咳计划(GPI)用以评估百日咳控制策略.本文就GPI对各项策略的评估情况加以讨论.
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百日咳杆菌黏着素的纯化及生物学特性研究
目的 建立从天然百日咳杆菌中提纯百日咳杆菌黏着素( pertactin,PRN)的方法,研究PRN的生物学特性并确定PRN在无细胞百日咳疫苗中的作用.方法 百日咳杆菌CS株于发酵罐培养后,经热浸提、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析得到纯化PRN,根据《中华人民共和国药典》2005年版三部的要求,对纯化PRN进行纯度检测及生物学特性研究.结果 各项检测显示,纯化PRN的纯度在95％以上,其相对分子质量和等电点与标准PRN一致.纯化PRN对小鼠具有保护效力,且其保护效力随PRN免疫浓度的增加而增强.未检出纯化PRN的特异性毒性和异常毒性.结论 建立了从天然百日咳杆菌中提纯PRN的方法,而且纯化PRN具有免疫原性和保护效力.
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WHO关于百日咳疫苗的意见书
此文介绍了百日咳疫苗(全细胞疫苗和无细胞疫苗)的背景资料,疫苗的免疫效果、不良反应、免疫程序和免疫策略,疫苗成本效益,以及WHO对该疫苗的意见.
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百日咳鲍特菌基因组多态性分析
目的 了解百日咳鲍特菌(简称百日咳杆菌)基因组特征.方法 应用百日咳杆菌等位基因分型法和多位点可变数量串联重复序列分析(MLVA)法分析百日咳杆菌基因多态性,同时对2种分型方法的多态性指数进行统计学分析.结果 百日咳黏附素(Prn)、支气管黏附因子(tcfA)和百日咳毒素基因上游启动子区域(ptxP)3种等位基因序列分析结果显示,共发现3种等位基因组合型:Prn1/ptxP1/tcfA2、Prn2/ptxP3/tcfA2和Prn3/ptxP1/tcfA2,所占比例分别为71.43%、19.05%和9.52%.MLVA法将21株分离菌株分成了12个不同的MLVA型,MLVA-136型和MLVA-152型为主要流行MLVA型,所占比例分别为28.57%和19.05%,并发现1种新MLVA型菌株.统计学分析表明MLVA法较等位基因分型法具有更高的分辨率.结论 国内部分地区百日咳杆菌流行菌株与欧洲其他国家不同,掌握百日咳杆菌分子流行病学的第一手资料,对有效预防和控制百日咳的流行以及制定新的百日咳疫苗免疫策略具有指导意义.
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无细胞百日咳疫苗生产用培养基的改进和培养条件优化
目的:改进无细胞百日咳疫苗生产用培养基并优化培养条件.方法:用不同浓度溶血(0.1％)赫氏琼脂及酸水解酪蛋白制备百日咳活性炭培养基,选择优培养条件;使用百日咳活性炭培养基成功复苏菌种后,优化传代代次和培养时间,评价百日咳活性炭培养基替代羊血包姜氏培养基的可行性;用酸水解酪蛋白代替自制50％酸水解酪蛋白制备改良SS液体培养基,并用ELISA、SDS-PAGE电泳和CHO细胞簇集等方法评价对菌种的培养效果.结果:溶血(0.1％)赫氏琼脂的加入量为33.2g/L、酸水解酪蛋白加入量为8g/L时,菌苔生长快;百日咳活性炭培养基培养第1代72 h、第2代48 h、第3代48 h、第4代24 h和第1代72 h、第2代36 h、第3代24 h的血凝(HA)和UV600均较高,这两组细菌生长状态较好;酸水解酪蛋白制备的百日咳活性炭培养基在优化条件后复苏菌种生长良好,和羊血包姜氏培养基没有明显差异;8g/L酸水解酪蛋白制备的改良SS液体培养基所得菌量优于50％酸水解酪蛋白制备培养基(P=0.001),改良SS液体培养基培养所得百日咳毒素纯度、产量和CHO细胞簇集活性均较好.结论:使用酸水解酪蛋白的百日咳活性炭培养基和改良SS液体培养基所得的百日咳杆菌纯度、产量、活性均较高,适用于无细胞百日咳组分疫苗的生产.
