首页 > 文献资料
-
四株临床分离百日咳鲍特菌主要抗原基因序列分析
目的 了解石家庄地区分离的百日咳鲍特菌4种抗原基因百日咳毒素S1亚单位(ptxS1)、外膜蛋白(Prn)、凝集素2(Fim2)和凝集素3(Fim3)的基因特征.方法 收集4株临床分离的百日咳鲍特菌,这4株菌于2002年分离自河北石家庄地区.分别对这4株茵的ptxS1、Prn、Fim2、Fim3主要抗原基因进行PCR扩增和测序,并与我国的百日咳鲍特菌疫苗生产株抗原基因序列以及GenBank中收录的百日咳基因序列进行比较、分析.结果 序列分析显示,新近分离的4株菌的S1基因亚型与我国疫苗生产菌株不同,均为A亚型,发现3种Prn基因亚型和3种Fim3基因亚型,核苷酸和氨基酸序列与我国疫苗生产菌株同源性均在99%以上.基因进化树显示与其他菌株的同源性也较高.结论 我国的临床分离菌株与疫苗生产菌株的主要抗原基因序列存在一定变异,为百日咳的流行病学研究和疫苗的研制积累理论依据.
-
fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌1型菌毛粘附功能影响的初步探讨
目的 研究fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)1型菌毛粘附功能的影响,比较1型菌毛粘附阳性与阴性菌株的基因变化.方法 对天津地区三家三级甲等医院(天津医科大学第二医院、天津市第一中心医院、天津市儿童医院)2012年1月至2013年1月非植入导尿管患者的尿液样本分离非重复感染大肠埃希菌171株进行研究,通过PCR检测fimH基因携带情况,酵母细胞粘附实验检测1型菌毛的粘附情况.针对fimH基因进行RT-PCR实验,消除转录对粘附作用的影响.采用常规x2检验和Yates校正x2检验比较fimH基因转录粘附阴性组与阳性组间fimH基因序列的改变.结果 天津地区UPEC菌株fimH基因携带率为83％,1型菌毛粘附率为57％,粘附阳性菌株均携带fimH基因.因fimH基因未转录导致粘附阴性的菌株占18％.第51位氨基酸位点粘附阳性组较阴性组更易发生突变(x2=6.64,P=0.010);第190位与第219位氨基酸位点于粘附阴性组各有6株菌和7株菌发生突变,而阳性组未见突变(x2=4.69和5.87,P值均＜0.05);粘附阴性组其余23株菌株无法用单核苷酸多态性改变解释其粘附阴性.结论 fimH基因的突变与缺失可以影响UPEC菌株1型菌毛粘附功能,除了转录调控外,还发现了可能引起1型菌毛粘附功能改变的3个关键位点;粘附过程中除fimH基因这一关键因素外,其他基因可能也会影响1型菌毛的粘附功能.
-
原发性根尖周炎感染根管内牙龈卟啉单胞菌fimA与kgp基因型组合的研究
目的 探寻原发性根尖周炎感染根管内牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg) fimA与kgp基因多态性分布及常见的基因型组合,为筛选Pg毒力株提供依据.方法 从上海交通大学医学院附属第九人民医院牙体牙髓科2013年6月至2015年9月间采集的原发性根尖周炎感染根管样本中筛选34例Pg阳性样本,利用专性引物进行fimA基因扩增分型,同时采用MseⅠ内切酶进行kgp酶切分型.统计fimA与kgp各基因型检出率与常见基因型组合,并通过Pearson χ2检验法分析基因型组合与临床症状的相关性.运用激光扫描共聚焦显微镜观察比较携带不同基因型组合的Pg生物膜结构差异.结果34例Pg阳性样本中,fimAⅡ型检出率高[47%(16/34)],其次为fimAⅠ型[26%(9/34)], fimAⅤ型仅检出1例,kgpⅠ型的检出率[56%(19/34)]略高于Ⅱ型[44%(15/34)].其中,fimAⅡ型+kgpⅠ型和fimAⅡ型+kgpⅡ型是常见的2种基因型组合,检出率均为24%(8/34).特定基因型组合的检出与牙龈肿胀、牙源性窦道无显著相关性(P>0.05).从样本中分离获得3株携带不同基因型组合的Pg,其分离株A(fimAⅠ型+kgpⅠ型)形成的生物膜致密,分离株C(fimAⅤ型+kgpⅠ型)形成的生物膜较疏松,分离株B(fimAⅢ型+kgpⅡ型)介于两者之间.结论 原发性根尖周炎感染根管内Pg以fimAⅡ型为主,kgpⅠ型略多于kgpⅡ型,fimAⅡ型+kgpⅠ型与fimAⅡ型+kgpⅡ型是常见的两种基因型组合;不同基因型组合可能导致Pg生物膜结构存在差异.
-
定向敲除牙龈卟啉单胞菌菌毛蛋白FimA的重组质粒构建
目的 构建定向敲除牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)菌毛蛋白FimA基因的质粒pPHU281_A_Spec_B,用于后续构建菌毛蛋白FimA缺陷型Pg,为研究FimA的功能奠定分子基础.方法 厌氧培养PgATCC33277,提取基因组DNA,聚合酶链反应扩增PgFimA基因一定长度的上游A片段及下游B片段,并在扩增片段两端添加合适的酶切位点；利用定向克隆技术将A和B 基因插入到载体自杀质粒pPHU281中,并添加大观霉素抗性基因片段,重组的pPHU281 _A_Spec_B 在大肠杆菌DH-5α内扩增后酶切电泳鉴定并进行DNA测序.结果 通过对重组质粒pPHU281_A_Spec_B进行酶切鉴定以及DNA序列测定分析,证明重组质粒pPHU281_A_Spec_B构建成功.结论 成功构建了质粒pPHU281_A_Spec_B,有利于菌毛蛋白FimA缺陷型Pg的构建,为深入研究FimA的作用机制奠定了基础.
-
产肠毒素大肠杆菌987P菌毛蛋白FasA亚单位的原核表达及其免疫原性
目的 表达、纯化产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC) 987P菌毛蛋白FasA亚单位,并检测其免疫原性.方法 将去掉5′端信号肽序列的fasA基因克隆至原核表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-fasA,转化E.coli M15,0.5 mmol/L IPTG诱导表达.表达的融合蛋白6×His-FasA经Ni-Agarose His纯化和复性后,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,每次100 μg,共免疫3次,间隔2周,末次免疫10 d后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,采用间接ELISA法检测抗血清效价.结果 重组表达质粒pQE-30-fasA经PCR、双酶切和测序证实构建正确;表达的6×His-FasA融合蛋白相对分子质量约为18 500,主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的30％;纯化的蛋白纯度可达95％,浓度为0.6 mg/ml,免疫小鼠所得抗血清效价为1:125 000.结论 已成功在E.coli M15中表达了6×His-FasA融合蛋白,纯化的融合蛋白免疫原性良好,为进一步研制以双歧杆菌为表达系统的新型ETEC亚单位口服疫苗奠定了基础.
