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尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因核酸疫苗免疫效果评价
目的:研究尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛fimH基因核酸疫苗产生的免疫反应及其对小鼠的免疫保护作用,并比较不同免疫途径产生的免疫效果.方法:选取BALB/c小鼠40只,随机分为4组(PBS组、空质粒组、pcDNA3.0-fimH肌肉注射组、peDNA3.0-fimH滴鼻组),用构建的fimH基因真核表达载体pcDNA3.0重组质粒分别通过肌肉注射和滴鼻(牯膜)免疫BALB/c小鼠,同时分别以载体质粒(pcDNA3.0)和PBS液为空质粒对照和空白对照,经股四头肌注射免疫小鼠,于第3周和第5周加强免疫.每次免疫前及末次免疫后2周采血检测特异IgG抗体.末次免疫后第10d,以UPEC分离株菌液进行尿道上行攻击,攻击后第5d进行尿液细菌培养和计数.结果:免疫后,肌注组与滴鼻组小鼠血清特异性IgG抗体水平与对照组及空质粒组比较显著升高(P<0.05);UPEC分离株菌液攻击小鼠后,pcDNA3.0-fimH肌注组与滴鼻组小鼠尿液菌落数较对照组及空质粒组显著减少(P<0.05).结论:pcDNA3.0-fimH基因疫苗可诱导BALB/c小鼠产生特异性体液免疫,对小鼠尿道上行感染具有一定的免疫保护作用,且不同的免疫途径免疫效果亦有不同.
关键词： 尿路致病性大肠埃希菌 Ⅰ型菌毛 fimH基因 免疫效果 -
fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌1型菌毛粘附功能影响的初步探讨
目的 研究fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)1型菌毛粘附功能的影响,比较1型菌毛粘附阳性与阴性菌株的基因变化.方法 对天津地区三家三级甲等医院(天津医科大学第二医院、天津市第一中心医院、天津市儿童医院)2012年1月至2013年1月非植入导尿管患者的尿液样本分离非重复感染大肠埃希菌171株进行研究,通过PCR检测fimH基因携带情况,酵母细胞粘附实验检测1型菌毛的粘附情况.针对fimH基因进行RT-PCR实验,消除转录对粘附作用的影响.采用常规x2检验和Yates校正x2检验比较fimH基因转录粘附阴性组与阳性组间fimH基因序列的改变.结果 天津地区UPEC菌株fimH基因携带率为83％,1型菌毛粘附率为57％,粘附阳性菌株均携带fimH基因.因fimH基因未转录导致粘附阴性的菌株占18％.第51位氨基酸位点粘附阳性组较阴性组更易发生突变(x2=6.64,P=0.010);第190位与第219位氨基酸位点于粘附阴性组各有6株菌和7株菌发生突变,而阳性组未见突变(x2=4.69和5.87,P值均＜0.05);粘附阴性组其余23株菌株无法用单核苷酸多态性改变解释其粘附阴性.结论 fimH基因的突变与缺失可以影响UPEC菌株1型菌毛粘附功能,除了转录调控外,还发现了可能引起1型菌毛粘附功能改变的3个关键位点;粘附过程中除fimH基因这一关键因素外,其他基因可能也会影响1型菌毛的粘附功能.
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泌尿系感染患者大肠埃希菌fimH基因检测及尿便来源菌株同源性分析
目的:检测尿路致病性大肠埃希菌Ⅰ型菌毛相关基因fimH携带率,调查相同泌尿系感染患者尿便大肠埃希菌的同源性,对相关基因fimH进行序列分析.方法:89株来自反复发作性尿路感染和急性单纯性膀胱炎患者清洁中段尿分离的大肠埃希菌.PCR方法检测Ⅰ型菌毛基因fimH,采用Fisher确切概率法比较两组携带率是否有差异.取9名患者尿便同时培养的大肠埃希菌进行药敏初筛分型,同源性分析采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对其fimH基因PCR扩增产物进行序列分析.结果:89株检出81株fimH阳性,两组检出率分别为(64/70)91.4％和(17/19)89.4％,P＞0.05.9名患者中5名患者尿便同时分离大肠埃希菌各自存在相同的PFGE型,同一患者尿便同型株中fimH阳性者序列比对无差异,不同型株fimH阳性者其序列均有6～7处变异.结论:fimH基因存在于绝大多数尿路致病性大肠埃希菌中.引起泌尿系感染的大肠埃希菌部分来源于肠道.
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尿路致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛的FimH蛋白与DNA免疫效果比较
目的:用尿路致病性大肠杆菌(UPEC)Ⅰ型菌毛FimH蛋白的DNA和蛋白免疫小鼠,以观察不同组别的细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫的效果.方法:将fimH质粒、fimC质粒,FimH、FimC蛋白经多种组合免疫小鼠,ELISA法检测外周血中抗FimH蛋白的特异性IgG和膀胱中的SIgA,流式细胞仪检测脾脏中CD3、CD4、CD8三种T细胞亚群的变化.结果:DNA免疫后血清中可检测出特异性IgG,但效价较低,可检测出较低效价的SIgA,脾脏中CD4+T细胞百分含量较高,引起较强的细胞免疫.蛋白免疫后血清特异性IgG较高,发生较强的体液免疫,未测出SIgA.结论:FimH蛋白的DNA疫苗引起细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫,蛋白疫苗只能诱导体液免疫,FimC蛋白能增强FimH蛋白的免疫原性.
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尿路致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimH基因真核表达质粒的构建及表达
目的构建以尿路致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛fimH基因为靶位的真核表达质粒,并使其在小鼠肌肉中表达.方法应用PCR方法及基因重组技术,克隆了尿路致病性大肠杆菌标准菌株J96 fimH基因,并将fimH基因插入真核表达载体pcDNA3中.免疫BALB/c小鼠,用免疫组化染色法观察表达情况.结果与结论成功地构建了真核表达质粒pcDNA3-fimH,序列分析显示,fimH基因核苷酸序列与GenBank上登录的一致,fimH蛋白在小鼠肌肉组织细胞内呈分散表达.
