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血管生成素样蛋白4及其在肾损伤中的研究进展
血管生成素样蛋白(angiopoietin-like,Angptl)是由Kim等于2000年首先发现的具有多功能的信号蛋白,与人血管生成素结构上具有相似性,但不能与酪氨酸受体结合。 Angptl4是Angptl家族重要成员之一,又被称为禁食诱导脂肪因子( fasting induced adipose factor ,FIFA)、过氧化物酶体增殖物激活型受体( peroxi-some proliferator-activated receptors , PPAR )调节靶标等, Angptl4以寡聚体、糖基化及各种亚型的形式存在,经细胞分泌后可直接进入血循环,在糖脂代谢、动脉粥样硬化、调节血管发生、细胞分化等方面具有重要作用。近年来研究发现,Angptl4也参与肾脏疾病的发生发展。本文就Angptl 4的研究进展及其在肾脏损害中的作用作一综述。
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人血管生成素-1和血管内皮生长因子165基因克隆及复制缺陷型腺病毒载体构建
本研究克隆人血管生成素-1(Angiopoietin-1, Ang1)和血管内皮生长因子(VEGF)165的全长编码基因,构建高转染效率和表达水平的复制缺陷型腺病毒重组体.研究结果显示,Ang1和VEGF联合应用具有抗细胞凋亡的作用.
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重组载体pEGFP-ANG的构建及ANG基因在HUVEC中的表达
目的:建立血管生成素(angiogenin, ANG)基因的真核表达系统.方法:采用化学合成拼接法, 获得人ANG全长cDNA并测序, 构建重组荧光真核细胞表达质粒pEGFP-ANG, 然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC).应用荧光显微镜观测及免疫组化染色, 对转染细胞内pEGFP-ANG的表达进行鉴定.结果:测序表明, 编码的氨基酸序列与人ANG完全一致.荧光显微镜下可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光.免疫组化检测显示, 转染的HUVEC中有棕色颗粒.结论:获得了人ANG的全长编码基因.构建的重组体pEGFP-ANG转染HUVEC后, 可表达人ANG蛋白.
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人血管生长素的真核表达及亚细胞定位
目的:建立人血管生成素(angiogenin, ANG)的真核表达系统并在细胞内亚定位.方法:采用亚克隆技术构建重组荧光真核细胞表达质粒pEGFP/ANG, 然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并对转染细胞内pEGFP/ANG的表达用荧光显微镜和免疫组化染色进行鉴定.用共聚焦显微镜和免疫电镜观察ANG的亚细胞定位.结果:荧光显微镜观察可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光.免疫组化染色检测显示, 转染的HUVEC中有棕色颗粒.共聚焦显微镜及免疫电镜检查显示, ANG集聚于细胞核区.结论:以构建的重组体pEGFP/ANG转染HUVEC后, 可表达人ANG蛋白; 表达的ANG定位于细胞核区.