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外周血树突状细胞的制备和表型分析
目的:探讨体外分离人外周血单个核细胞(PBMC)和诱导生成树突状细胞(dendriticcell,DC).方法:从外周血分离PBMC,加入细胞因子诱导DC,流式细胞仪测定CD86和HLA-DR,分析其成熟度和激活度.结果;HLA-DR和CD86在PBMC中几乎无表达,经GM-CSF和IL-4诱导后低表达;加入TNF-α后高表达.结论:GM-CSF和IL-4诱导培养PBMC,可获得大量不成熟DC,加入TNF-α后,DC成熟度高,激活性好.
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Retronectin和CD3mAb联合培养CD56+细胞用于治疗胰腺癌的研究
目的 探讨CD56+细胞体外富集培养的扩增效率和对JF305胰腺癌细胞系的杀伤效果,评价这种MHC非限制性杀伤效应细胞作为新型过继免疫治疗细胞的应用价值.方法 通过CD56磁珠富集系统分离出外周血中CD56+细胞,分别验证CD3mAb和Retronectin对细胞增殖作用的影响,并通过流式细胞技术检测细胞的CD3、CD16和CD56表达情况,MTS法检测体外杀伤胰腺癌细胞JF-305的效果.结果 磁珠系统能够有效的富集CD56+细胞,CD3mAb和Retronectin联合应用可使细胞的增殖倍数明显提高,且培养后细胞对于JF-305具有较强的杀伤活性.结论 CD3mAb和Retronectin联合培养CD56+细胞的方法能够提高细胞的增殖效率和杀伤活性,具有良好的临床细胞治疗应用前景.
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白细胞免疫球蛋白样受体A3在类风湿关节炎患者外周血CD14+单核细胞中的表达
目的:分析白细胞免疫球蛋白样受体A3(LILRA3)在类风湿关节炎(RA)患者外周血CD14+单核细胞中的表达.方法:收集2017年2至8月在浙江大学医学院附属第二医院风湿科住院治疗的RA患者53例和21名该院健康体检者的资料.流式细胞术检测CD14+单核细胞亚群LILRA3表达,并分析其与RA患者的临床特征、实验室指标、自身抗体和疾病活动度的关系.结果:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达水平较健康对照组升高(P<0.01).LILRA3表达与RA患者压痛关节数、肿胀关节数、红细胞沉降率呈正相关(r=0.280、0.371、0.341,P<0.05或P<0.01),但与年龄、病程、Sharp评分、C反应蛋白、血常规及免疫球蛋白等指标均无相关性(均P>0.05).类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体阳性患者LILRA3的表达率高于阴性患者(均P<0.05).以28处关节疾病活动指数(DAS28)5.1分作为疾病活动度分组的依据,高疾病活动度组LILRA3表达率较中低疾病活动度组升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:RA患者外周血CD14+单核细胞中LILRA3表达升高,且与疾病活动度相关.
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IL-2诱导外周血单个核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应
目的了解白细胞介素2(IL-2)诱导外周血单个核细胞(PBMC)对肿瘤细胞的杀伤效应,探讨其作用机制.方法 IL-2(105 IU/L)体外诱导PBMC 5 d,并与Raji细胞株共同培养,采用MTT法测定不同时间诱导后的PBMC对Raji细胞的杀伤效应;采用BAS-ELISA法检测杀伤活性大时的IFN-γ、TNF-α、sFasL的表达,采用流式细胞仪检测诱导后PBMC的FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达.结果 IL-2(105 IU/L)体外诱导PBMC 5 d时,都能明显增强对Raji细胞的杀伤活性,而且在培养的第4天杀伤活性高(P<0.05),诱导PBMC 4 d后, FasL、穿孔素、颗粒酶B的表达与B组相比,明显增加,差异有显著性(P<0.05).结论 IL-2(105 IU/L)体外诱导PBMC能明显增强对Raji细胞的杀伤活性,主要是通过诱导PBMC表达IFN-γ、穿孔素、颗粒酶B和FasL的表达而发挥抗肿瘤细胞的作用.
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仿刺参体壁提取物海参糖胺聚糖对肺结核患者外周血体外细胞免疫调节功能的影响
目的 探讨仿刺参体壁提取物海参糖胺聚糖(HGAG)对肺结核患者外周血体外细胞免疫功能影响.方法 选取健康人群40例(健康组)和肺结核患者30例(结核组)抗凝外周血4ml,分离外周单个核血细胞(PBMC),与HGAG体外共培养24h.采用流式细胞仪检测CD45RA、CD45 RO、CD1a和CD83的表达.结果 肺结核组CD45RA和CD45RO表达以HGAG浓度为50 μg/ml明显(P＜0.05);而健康组CD45RA、CD45RO表达分别以10μg/ml、50 μg/ml HGAG浓度明显(P＜0.001).培养前两组间CD45RA表达差异无统计学意义(P＞0.05),CD45RO表达比较差异有统计学意义(P＜0.01);培养后两组CD45RA和CD45RO在10 μg/ml和50 μg/ml HGAG时表达差异有统计学意义(P＜0.05).健康组在培养前后,CD1a和CD83表达差异无统计学意义(P＞0.05),而结核组在培养前后比较,CD1a和CD83表达差异均有统计学意义(P＜0.05).健康组与肺结核组在培养前CD1a表达差异无统计学意义(P＞0.05),而CD83表达差异有统计学意义(P＜0.001);培养后,两组间CD1a和CD83表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 HGAG在一定浓度范围内可以下调CD45RA表达和上调CD45RO表达,并促进肺结核患者树突状细胞(DC)成熟,从而调节肺结核患者的细胞免疫.
关键词： 葡糖氨基聚糖类/治疗应用 结核 肺/药物疗法 单核细胞/免疫学 -
HBV侵犯外周血单个核细胞对干扰素-γ表达的影响
目的:探讨HBV侵犯外周血单个核细胞(PBMCs)对干扰素-γ(IFN-γ)表达和分泌水平的影响.方法:巢式PCR检测120例慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA;采用实时定量RT-PCR和ELISA法分别检测PBMCs中IFN-γmRNA的表达及血清IFN-γ的分泌水平.结果:120例慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA阳性率为62.5%,且HBeAg阳性组PBMCs中HBV DNA阳性率(80.0%)明显高于HBeAg阴性组(45.0%);慢性HBV感染者IFN-γmRNA的表达和分泌水平均低于健康对照组;慢性HBV感染者PBMCs中HBV DNA阳性组IFN-γmRNA的表达和分泌水平均明显低于HBV DNA阴性组;HBeAg阳性组IFN-γ表达和分泌水平均明显低于HBeAg阴性组.结论:慢性HBV感染者IFN-γ的表达和分泌水平与HBV侵犯PBMCs有关,亦与不同疾病状态相关.
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妊娠期糖尿病孕妇外周血单个核细胞TNF-α基因表达水平的实验性研究
目的: 观察妊娠期糖尿病(GDM)患者外周血单个核细胞(PBMC)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因转录和表达的水平,探讨其在GDM发病过程中的意义.方法: 选取GDM、正常妊娠和健康非妊娠组各30例,采用ELISA法检测空腹血清中的TNF-α水平.收集研究对象外周血单个核细胞(PBMC),采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印记分析(Western blot)技术测定实验对象外周血单个核细胞TNF-α mRNA转录和蛋白质表达的水平.结果:GDM组、正常妊娠组空腹血清TNF-α水平显著高于健康非妊娠组,而GDM组显著高于正常妊娠组.三组间的外周血单个核细胞TNF-α mRNA转录水平、TNF-α蛋白的相对含量无显著性差异.结论:TNF-α可能参与了GDM的发生发展过程,但是PBMC可能不是GDM时TNF-α增加的来源.
关键词： 糖尿病 妊娠/免疫学 单核细胞/免疫学 肿瘤坏死因子/免疫学 -
系统性红斑狼疮患者血中Vα24-Vβ11 NK T细胞介导的免疫调节失调机制研究
目的:通过对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)中NK T细胞含量及其功能状态的研究,评价NK T细胞在这类疾病失调中的可能作用及其机制.方法:流式细胞光度术(FCM)检测NK T细胞含量;细胞培养检测NK T细胞增殖能力;ELISA检测细胞因子.结果:PBMC中 NK T细胞含量比较:SLE组较正常对照组明显减少,具有极显著性差异.培养前后PBMC中 NK T细胞含量比较,培养后较培养前均增加,具有极显著性差异.培养上清中IFN-γ含量比较:SLE组与正常对照组间比较无显著性差异.培养上清中IL-4含量比较:SLE组较正常对照组明显增加,具有极显著性差异.结论:SLE的发病可能与 NK T细胞数量的低下及功能严重失调有关.
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CD40和CD40L在大鼠炎症性肠炎外周血和结肠组织单-核细胞中的表达
目的:研究CD40和CD40L在大鼠炎症性肠炎(IBD)外周血和结肠组织单-核细胞(MC)中的表达与免疫功能紊乱的关系.方法:利用流式细胞仪对20例炎症性肠炎大鼠和20例正常对照组外周血、结肠组织MC上CD3、CD4、CD8、CD19的表达进行检测;CD40L在CD4+T和CD8+T细胞上的表达及CD40在CD19+B细胞上的表达进行检测.结果:IBD大鼠外周血、结肠组织CD3+、CD3+CD4+、CD19+细胞较正常对照组显著增高,CD3+CD8+细胞较正常对照组显著降低;IBD大鼠外周血、结肠组织CD4+T细胞和CD8+T细胞上的CD40L、D19+B细胞上CD40的表达都较对照组显著增高,且结肠组织上的表达又比外周血高.结论:CD40-CD40L途径在IBD免疫功能紊乱中可能起了重要作用.
关键词： 炎性肠疾病/免疫学 结肠 单核细胞/免疫学 受体 肿瘤坏死因子/免疫学 -
实时荧光定量测定人B细胞激活因子受体-BCMA基因表达水平
目的:研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体-BCMA含量的方法,及探讨其外周血单个核细胞(PBMC)中BCMA mRNA表达的检测价值.方法:在BCMA基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录-PCR扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BCMA mRNA含量,并以 BCMA mRNA和β2 M mRNA含量的比值进行BCMA表达水平评价.结果:RFQ -PCR检测BCMA含量的线性范围为109 pg/ml ～101 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为13.5%和11.2%,高浓度样本批内和批间CV分别为8.9%和9.7%.30例健康献血员样本的PBMC中,90%(27例)检出有BCMA mRNA表达,范围为0.10～0.98.结论:RFQ-PCR检测BCMA mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性.
