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骨髓间充质干细胞移植后在肝损伤大鼠体内的分布及其治疗作用
目的 探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在大鼠体内的分布及其对肝损伤的治疗作用.方法 应用2-乙酰氨基芴(2-AAF)建立大鼠急性肝损伤模型,经门静脉注射进行同种异体骨髓MSCs移植后不同时间,通过4,6-二醚基-2-苯基吲哚盐酸化合物(DAPI)标记、免疫组化Y染色体性别决定区(SRY)检测等方法观察移植细胞分布,并通过肝组织病理改变和丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血清白蛋白(ALB)的变化观察MSC移植对肝损伤的治疗作用.结果 2-AAF可导致大鼠肝组织弥漫性损伤,移植后1 w和3 w肝组织病变减轻.移植后1 w受体鼠肝、肺及脾脏中均可见DAPI阳性细胞,移植后3 w仅在肝损伤大鼠肝内发现DAPI阳性细胞组成的细胞簇,形态与肝实质细胞相近;SRY蛋白检测结果与之一致.干细胞移植后1.w,移植组大鼠血清ALT较移植前显著降低,但仍高于对照组;血清AST较移植前显著降低,且与对照组无显著差异;血清ALB较移植前增高,但仍显著低于对照组.干细胞移植后3 w,ALT、AST以及ALB均与对照组无显著差异.结论 2-AAF可造成大鼠肝组织弥漫性损伤,肝损伤环境有助于经门静脉移植的骨髓MSCs的定植,MSCs移植对大鼠肝损伤具有治疗作用.
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复方丹参滴丸对2-乙酰氨基芴致突变性的影响
目的观察复方丹参滴丸诱导处理对原致癌物2-乙酰氨基芴(2-AAF)致突变作用的影响.方法将复方丹参滴丸不同剂量诱导处理后的大鼠肝S9作为代谢活化系统进行Ames试验,比较加入S9前后2-AAF对鼠伤寒沙门氏菌的回复突变率.雄性昆明小鼠以不同剂量复方丹参滴丸诱导处理,比较未诱导(-)与诱导(+)处理后,2-AAF引起骨髓微核率及PCE/NCE比值的变化.结果经复方丹参滴丸不同剂量诱导处理的大鼠肝S9复和空白对照肝S9对对2-AAF均有代谢活化作用,TA98、TA100菌株的菌落回变数比无S9活化时增高5倍左右,但两两比较无明显差异.微核试验表明2-AAF引起小鼠骨髓微核率明显升高,PCE/NCE比值下降.复方丹参滴丸三个不同剂量诱导处理后,2-AAF致小鼠骨髓微核率与未用复方丹参滴丸诱导处理时相比两项指标均无明显差异,复方丹参滴丸三个剂量诱导组间也无明显差异.结论复方丹参滴丸未见致突变作用,用其诱导处理,亦不能增强2-AAF的致突变性.
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2-乙酰氨基芴诱导γH2AX焦点的形成
目的探讨DNA损伤剂2-乙酰氨基芴(2-AAF)是否可诱导γH2AX焦点的形成及γH2AX作为检测DNA损伤的一个新的特异指标的可能性.方法用2-AAF处理中国仓鼠CHL细胞,应用免疫荧光方法检测γH2AX焦点的形成,并通过中性彗星实验验证DNA损伤的程度.结果 0.1,1,5和20 mg·L-1的2-AAF 都可使细胞核内γH2AX 焦点数量及有γH2AX焦点生成的细胞数量增加,但只有20 mg·L-1 2-AAF处理的细胞才出现明显的彗尾增长及有彗尾的细胞数量增加.另外,磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)家族抑制物渥曼青霉素可抑制2-AAF诱导的γH2AX焦点形成.结论 2-AAF可通过激活 PI3K家族成员使H2AX磷酸化,进而诱导γH2AX焦点的形成.γH2AX检测DNA损伤的敏感性优于彗星实验,因此,γH2AX有可能成为衡量DNA损伤程度的良好指标.
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奥曲肽对大鼠原发性肝细胞癌抗肿瘤作用的实验研究
目的:研究生长抑素八肽(奥曲肽)对2-乙酰氨基芴(2-FAA)诱发的实验性肝癌的抑癌作用及其机理.方法:选择健康雄性SD大鼠,以2-FAA喂饲制备大鼠肝癌模型.治疗组给予奥曲肽(50μg*kg-1)皮下注射,每日1次,给药时间分别为4周及8周,同时设生理盐水对照组.治疗4周末及8周末处死大鼠,获取肝脏组织和血清;称肝湿重;记录肝表面肿瘤结节分布情况;肝肿瘤组织HE染色后在光镜下观察肝脏组织形态学变化;并测定血清γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)水平.结果:奥曲肽治疗组肝肿瘤结节数明显少于生理盐水对照组,给药4周及8周末两组相比差异均有显著性(P<0.01).奥曲肽治疗组肝癌组织中发现较多凋亡细胞.治疗4周末奥曲肽治疗组的GGT活性低于生理盐水对照组(P<0.05);治疗8周末,奥曲肽治疗组血清GGT及GPDA活性均低于生理盐水对照组(P<0.05);血清AFU活性在治疗4周及8周末,两组差异均无显著性(P>0.05).结论:奥曲肽对大鼠肝细胞肝癌的生长具有明显抑制作用,其作用机理可能与抑制肿瘤细胞增殖与诱导肝癌细胞凋亡有关.奥曲肽可降低血清GGT及GPDA水平.
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中华伍氏百叶散防癌的实验研究
目的:研究中药中华伍氏百叶散(WSBYS)的防癌作用.方法:研究观察中药对2-乙酰氨基芴(2-FAA)诱发大鼠肝癌的影响.结果:服用中华伍氏百叶散各组有病变的鼠数及病变严重程度均低于模型对照组,体重及外观也高于模型对照组.结论:根据中华伍氏百叶散对大鼠的喂养剂量不同,对2-FAA诱导的大鼠肝癌发生有明显强度不等的防癌作用.
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中华伍氏百叶散抗大鼠肝癌的实验研究
目的:研究中华伍氏百叶散(WSBYS)的抗癌作用.方法:通过大鼠体重,肝脏病理学为指标,观察WSBYS对2-乙酰氨基芴(2-FAA)诱导的大鼠肝癌的治疗作用.结果:服用WSBYS治疗的大鼠,肝癌病变程度低于阳性对照组,体重高于阳性对照组,且与剂量大小呈正相关.结论:WSBYS对2-FAA诱导的大鼠肝癌有明显的治疗作用.
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复方龙葵胶囊对2-乙酰氨基芴诱导大鼠肝癌的影响
目的:研究复方龙葵胶囊对2-乙酰基芴(2-AFF)诱导大鼠肝癌的影响.方法:肝癌模型以0.05%2-AFF的饲料喂养SD大鼠10周.给予不同剂量复方龙葵灌胃,观察大鼠一般情况,检测肝脏指数、ALT、AST、γ-GT及肝组织的病理学.结果:与模型组比较,龙葵各剂量组和阳性对照组肝脏指数均显著降低(P＜0.01).肝功能指标均显著低于模型组(P＜0.01),各组之间差异无显著性.结论:复方龙葵胶囊对实验性大鼠肝癌有明显的抑制作用.
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中华伍氏百叶散对大鼠实验性肝癌的影响
目的研究中药中华伍氏百叶散(WSBYS)对肝癌的防治作用.方法根据中药(WSBYS)2种大小不同剂量及用药时间分为预防组,治疗组各2组,另设阴性和阳性对照各1组,观察其对2-乙酰氨基芴(2-FAA)诱发大鼠肝癌的影响.用Scheffe检验与Kruskal-Wallis检验分别对体重及组织学改变进行统计学分析.结果服用中华伍氏百叶散各组有病变的鼠数及病变严重程度均低于阳性组,体重及外观好于阳性组.结论根据中华伍氏百叶散对大鼠的喂养剂量不同,对2-FAA诱导的大鼠肝癌发生有明显不同程度的抑制作用.
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富半胱氨酸蛋白61在肝卵圆细胞增殖和分化中的作用及意义
目的 分析肝卵圆细胞(HOCs)在2-乙酰氨基芴+2/3肝切除(2-AAF/PHx)大鼠肝损伤模型中的增殖、分化情况,并且对富半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在HOCs增殖、分化中的作用及机制进行初步研究.方法 构建2-AAF/PHx大鼠肝损伤模型,采用免疫组织化学染色、Western blot检测等方法对大鼠肝脏组织中HOCs增殖、分化情况和Cyr61的表达水平进行检测分析;并且,采用Western blot检测等方法研究分析HOCs株WB-F344被诱导分化的过程中,Cyr61和β-连环蛋白(β-catenin)表达水平的变化.结果2-AAF/PHx大鼠模型肝脏组织中Cyr61的表达在HOCs活化增殖的过程中明显升高,HOCs分化为正常肝细胞或胆管细胞后又恢复正常水平;体外实验中,Cyr61和β-catenin蛋白表达水平在WB-F344细胞向肝细胞分化过程中明显增高.结论 Cyr61可以促进HOCs的增殖和分化,并且可能和β-catenin信号通路的激活密切相关.
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小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究
目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源.方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest 3342荧光标记HPCs并制备成6.0×107/ml细胞悬液.移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy 60 Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0.1 ml含6.0×106 HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况.结果体外培养ESC并制备出EBs,EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏,4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应.结论本实验建立一种将体外ESC诱导的HPCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础.
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2-乙酰氨基芴对大鼠肝卵圆细胞增殖模型的影响
目的在建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型的基础上,进一步研究2-乙酰氨基芴(AAF)对大鼠肝卵圆细胞增殖的影响.方法按本室建立和改进的方案建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型,AAF剂量分别按10、20及25 mg/kg给予,同时设单纯切肝对照组、假手术对照组及生理盐水对照组,重点观察大鼠肝组织结构变化及不同剂量下肝卵圆细胞增殖情况.结果3个对照组大鼠肝组织内均未见到肝卵圆细胞,而3个实验组均见肝卵圆细胞增生;与10 mg/kg剂量组比较,20 mg/kg及25 mg/kg两个剂量组大鼠肝组织内的肝卵圆细胞增殖更加明显,但25 mg/kg剂量组大鼠死亡率较高,存活大鼠健康状况差.结论AAF可诱导大鼠肝卵圆细胞增殖,剂量以20 mg/kg较为理想.
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2-乙酰氨基芴诱导大鼠肝细胞P-糖蛋白的过度表达
目的:观察致癌剂2-乙酰氨基芴(2-AAF)对大鼠肝细胞P-糖蛋白(P-gp)表达的影响,初步探讨肝癌P-gp天然性过度表达的机制.方法:实验组大鼠采用致癌剂2-AAF灌胃,5mg@k醇1@d1连续10天,对照组大鼠用玉米油灌胃,连续10天,然后采用Westem Blots法检测大鼠肝细胞P-gp的表达量.结果:实验组大鼠肝细胞P-gp的表达量是对照组大鼠的8倍多(P＜0.001).结论:2-AAF能够诱导大鼠肝细胞P-gp的过度表达,提示肝癌P-gp天然性过度表达的原因可能与肝细胞癌变过程中,某些致癌物对P-gp的诱导有关.
