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外周血白细胞端粒长度与早发冠心病的相关性研究
目的：探讨早发冠心病（premature coronary artery disease， PCAD）与外周血白细胞端粒长度的相关性。方法收集我院经冠状动脉造影确诊为PCAD的患者30例，同期选取与PCAD患者性别、年龄均匹配的健康体检者30例为对照组。 PCAD患者按照年龄分为38～42岁组、43～50岁组和51～55岁组。采集受试者外周血，采用southern blot法检测外周血白细胞端粒长度，对检测结果进行统计学分析。结果 PCAD组外周血白细胞端粒长度明显比对照组短，且差异有统计学意义（t＝2.162，P＝0.039）。三个不同年龄段组PCAD患者外周血白细胞端粒长度差异有统计学意义（F＝4.380，P＝0.020）。43～50岁组和51～55岁组PCAD患者外周血白细胞端粒长度均长于38～42岁组，且差异均有统计学意义（P＝0.030，P＝0.020）；43～50岁组和51～55岁组PCAD患者外周血白细胞端粒长度差异无统计学意义（P＝0.090）。结论 PCAD患者外周血白细胞端粒长度较健康对照者明显缩短，外周血白细胞端粒长度与PCAD相关。
关键词： 早发冠心病 端粒 Southern blot 白细胞 -
血小板衍生生长因子D(PDGF-D)转基因鼠模型的鉴定
目的:通过Southern Blot的方法鉴定PDGF-D转基因鼠.方法:显微注射Alpha-MyHC-PDGF-D质粒后,产生的PDGF-D转基因c57小鼠养至4～6周.取0.5～1.0cm的小鼠尾巴,蛋白酶K消化过夜,提取基因组DNA.PCR方法初步筛选,阳性鼠进行进一步的Southern Blot 验证.紫外分光光度法定量基因组DNA,EcoRI酶切过夜,酶切产物经纯化后,电泳,转膜.PCR方法制备Alpha-MyHC-PDGF-D载体上特异的hGH PolyA探针,然后由32P-dCTP标记探针,与转好的膜相互杂交,-70摄氏度在X光片上曝光约1个月,得到转基因鼠鉴定的结果.结果:Southern Blot 显示4笼共20只PDGF-D转基因鼠只有一只是阳性鼠.
关键词： PDGF-D Southern blot PCR -
四倍体菘蓝转抗虫基因研究Ⅱ.转半夏凝集素基因菘蓝的分子生物学检测
目的获得转基因菘蓝的分子生物学证据.方法对经卡那霉素筛选的抗性再生菘蓝苗进行聚合酶链式反应(PCR),Southern杂交和RT-PCR检测.结果PCR和Southern杂交检测结果表明,外源半夏凝集素基因已经整合到转基因菘蓝的基因组中,RT-PCR结果表明其DNA可以正常转录成mRNA.结论可以利用农杆菌介导的基因转化技术培育抗虫的菘蓝新品系.
关键词： 菘蓝 半夏凝集素基因 聚合酶链反应 Southern blot RT-PCR -
质粒DNA中宿主菌基因组DNA残留检测方法的比较
目的 对检测质粒DNA中宿主菌基因组DNA含量的Southern blot和Real-time PCR法进行比较.方法 PCR扩增宿主菌染色体DNA的16SrRNA片段,以地高辛标记回收的目的 片段为探针,对提取的质粒pcDNAH进行Southern blot.同时根据16SrRNA基因序列设计探针,建立Real-time PCR反应体系和标准曲线,分别检测质粒中宿主菌基因组DNA的含量.结果 应用Southem blot和Real-time PCR检测质粒peDNAH中宿主菌基因组DNA的含量,结果均符合WHO相关标准.结论 两种检测方法各有优缺点,均可用于检测质粒DNA中宿主菌基因组DNA的残留,可根据不同情况,采用不同方法或配套使用.
关键词： 质粒 DNA 宿主菌 Southern blot 实时 PCR -
DC-Chol脂质体DNA复合物体外对HBV的抑制作用
目的 观察DC-Chol脂质体DNA复合物(DIDC)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 制备DLDC,HepG2.2.15细胞经不同浓度的DLDC作用后,检测其对细胞的毒性作用;提取细胞质DNA,用化学发光Southern blot法检测DLDC对细胞内HBV DNA复制的抑制作用.结果 DLDC可抑制HepG2.2.15细胞增殖,其TC0为78.13 ng/ml,TC50为421.86 ng/ml;DLDC可抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA复制,其IC50为45 ng/ml,SI为9.37.结论 DLDC对胞内HBV DNA的复制有明显的抑制作用.
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胃癌组织端粒长度的变化
目的 探讨胃癌组织端粒长度的变化.方法 采用Southern blot分别检测每例胃癌标本中癌、癌旁和相应正常胃黏膜组织的端粒长度.结果 32例胃癌标本中癌组织的平均端粒长度为5.088±1.712kb,癌旁组织的平均端粒长度为5.969±1.659kb,正常组织的平均端粒长度为6.728±1.707kb;胃癌组织的平均端粒长度变化与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移等病理参数无显著相关性.结论 本研究的结果显示胃癌组织较相应癌旁和正常胃黏膜组织的平均端粒长度明显缩短;并提示端粒长度变化不宜作为判断胃癌恶性程度的生物标志.
关键词： 胃癌 端粒长度 Southern blot -
体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立
目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法.方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoR Ⅰ酶切,然后用Southern blot 检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响.结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多.结论:成功建立了体外培养细胞内HBVcccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA.
关键词： 乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA Southern blot -
不同年龄组白细胞端粒DNA长度变化研究
目的探讨人外周血白细胞端粒DNA随年龄变化的规律.方法选取123例不同年龄健康人外周血样本,采用非同位素探针标记的Southern Blot方法检测了端粒DNA限制性酶切片段(Telomeric re-stricted fragment,TRF)长度的变化.结果对这123例样本就性别组成进行X2检验,得出P＞0.05,说明这123例样品性别对TRF的差异不显著.123例外周血白细胞端粒TRF平均长度随年龄增长而逐渐缩短,且TRF随年龄缩短的速度是不均一的,人外周血白细胞染色体端粒DNA长度可能在5岁左右存在缩短加剧现象.对0～14岁、15～64岁及≥65岁三组进行方差分析(SNK检验),显示有显著性差异(P＜0.01).结论不同年龄组人外周血白细胞端粒DNA长度具有显著差异且变化速率不同,该研究结果为通过端粒DNA长度推断个体年龄提供了可能.
关键词： 端粒 Southern blot 年龄
