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蒙汉族儿童过敏性紫癜多器官损害与HLA-DRB1基因的关联性
分别选择蒙、汉族儿童过敏性紫癜(AP)57例和74例,于关节、胃肠、肾、心、肝、肺和脑中有2个或2个以上器官同时受累的多器官损害者,蒙古族24例、汉族54例.对照组蒙古族102名,汉族108名.组间年龄和性别差异无显著性(P>0.05).所有研究对象居住内蒙,无血缘关系、异族通婚史及其他风湿性疾病史和家族史.AP诊断和器官损害标准参考<诸福棠实用儿科学>中所述方法.以改良酚/氯仿法从静脉血提取DNA.参考熊平等建立的PCR-SSP技术作HLA-DRB1基因型别分析(免疫学杂志,1996,258~261页).
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一种有效念珠菌基因组DNA提取方法的研究
近些年,随着激素、免疫抑制剂、广谱抗生素广泛应用等因素的影响,念珠菌感染发病率迅速上升,因此对念珠菌感染的诊断及鉴定迫在眉睫.目前,真菌的分类和鉴定已进入分子水平,为了保证聚合酶链反应(PCR)及其相关技术的顺利进展,得到高质量的真菌基因组DNA是必须解决的前提.本研究将液氮研磨结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒与经典的酶解-酚氯仿法作一比较,现介绍如下.
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副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较
目的:通过比较聚乙二醇(PEG)沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法3种卵黄抗体(IgY)提纯方法的提纯效果,为批量提纯高质量IgY提供依据.方法:制备副溶血性弧菌灭活疫苗,采用肌肉多点注射法免疫高产蛋鸡,收集鸡蛋,分别采用PEG沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法对鸡蛋中的IgY进行提纯,比较3种提纯方法获得的IgY的蛋白质量浓度、抗体效价和纯度,结合操作过程、成本效益及安全性对3种提纯方法进行综合分析比较.结果:3种方法所提纯的IgY中,蛋白质量浓度从高到低依次为氯仿抽提法、氯仿/PEG法、PEG法;抗体效价相差不大,氯仿抽提法稍高;抗体纯度由高到低依次为PEG法、氯仿/PEG法、氯仿抽提法.PEG法安全性较好,但提取效率相对较低,成本投入较高;氯仿抽提法能够高效地从卵黄中获得IgY,但提取物中掺杂了大量的杂质蛋白;氯仿/PEG法提纯效率高,抗体纯度好,成本效益相对较高.结论:PEG法适用于实验室中少量IgY的提取;氯仿/PEG法的提取效率高,抗体纯度好,可用于批量提取高质量的IgY.
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PCR检测血液中结核分枝杆菌三种标本处理方法的比较
为了早期快速诊断结核病,已有很多文献探索通过PCR从血液中检出结核分枝杆菌[1-3].但是多种血液成分对KPCR具有强烈的抑制作用,即使是用酚-氯仿法提取纯化亦难以去除[4,5].应用十二烷基硫酸钠(SDS)处理标本能有效去除痰、胸腹水、脑脊液中PCR抑制物[5],亦能有效去除血液中的抑制物[6].