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TRAF2在活化B淋巴细胞NF-κB信号传导系统中的作用
目的 肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor associated factor 2,TRAF2)是介导B淋巴细胞表面CD40信号传导的重要因子.目前对TRAF2如何介导CD40核转录因子(NF-κB)信号系统各环节下传还了解不多.本研究利用人B细胞株模型对这方面进行了初步探讨.方法 将人类B淋巴细胞株RAMOS细胞转染融合有黄色荧光素(YFP)的野生型(WT-TRAF2)或功能缺失型(DN-TRAF2)TRAF2质粒,过夜培养后用流式细胞仪分离YFP阳性细胞,然后通过激酶实验、Western blot以及ELISA等方法对NF-κB通路的活化进行包括IκB激酶、IκB磷酸化和降解以及NF-κB的细胞核内转录等多方面的研究.结果 过度表达WT-TRAF2可诱导IκB激酶(IKKα和IKKi/ε)对IκBα(Ser32,36)的磷酸化和降解以及对p65/RelA的磷酸化和p65、p50、c-Rel的核内转录.然而,过度表达DN-TRAF2只抑制p65的核内转录,而不抑制p50和c-Rel.TRAF2也可通过诱导RAMOS B细胞分泌IgM而影响其功能.结论 TRAF2可选择性地激活人B淋巴细胞CD40介导的NF-κB信号传导系统中的重要因子,在B细胞活化分化中起重要作用.
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肿瘤坏死因子受体及其信号转导蛋白TRAF2在喉癌中的表达
目的:探讨肿瘤坏死因子受体(TNFR)和其转导蛋白TRAF2的表达及其与喉鳞状细胞癌生物学行为的关系.方法:利用免疫组织化学及原位末端标记法,对33例喉鳞状细胞癌组织TNFR1、TNFR2和TRAF2的表达及其凋亡指数进行检测.结果:①33例喉鳞状细胞癌中,21例TNFR1表达阳性(63.6%),2例TNFR2表达阳性(6.1%),两者表达染色阳性部位主要集中在细胞膜上,表达程度与喉鳞癌的生物学行为无关(P＞0.05);②33例喉鳞状细胞癌中,23例TRAF2表达阳性(69.7%),其表达部位主要位于细胞浆中.TRAF2的表达程度与喉鳞癌的病理分级有关(P＜0.05),与其他的生物学行为无关(P＞0.05);③TRAF2的表达与TNFR1的表达具有明显的正相关(r=0.637,P＜0.01);④TNFR1、TRAF2表达阳性组织的细胞凋亡指数(3.12±1.47及2.85±1.19)显著低于TNFR1、TRAF2表达阴性组织(4.28±1.34及5.12±0.81)(P＜0.05及P＜0.01).结论:TNFR1信号转导过程中募集TRAF2增强肿瘤细胞抗凋亡能力,与肿瘤的分化和恶性程度有一定关系,缺乏表达TNFR2可能对喉癌的发生发展有一定作用.
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p75TNFR单抗对创伤性关节炎大鼠治疗作用的研究
目的研究激动型p75TNFR单抗D8F2对大鼠创伤性关节炎的治疗作用,并探讨其作用机制.方法雄性SD大鼠40只随机分为假手术对照组,创伤性关节炎模型组,D8F2治疗的低剂量组(1 mg/kg)、中剂量组(3 mg/kg)和高剂量组(10 mg/kg).术后72 h抽取关节液,采用酶联免疫吸附法测定关节液中炎症因子(TNF-α、IL-1β)水平.1周后处死大鼠,采用免疫组化法检测各组大鼠的滑膜内基质金属蛋白酶(MMP1、MMP3)表达.体外培养创伤性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞,加入D8F2进行孵育后,采用免疫共沉淀法检测TRAF2的泛素化; 加入TNF-α和D8F2进行孵育后,采用Western blot法检测细胞核蛋白中p65NF-κB含量.结果大鼠创伤性关节炎模型中炎症因子和基质金属蛋白酶水平较假手术对照组明显升高(P<0.05),D8F2治疗组较模型组炎症因子和基质金属蛋白酶水平下降(P<0.05),且D8F2对炎症因子和基质金属蛋白酶的影响呈剂量依赖性.体外滑膜成纤维细胞实验中发现,D8F2可引起TRAF2的泛素化降解,抑制TNF-α诱导的NF-κB活化.结论激动型p75TNFR单抗对创伤性关节炎有一定的治疗作用,其作用机制可能通过降解TRAF2后抑制NF-κB的活化,在转录水平降低炎症因子和金属蛋白酶的表达来实现的.
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哮喘大鼠TLR1、FasL和TRAF2表达及甲基强的松龙干预作用
目的:探讨TLR1、FasL 和TRAF2在大鼠哮喘炎症机制中的作用,观察甲基强的松龙对其表达的影响.方法:27只SD大鼠,随机分成哮喘模型组、正常对照组和甲基强的松龙组,每组9只,采用流式细胞术检测血淋巴细胞TLR1和FasL表达,免疫组织化学法检测肺组织TRAF2表达.结果:哮喘组血淋巴细胞TLR1表达水平显著低于甲基强的松龙组(P<0.05),正常对照组血淋巴细胞TLR1表达水平分别与哮喘组及甲基强的松龙组比较,差异无统计学意义(P均>0.05).哮喘组和甲基强的松龙组血淋巴细胞FasL表达水平均显著高于正常对照组(P均<0.05),而哮喘组血淋巴细胞FasL表达水平与甲基强的松龙组比较差异无统计学意义(P>0.05).哮喘组TRAF2光密度值显著高于正常对照组和甲基强的松龙组(P均<0.01),甲基强的松龙组TRAF2光密度值与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论:哮喘模型大鼠FasL和TRAF2表达增加,而TLR1无变化;甲基强的松龙能下调TRAF2和提升TLR1水平,从而起到抗炎作用.
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胃腺癌组织中凋亡相关因子TRAF2、 Caspase-8的表达及其临床意义
目的 探讨TRAF2与Caspase-8在胃腺癌组织中的表达及其临床意义,并分析两者之间的相关性.方法 分别采用qRT-PCR及Western blot法检测60例新鲜胃腺癌组织和55例癌旁正常胃黏膜组织中TRAF2、Caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 胃腺癌组织中TRAF2 mRNA和蛋白相对表达量均高于癌旁正常胃黏膜组织;胃腺癌组织中Caspase-8 mRNA及蛋白相对表达量均低于癌旁正常黏膜组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).TRAF2和Caspase-8蛋白在胃腺癌组织中的表达呈负相关(P＜0.05,rs=-0.68),两者mRNA在胃腺癌组织中的表达无明显相关性.胃腺癌组织中TRAF2及Caspase-8蛋白表达均与患者性别、年龄无关(P＞0.05);与分化程度、淋巴结转移、TNM分期及浸润深度有关(P＜0.05).结论 TRAF2因子在胃腺癌中表达上调,而Caspase-8表达下调,两者呈负相关,在胃腺癌中TRAF2因子可能通过下调Caspase-8发挥抗凋亡作用.联合检测TRAF2、Caspase-8有可能作为胃腺癌的预后指标,并有望成为胃腺癌治疗的新靶点.
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柴胡疏肝散对功能性消化不良大鼠内质网应激相关分子IRE1和TRAF2表达的影响
目的 柴胡疏肝散对功能性消化不良(FD)大鼠胃窦组织内质网应激因子肌醇需求酶1(IRE1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)的影响.方法 将30只大鼠随机均分为5组:柴胡疏肝散组、多潘立酮组、生理盐水组、模型组、正常组.正常组大鼠正常饲养,模型组只夹尾不灌药,其余组给予对应的液体灌胃.造模过程中,记录大鼠生活状态的变化.干预1个月后,测定大鼠胃排空率,免疫组织化学法观察各组IRE1、TRAF2蛋白表达情况,用逆转录PCR测定胃窦组织IRE1、TRAF2 mRNA的表达.结果 生理盐水组、模型组胃排空率较正常组降低(P＜0.05),柴胡疏肝散组和多潘立酮组胃排空率较模型组增高(P＜0.05).与正常组大鼠比较,模型组和生理盐水组IRE1、TRAF2蛋白水平明显上调;与模型组对比,各给药组的IRE1、TRAF2蛋白呈下调趋势(P＜0.05).RT-PCR显示柴胡疏肝散组和多潘立酮组的IRE1、TRAF2 mRNA的表达较模型组降低,而模型组IRE1、TRAF2 mRNA的表达比正常组高(P＜0.05).结论 柴胡疏肝散通过抑制内质网应激分子IRE1和TRAF2来促进FD大鼠的胃动力.
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BAFF-BAFFR及信号转导分子参与佐剂性关节炎的免疫反应及芍药苷-6′-O-苯磺酸酯的作用
目的：观察佐剂性关节炎( AA)大鼠炎症不同时期脾脏B淋巴细胞刺激因子( BAFF)及其受体( BAFFR)表达变化以及芍药苷-6′-O-苯磺酸酯( CP-25)对其的影响。方法采用完全弗氏佐剂制备大鼠AA模型,随机分为正常组、AA组、CP-25(25、50、100 mg/kg)组、甲氨蝶呤(0．5 mg/kg)组、白芍总苷(50 mg/kg)组、芍药苷(50 mg/kg)组,造模后第17~31天给药。 ELISA法检测外周血BAFF水平；免疫组织化学法、流式细胞术、Q-PCR和Western blot法检测CP-25对脾脏BAFFR表达的影响；Western blot法检测脾脏肿瘤坏死因子相关因子2(TRAF2)蛋白的表达。结果与正常组比较,炎症反应期( D9)、炎症初期( D16)、炎症高峰期( D23)及炎症缓解期( D30)模型大鼠血清 BAFF 水平和脾脏 BAFFR mRNA及蛋白表达均增加。与 AA 组比较, CP-25(25、50、100 mg/kg)体内给药明显下调AA大鼠脾脏BAFFR mRNA及蛋白表达。体外BAFF刺激后,大鼠脾脏细胞 TRAF2及BAFFR蛋白表达显著增加,CP-25(1×10-6 mol/L)明显降低TRAF2及BAFFR蛋白的表达。结论 CP-25发挥炎症免疫调节作用可能与其抑制AA大鼠BAFFR受体及TRAF2信号分子表达有关。
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丙型肝炎病毒蛋白对TRAF2蛋白信号转导影响的研究
多细胞生物依赖于细胞联系成为统一的整体.生物物种的繁衍,遗传特性的保持,以及生物个体的发生、发展、机体各部分之间和生物体内外环境的统一等所有生命活动都是在细胞信号转导和调控下进行的.从受精卵发育成一个复杂的有生命机体,是在基因的控制下,由细胞信号转导和调控实现的.
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妊娠期糖尿病大鼠胰腺组织中 GRP78、TRAF2、Caspase－12蛋白的表达
目的：探讨内质网应激（ERS）及肿瘤坏死因子受体相关因子2（TRAF2）、Caspase－12与妊娠期糖尿病（GDM）的关系。方法：60只健康雌性 SD 大鼠随机分为4组：高脂高糖饮食受孕组（HP）、高脂高糖饮食未孕组（HV）、普通饮食受孕组（NP）、普通饮食未孕组（NV），分别给予相应处理。测定妊娠末期空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、血脂，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA－IR），采用 HE 染色观察胰腺组织形态学改变，TUNEL 法检测胰岛细胞凋亡指数（AI），免疫组化法测定 GRP78表达，Western blot 法测定 TRAF2、Caspase－12蛋白表达。结果：妊娠和高脂高糖饮食均可使大鼠 FBG、FINS、HOMA－IR 和血脂升高，二者具有协同作用（P ＜0．05）。妊娠第21天时，HP组胰岛出现不同程度萎缩，细胞数量明显减少，可见核固缩和核裂解；妊娠、高脂高糖饮食均可导致大鼠胰腺组织中 GRP78、TRAF2、Caspase－12表达升高，并且二者具有协同效应（P ＜0．05）。结论：妊娠和高脂高糖饮食均参与了ERS，ERS 可能通过 TRAF2－Caspase－12信号通路诱导胰岛细胞凋亡，继而参与 GDM 的发生发展。
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EB病毒LMP1在鼻咽癌细胞系中通过TRAF2活化NF-κB
目的:为了探讨EB病毒(EBV)中LMP1的致瘤机制,对鼻咽癌LMP1激活重要的核转录因子NF-κB的机制进行了研究.方法:①以LMP1阴性的鼻咽癌细胞系HNE2及表达载体(pSG5)的鼻咽癌细胞系HNE2-pSG5为对照,采用免疫共沉淀-Western-blotting方法在稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2-LMP1中证实LMP1与TRAF2是否直接结合形成免疫共沉淀复合物;②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒或不同剂量TRAF2显性负性突变体(TRAF2Δ6～86)表达质粒,以NF-κB报道基因方法确定LMP1是否通过TRAF2活化NF-κB;③将LMP1(1～231)(CTAR2缺失区)或LMP1Δ187～351(CTAR1缺失区)及不同剂量TRAF2Δ6～86瞬时导入HNE2中以证实LMP1CTAR1或CTAR2是否介导了这种效应;④以转染或未转染TRAF2Δ6～86的HNE2-LMP1细胞系为材料,应用免疫共沉淀-Western-blotting方法,确定TRAF2Δ6～86是否竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结果:①在HNE2-LMP1中LMP1与TRAF2形成复合物沉淀,而HNE2-pSG5和HNE2为阴性.②在HNE2-LMP1细胞系导入TRAF2表达质粒,NF-κB活性增高20倍,而导入不同剂量TRAF2Δ6～86表达质粒时,随着剂量增大,NF-κB活性递减.③TRAF2强烈抑制LMP1(1～231)活化NF-κB,而仅部分抑制LMP1Δ187～351活化NF-κB.④TRAF2Δ6～86竞争性抑制TRAF2与LMP1结合.结论:在鼻咽癌中LMP1通过TRAF2而激活NF-κB,其中LMP1的CTAR1区主要介导了这种效应.这为我们进一步从信号传导通路来探讨LMP1的致癌机制提供了新的线索.
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人TRAF2新剪切体的鉴定与表达分析
目的:对TRAF2的新剪切体进行鉴定与表达分析.方法:以人脑库为模板,利用PCR扩增,电泳确定新剪切体的存在.再提取不同细胞与组织的总RNA,逆转录得到cD-NA后作为模板对两种不同剪切体的表达进行比较分析.结果:利用P1与P2引物对从人脑库扩增出1条约1 500 bp的条带,而利用P3与P4引物对则得到2条明显电泳带,通过测序表明其中1条包含TRAF2的第6外显子,另1条缺失了TRAF2的第6外显子.通过对新剪切体TRAF2Δ6与全长剪切体TRAF2的表达量比较表明在T47D中全长剪切体表达占优势；而在Hep3B、GC-1与MCF7中TRAT△6剪切体表达占优势；在HepG2、HBL100、A549与HeLa细胞中未发现两种剪切体的明显表达；在PANCI与SW480中两种剪切体表达量相近.在胎大脑与一级神经胶质瘤中TRAF2Δ6表达占优,而二级与三级神经胶质瘤中则全长剪切体TRAF2表达占优势.结论:人体TRAF2基因除可表达全长TRAF2 mRNA外,还可通过可变剪切表达缺失第6外显子的TRAF2Δ6 mRNA.而且这两种剪切体的表达存在细胞与组织特异性.
