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树突状细胞固有胆碱能系统的研究
近年在淋巴细胞和巨噬细胞等免疫活性细胞中相继发现非神经元性胆碱能系统活性物质,如:烟碱样乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor, nAChR), 胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase, ChAT)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE),从而提出淋巴细胞"固有胆碱能系统"的概念.
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条件性免疫反应对大鼠胶原性关节炎的作用机制研究
目的:在已证明条件免疫反应(CIR)能够有效治疗大鼠胶原性关节炎(CIA)的前期研究基础上,进一步探讨其对大鼠CIA的作用机制.方法:建立大鼠CIA模型.将模型大鼠分为5组:CIR组,以樟脑气味为条件刺激,甲氨喋呤(MTX)+泼尼松(Pred)为非条件刺激,两者结合7次(7天)后可建立条件免疫反应,然后每日再现条件刺激,条件刺激与非条件刺激每周结合1次,共4周;MTX+Pred组,MTX+Pred治疗4周;MTX+Pred减量组,MTX+Pred治疗7天内每天1次,7天后每周1次,共4周;单纯闻樟脑气味组,单纯闻樟脑气味4周;空白对照组,安慰剂治疗4周.用流式细胞技术检测大鼠外周血CD4+T淋巴细胞活化(表达CD71)及表达烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的状态;免疫组织化学检测nAChRα7、ChAT、CD68(巨噬细胞标志)和TNFα在关节滑膜细胞的表达.结果:治疗1周后CIR组大鼠外周血CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7和ChAT明显高于其他各组(P＜0.01);CIR组与MTX+Pred组大鼠,2周后外周血活化的CD4+T淋巴细胞(表达CD71)明显减少(P＜0.01),3周后大鼠关节炎指数明显低于其他各组(P＜0.01);4周后滑膜组织表达CD68及TNFα明显降低(P＜0.05);CIR组大鼠表达nAChRα7和ChAT明显高于其他各组(P＜0.01).结论:以樟脑气味为条件刺激,以MTX和Pred联合免疫抑制作用为非条件刺激,通过强化训练建立的条件免疫抑制反应,可以通过上调免疫细胞上nAChRα7的表达,激活免疫系统的固有胆碱能系统,来抑制免疫细胞的异常过度增生,减少炎性细胞因子的表达,终实现对关节炎的治疗作用.
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成熟DC固有胆碱能系统nAChRα7、ChAT和AChE及其调节的研究
目的:探讨成熟树突状细胞(dendritic cells,DC)是否存在非神经元性胆碱能系统及其调控机制.方法:分离正常小鼠骨髓细胞,体外用细胞因子(IL-4,GM-CSF)诱导、分化为DC,细菌脂多糖(LPS)刺激其成熟.光镜和流式细胞术进行DC鉴定.免疫荧光抗体方法、流式细胞术和RT-PCR方法进行DC烟碱样乙酰胆碱受体亚单位α7(nicotinic acetylcholine receptor subunitα7,nAChRα7)、胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase ,ChAT)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)检测.流式细胞仪检测神经节阻断剂美加明(mecamylamine, MEC)作用于成熟DC 12小时nAChRα7的变化.结果:成熟状态DC表达nAChRα7、ChAT、AChE蛋白和mRNA.nAChRα7蛋白主要分布于细胞膜,ChAT和AChE分布于细胞浆.AChE表达强,与ChAT比较(P＜0.05),nAChRα7表达量次之;MEC作用后nAChRα7蛋白明显下调(P＜0.05).结论:成熟状态DC 存在固有胆碱能系统通路物质,外源性因素(美加明等)可调节该通路.DC可能在胆碱能抗炎通路的免疫调节机制中发挥重要作用.
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迷走神经电刺激对实验性关节炎大鼠T细胞活化的调节机制
目的 探讨迷走神经刺激对实验性关节炎(EA)大鼠T细胞活化的调节作用及其机制.方法 建立大鼠EA模型,将模型大鼠分为迷走神经刺激(VNS)组和假手术组.VNS组在完全清醒状态下予迷走神经电刺激,刺激参数:波宽1.0 ms、电流强度 3.0 mA、频率16 Hz、串长10 s、串隔1.5 min,每日30 min,共4周.用流式细胞及免疫荧光技术检测大鼠外周血CD4+T淋巴细胞活化(表达CD71)及表达烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的状态.结果 治疗1周后VNS组大鼠外周血CD4+T细胞表达nAChRα7、ChAT 明显高于假手术组(Pa＜0.01);2周后VNS组大鼠外周血活化的CD4+T淋巴细胞明显低于假手术组(P＜0.01);治疗3周后VNS组大鼠关节炎指数明显低于假手术组(P＜0.01).结论 电刺激迷走神经可以上调nAChRα7在CD4+T淋巴细胞中的表达,激活免疫系统的固有胆碱能系统,通过抑制免疫细胞异常活化,减少炎性细胞因子合成及分泌,减轻关节炎症,从而实现对EA的治疗作用.
关键词： 迷走神经 电刺激 烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位 固有胆碱能系统 实验性关节炎 -
实验性关节炎大鼠外周血CD4+T细胞固有胆碱能系统研究
目的探索胆碱能系统在关节炎模型大鼠外周血CD4+T淋巴细胞表达状态及其在关节炎中的免疫调节作用.方法Ⅱ型胶原乳剂多点皮内注射,建立胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,根据关节炎严重程度将大鼠分为CIAⅠ和CIAⅡ组.运用流式细胞术和双标记免疫荧光技术检测烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)及胆碱乙酰转移酶(ChAT)在CIA大鼠外周血CD4+T淋巴细胞中的表达,分析其与外周血CD4+T淋巴细胞活化(表达CD71)的关系.结果 CIA大鼠外周血CD71 +/CD4+T淋巴细胞明显多于对照组(P<0.01);CD4+T淋巴细胞表达nAChRα7和ChAT明显低于对照组(P<0.01),CIAⅡ组又明显低于CIA Ⅰ组(P<0.01).nAChRα7+/CD4+与CD71 +/CD4+T淋巴细胞呈负相关关系(P<0.05);ChAT +/CD4+与CD71 +/CD4+T淋巴细胞无相关关系(P>0.05).结论 nAChRα7和ChAT在正常大鼠外周血CD4+T淋巴细胞中表达,并参与免疫细胞活性的抑制性调节,CIA大鼠外周血CD4+T淋巴细胞胆碱能系统功能减弱,胆碱能系统在自身免疫性疾病中起重要调节作用.
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大鼠免疫细胞及器官的固有胆碱能系统
目的探讨大鼠免疫细胞及免疫器官"固有胆碱能系统"的存在状态.方法用免疫荧光双标记、流式细胞技术及免疫组织化学技术,检测烟碱样乙酰胆碱受体α7亚单位(nAChRα7)和胆碱乙酰转移酶(ChAT),乙酰胆碱酯酶(AChE)在健康大鼠外周血CD4+T细胞、腹腔巨噬细胞、关节滑膜巨噬细胞及腹腔淋巴结的表达状态. 结果nAChRα7、ChAT及AChE在大鼠免疫细胞及免疫器官均有阳性表达.腹腔巨噬细胞、淋巴结中的巨噬细胞和关节滑膜巨噬细胞表达丰富,而腹腔淋巴结中的淋巴细胞仅有微弱表达;外周血CD4+细胞有部分表达(nAChRα715.88%±0.753%,ChAT 23.09%±0.671%).结论免疫活性细胞及免疫器官普遍存在"固有胆碱能系统",淋巴细胞与巨噬细胞在机体固有胆碱能系统中扮演不同角色.
