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膜型/可溶型MHC Ⅰ类链相关分子A及其受体NKG2D在骨肉瘤中的表达及其意义
目的 探讨膜型/可溶型MHC Ⅰ类链相关分子A(MICA)及其受体NKG2D在骨肉瘤中的表达及其意义.方法 采用免疫组织化学(LSAB法)检测膜型MICA(mMICA)在43例骨肉瘤组织中的表达;用流式细胞仪检测上述病例中的16例患者外周血淋巴细胞NKG2D的表达;用ELISA法检测患者血清中可溶型MICA(sMICA)的水平.结果 骨肉瘤细胞广泛表达mMICA(37/43),外周血淋巴细胞NKG2D的表达普遍下降,两者的表达水平均与骨肉瘤的分化呈正相关(P＜0.05),与临床分期呈负相关(P＜0.05).检测16例骨肉瘤患者血清中sMICA含量,其中5例升高,且与骨肉瘤的远处转移及临床分期呈正相关(P＜0.05).结论 (1)骨肉瘤细胞表达mMICA,外周血淋巴细胞NKG2D的表达以及血清中sMICA的含量与骨肉瘤的分化及临床分期相关,因此可望作为骨肉瘤病理诊断和估计预后的生物学指标.(2)MICA-NKG2D介导的免疫监视障碍可能促进了骨肉瘤的进展.
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大剂量强的松影响机体MHCⅠ类基因表达的实验研究
目的 研究大剂量糖皮质激素类药物强的松对机体MHC Ⅰ类基因表达的影响.方法 将12只新西兰白兔随机分为两组,实验组8只,对照组4只,实验组每天给予强的松(20 mg/kg)灌喂,共给药30 d.每10d提取外周血单个核细胞总RNA,实验结束后取肝脏、脾脏、肾脏和肺组织少许提取总RNA,RT-PCR法检测MHC Ⅰ类基因mRNA的表达,Western blot法检测MHC Ⅰ类基因蛋白表达.结果 实验组外周血单个核细胞MHC Ⅰ类基因mRNA和蛋白表达在第10天、第20天和第30天均有逐渐降低的趋势.与对照组比较,实验组外周血单个核细胞MHC Ⅰ类基因mRNA和蛋白表达在第20天和第30天明显降低(P＜ 0.05,P＜0.01),且mRNA表达由用药前的0.23±0.06降到用药后第20天的0.13±0.05和第30天的0.06±0.02,蛋白表达由用药前的2.55±0.24降到用药后第20天的1.16±0.15和第30天的0.76±0.31.在用药第30天实验结束后,机体各脏器(包括肝脏、脾脏、肾脏和肺脏)MHC Ⅰ类基因mRNA和蛋白表达均较对照组降低(P＜ 0.05,P＜ 0.01).结论 大剂量强的松能降低机体外周血单个核细胞、肝脏、脾脏、肾脏和肺组织的MHC Ⅰ类基因mRNA和蛋白表达,可能诱发机体肿瘤的发生.
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可手术肺腺癌主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A和B的表达及临床意义
目的 检测可手术肺腺癌组织中主要组织相容性复合体-Ⅰ类分子链相关蛋白A和B(MICA/B蛋白)的表达,探讨其临床意义.方法 回顾分析郑州人民医院2002年1月至于2003年12月诊治的可手术肺腺癌100例.免疫组织化学染色法检测其MICA/B蛋白的表达,按照免疫组织化学染色评分标准≥5分者为高表达组,＜5分者为低表达组.运用x2检验分析MICA/B蛋白与患者临床病理特征的关系.Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验计算MICA/B蛋白表达与可手术肺腺癌总生存期之间的关系.采用Cox回归模型分析各个协变量单一及联合效应.结果 MICA/B蛋白在可手术肺腺癌组织中的高表达率为38％ (38/100).MICA/B蛋白表达在EGFR基因突变组中的高表达率显著高于EGFR基因野生组(93.8％比11.8％,P＜0.001),而在患者不同年龄、性别、TNM分期、T分期、组织学分级及淋巴结转移之间差异均无统计学意义.MICA/B蛋白高表达组的总生存期显著短于低表达组(10.4比28.9个月,P=0.005).结论 可手术肺腺癌组织中MICA/B蛋白高表达,与EGFR基因突变型及总生存期有密切关系,有可能是可手术肺腺癌患者预后不良的指标.
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小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体的构建及表达研究
本研究应用分子生物学技术,构建小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP-β2mAN,经过酶切、PGR鉴定,以及序列分析证实克隆的正确性.然后用脂质体转染NIH3T3细胞,经过RT-PCR及Western blot检测,观察重组质粒对细胞β2m mRNA和蛋白表达的影响,同时在荧光显微镜下直接观察细胞转染的结果.结果证明pEGFP-β2mAN已成功导入NIH3T3细胞中,且有效表达,在荧光显微镜下可见梭形绿色荧光细胞;与同步转染的小鼠β2m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β2mSN、pcDNA3-β2mAN的转染结果一起进行分析,转染pcDNA3-β2mSN细胞的β2m mRNA和蛋白表达水平升高,而转染pcD-NA3-β2mAN和pEGFP-β2mAN的细胞β2m mRNA和蛋白表达水平降低.小鼠β2m反义核酸重组荧光蛋白表达载体pEGFP-β2mAN的转染结果显示:它不但可以降低NIH3T3细胞β2m基因的表达,而且为观察脂质体转染效果提供了直观、即时的方法.
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寻常性银屑病患者HLAⅠ类分子A、B、C位点甲基化的研究
目的探讨寻常性银屑病患者表皮中HLA Ⅰ类分子重链A、B、C位点启动子区甲基化与疾病的关系。方法 甲基化特异性PCR技术检测46例寻常性银屑病患者皮损和非皮损表皮中的HLAⅠ类分子重链A、B、C位点启动子区域CpG岛的甲基化率，与28例正常人皮肤组织进行对照研究。PASI评分评价银屑病患者皮损的严重程度。结果 在银屑病患者皮损、非皮损和正常人皮肤组织中，重链A位点均未检测到发生甲基化，B位点的甲基化率分别是4.35％( 2/46)、4.35％( 2/46)和0，C位点的甲基化率分别是4.35％ (2/46)、21.74％( 10/46)和0。3组样本比较，C位点启动子区甲基化率非皮损明显高于皮损和正常人皮肤组织，但与病情严重程度无关；HLA Ⅰ类分子重链A和B位点差异均无统计学意义。结论 寻常性银屑病患者HLA Ⅰ类分子C位点启动子区甲基化异常。
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抗原处理相关转运体和MHC-Ⅰ类分子在黑素瘤细胞株的表达
目的 检测抗原处理相关转运体(TAP)及主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ类分子在恶性黑素瘤细胞系中的表达.方法 采用Western印迹法、RT-PCR和流式细胞仪分别检测TAP蛋白、mRNA和MHC-Ⅰ类分子在3株恶性黑素瘤细胞系(A375、A875、KZ28)中的表达,并与正常黑素细胞做对照.结果 与正常黑素细胞相比,TAP mRNA表达在A375、A875、KZ28细胞系中均显著降低,t值分别为5.89,4.45和4.57,P值均<0.01;TAP蛋白的表达均明显降低,t值分别为5.46,4.32和4.67,P值均<0.01.在A375细胞中TAP mRNA和蛋白下降显著.MHC-Ⅰ类分子也具有相同的趋势,t值分别为6.16,5.22和5.61,P值均<0.01.结论 TAP蛋白及其mRNA在A375、A875、KZ28细胞系中表达显著降低,可能为恶性黑素瘤细胞逃逸机体免疫监视的一条途径.
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系统性红斑狼疮与HLA-A等位基因相关性的研究
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)的发生与HLA-A等位基因间的关系.方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,对106例SLE患者和122例健康人进行HLA-A等位基因的检测.结果共发现19种等位基因,SLE患者中检出18种,对照组中检出15种.其中A*11等位基因与SLE呈强正相关(RR=2.4380,EF=0.1502,X2=12.2440,P=0.0005,Pc=0.0095);A*01和A*24等位基因尽管P值均＜0.05(分别为0.0498和0.0124),但Pc值都＞0.05(分别为0.9462和0.2356).结论A*11可能是云南汉族SLE的易感等位基因或与易感基因相连锁.
关键词： 红斑狼疮 系统性 基因 MHC Ⅰ类 聚合酶链反应-序列特异性引物 -
NLRC5在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的作用机制
弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是我国常见的恶性淋巴瘤,大多首发自淋巴结.研究发现,核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)家族成员NLRC5在淋巴系细胞中表达明显,其可能是淋巴细胞肿瘤发生的重要基础.并且NLRC5能阻断信号传导途径中的核心组分核转录因子-κB(NF-κB),影响肿瘤发生发展.同时NF-κB的持续活化是DLBCL细胞生存的必要条件.因此,NLRC5很可能具有抑制过度炎症反应,进而抑制DLBCL的功能,其有望成为DLBCL免疫疗法的新靶点.
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中国南方汉族人群主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因A基因多态性研究
目的 探讨中国南方汉族人群中主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MIC)A等位基因多态性及分布特征.方法 选择2014年7月1日至12月31日于深圳市血液中心无偿献血的250例献血者为研究对象.采用聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)对献血者MICA基因第2～4外显子进行序列测定,并采用统计学方法比较中国南方汉族人群与世界不同地区人群等位基因频率及遗传多态性结果.本研究遵循的程序符合深圳市血液中心人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员批准,征得受试对象知情同意,并于采血前与之签订相关伦理学文件.结果 本组献血者中检出MICA等位基因为21个,基因型为45种.MICA基因多态性以MICA* 00801等位基因频率高,占27.8％,其次为MICA* 010(19.8％),MICA* 00201(16.2％),MICA* 019(11.0％).MICA基因型以MICA* 00801-MICA* 010频率高,占10.0％.本组献血者基因分布与韩国、泰国、奥地利和摩洛哥人群比较结果显示,MICA* 045等位基因只存在于中国南方汉族人群中.结论 中国南方汉族人群的MICA等位基因分布具有高度的遗传多态性,且有其自身分布特点.本研究获得的中国南方汉族人群较完整的MICA等位基因分布数据,将为人类学、MICA疾病相关性等研究提供遗传学参考数据.
