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以分泌型荧光素酶为报告基因的单轮感染流感病毒的构建
目的：构建以分泌型荧光素酶为报告基因的单轮感染流感病毒用于药物作用机制的快速鉴别。方法通过使用分泌型荧光素酶（Gluc）序列替代流感病毒 HA基因，并利用表达质粒反式提供 HA蛋白，借助甲型流感病毒 WSN反向遗传学产毒系统，构建带有报告系统的单轮感染流感病毒。结果首轮接种单轮感染流感病毒的细胞上清中可以检测到 Gluc信号，但检测不到病毒滴度，而在第二轮感染的细胞上清中检测不到 Gluc信号，表明该单轮感染病毒在感染过程中能够分泌 Gluc蛋白并且不能产生具有感染性的子代病毒颗粒。通过对复制动力学和时相的观察，明确了单轮感染病毒的生活周期，同时结合4种已知作用机制的抗流感药物的阻断实验结果，证明该系统可以用来快速、有效地鉴别药物的作用机制。结论成功构建了以分泌型荧光素酶为报告基因的单轮感染流感病毒，该系统可以用于抗病毒药物作用机制的快速鉴别。
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妊娠期妇女甲型H_1N_1流感15例临床分析
甲型H_1N_1流感是一种由新型流感病毒感染所致的急性呼吸道传染病,传染性强,病情进展迅速.妊娠妇女作为甲型H_1N_1流感重症病例的高危人群,更应引起重视.为尽快了解其相关特性,总结防治经验,笔者对温州市第二人民医院收治的15例甲型H_1N_1流感妊娠期妇女进行了分析.
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A型流感病毒HA(H1N1)基因真核表达载体的构建及序列分析
[目的]构建A型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因真核表达载体,研究其作为DNA疫苗的免疫效果.[方法]从流感病人体内分离流感病毒(A/Guangdong/376/2001/H1N1),提取RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增HA基因,先将其克隆到pMD18TVector,进行序列测定和分析;然后将HA基因亚克隆到真核表达载体(pCI-neo),进行鉴定.[结果]获得一个核苷酸长度为1698bp的基因,编码565个氨基酸;同源性比较结果表明:和A/HongKong/1131/98(GenBank/NCBI:AF386775)有98%同源,序列分析表明有10个氨基酸出现变异;酶切和序列测定表明HA基因正确插入pCI-neo载体(HA-pCIN).[结论]HA基因真核表达载体的成功构建,可以进一步研究其免疫功能.
