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凝血因子ⅩⅢA基因Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变致凝血因子ⅩⅢ缺陷的分子机制
本研究以凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)基因突变为研究的切入点,从分子水平研究这些突变致病的机制.构建野生型FⅩⅢA重组表达质粒,用定点突变方法获得含有2种突变(Arg77Cys及Arg174stop)的FⅩⅢA重组表达质粒.分别将上述重组质粒通过脂质体介导的基因转移方法转染到COS-7细胞表达;用发色底物法检测转染细胞中FⅩⅢ活性,荧光定量RT-PCR、Western blot及酶联免疫吸附实验(ELISA)检测转染细胞中人FⅩⅢA的RNA表达水平和蛋白表达量.结果表明:含有2种突变( Arg77Cys及Arg174 stop)的FⅩⅢA重组质粒转染组FⅩⅢA mRNA 相对表达丰度分别为0.82 +0.21和0.76±0.17,与野生型FⅩⅢA重组质粒转染组(1.06±0.51)比较没有显著性差异(p>0.05).野生型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物中FⅩⅢ活性为(61.6±30.4)%,浓缩的细胞培养上清液中FⅩⅢ活性为(24.0±2.9)%,而2种突变型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物及培养上清液FⅩⅢ活性明显减低.转染细胞裂解物的Westem blot分析显示,含Arg77Cys错义突变的FⅩⅢA重组蛋白在培养细胞内含量明显减低,仅见1条微弱的条带.ELISA证实,野生型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物中FⅩⅢA:Ag量为(32.8±14.5)%,浓缩的细胞培养上清液中FⅩⅢ:Ag量为(13.2±2.3)%.而2种突变型FⅩⅢA重组质粒转染细胞裂解物及培养上清液中FⅩⅢA:Ag水平极度减低,低于ELISA检测低限.结论:FⅩⅢA Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变未导致FⅩⅢA mRNA水平的显著减低,但都可以导致FⅩⅢA蛋白水平的表达异常.在本研究先天性FⅩⅢ缺陷症患者中FⅩⅢA重度缺乏可能是FⅩⅢA Arg77Cys错义突变和Arg174stop无义突变的共同作用所致.
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髓母细胞瘤形成相关分子病理机制的研究进展
髓母细胞瘤是儿童颅内常见的恶性肿瘤之一,约占儿童脑肿瘤的18.5%,其在儿童中的发病率约为一百万分之一.随着手术技巧的成熟及放化疗策略的完善,其死亡率和致残率已明显下降,患者5年生存率可达70%以上.尽管如此,由术后放化疗引起的神经系统的损害例如严重的认知障碍、生长发育迟缓等一系列并发症仍旧给患者带来了无尽的折磨.
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老年冠心病及其共病的分子病理机制研究进展
老年冠心病是老年人共病中常见的疾病,特别是其与糖尿病的共病,病情复杂和严重.两者的病因存在“共同土壤”,即相同的发病机制.本文对近年来老年冠心病和糖尿病在胰岛素抵抗、慢性炎症、氧化应激和分子遗传学病因方面的研究结果进行了综述.
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中国人核黄素反应性脂质沉积性肌病多是由 ETFDH基因突变所致
通过对一组中国脂质沉积性肌病(lipid storage myopathy,LSM)患者的研究来探讨该病的遗传代谢特征及其分子病理机制,这些LSM患者单用核黄素(维生素B2)治疗后肌无力症状明显改善(即核黄素反应性LSM).该论文于2009年9月15日由Journal of Neurology,Neurosurgery,and Psychiatry在线出版,并于2010年发表于该杂志上[1].
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动静脉内瘘血管内膜增生的细胞和分子病理机制
动静脉内瘘(AVF)是绝大多数维持性血液透析患者首选的血管通路,AVF失功是维持性血液透析患者住院的重要原因.本文就AVF失功的主要病理基础——血管内膜增生的细胞和分子病理机制研究进展做一综述.
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原发性肾小球肾炎患者肾组织白细胞介素13表达及其作用
目的:探讨不同病理类型的原发性肾小球肾炎(PGN)患者肾组织白细胞介素13(IL-13)的表达,进一步了解PGN的分子病理机制,为临床治疗探索一种新的方法.方法:应用免疫组化ABC技术检测72例原发性肾小球肾炎(PGN)患者和12例正常对照组肾组织IL-13的表达,对比不同病理类型的PGN患者肾组织IL-13的表达.结果:正常对照组肾小管间质区少量表达IL-13,PGN患者肾小管上皮细胞和间质细胞均见较多、较强的IL-13表达,且随着肾小管间质病变由轻到重损害的加重,PGN患者肾小管间质区IL-13表达增加.PGN患者肾小管间质区IL-13表达与血清肌酐浓度(Scr)呈正相关(r=0.6667,P<0.001),与Ccr呈负相关(r=0.5413,P<0.001).正常对照组肾小球区无IL-13表达,增殖性肾小球肾炎(MsPGN、MsCGN、ECPGN)患者肾小球区少量表达IL-13,而非增殖性肾小球肾炎(FSGS、MCD、MN)患者肾小球区无表达.结论:IL-13可能参与PGN的免疫炎症过程,肾小管间质区IL-13表达与PGN患者肾功能及肾小管间质损害程度密切相关.