首页 > 文献资料
-
甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine对K562细胞SHP-1基因表达及细胞增殖与凋亡的影响
本研究探讨5-氮杂胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对K562细胞中抑癌基因SHP-1的转录调控作用及对K562细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据.采用MSP方法检测SHP-1基因甲基化状态,MTT法检测不同剂量(0.5,1,2 μmol/L)5-aza-CdR作用K562细胞1,3,5天时对K562细胞存活率的影响,流式细胞术(FCM)分析5-aza-CdR作用1,3,5天时细胞周期及凋亡率的变化,实时定量PCR(FQ-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后SHP-1 mRNA及蛋白表达水平、P-STAT5蛋白表达变化.结果表明,K562细胞中存在SHP-1基因的甲基化,5-aza-CdR作用使K562细胞中SHP-1 mRNA和蛋白重新表达,而p-JAK2蛋白表达随之呈下降趋势;5-aza-CdR明显抑制K562细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关.JAK2特异性抑制剂AG490明显抑制K562细胞增殖;5-aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,且作用也呈时间依赖性,用药1,3,5天细胞凋亡率分别为9.3%,24.2%,37.7%.2 μmol/L的5-aza-CAR处理24小时后,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期.5-aza-CdR作用1,3,5天时G2/M期细胞比例分别为30.7%,23.4%,19.3%.结论:特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使K562细胞中沉默的SHP-1基因重新表达,并可能通过JAK/STAT路径活化抑制白血病细胞增殖并诱导其凋亡.
-
5-氮杂脱氧胞苷与曲古抑菌素A对膀胱癌细胞株ALDH1a2基因表达及凋亡的影响
目的 探讨5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dC)与曲古抑菌素A(TSA)对膀胱癌细胞中抑癌基因ALDH1a2启动子甲基化状态和基因表达及细胞凋亡的影响.方法 使用5-Aza-dC、TSA处理RT-4、253J、5637、BIU-87和T24后,应用甲基化特异性PCR(MSP)法、逆转录PCR(RT-PCR)法、Western blot法分别检测这5株膀胱癌细胞经药物干预前后ALDH1a2甲基化状态及基因表达情况,应用流式细胞学检测干预前后5株膀胱癌细胞株的凋亡情况.结果 在5株膀胱癌细胞中,ALDH1a2基因表现为高甲基化表达受到抑制,TSA不影响甲基化状态,5-Aza-dC可逆转高甲基化状态并恢复基因表达,联合给予5-Aza-dC和TSA的作用和单独给予5-Aza-dC相似;TSA和5-Aza-dC均可诱导膀胱癌细胞株凋亡,早期凋亡是膀胱癌细胞株死亡的主要方式,5-Aza-dC和TSA有协同作用,3个实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在5株膀胱癌细胞株中,ALDH1a2基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因;5-Aza-dC单独作用和5-Aza-dC及TSA联合应用效果相似,均能恢复基因重新表达进而诱导膀胱癌细胞株的早期凋亡.
-
5-氮杂脱氧胞苷对MCF7细胞中MEG3基因表达及细胞增殖活性的影响
背景与目的:MEG3(maternal expressed gene 3)基因是一类印记基因,其转录缺失可能诱导多种肿瘤的发生发展.本研究通过检测乳腺癌MCF7细胞中MEG3基因mRNA的转录情况及细胞增殖活性,以探讨DNA甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷对MEG3基因转录的诱导作用及其对细胞增殖活性的影响.方法:以浓度为5 μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷分别作用MCF7细胞0、2、4和6 d后,用RT-PCR及Northern blot技术检测MEG3基因mRNA的转录水平;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性的变化.结果:与未处理组相比,5-氮杂脱氧胞苷分别作用2、4和6 d后,MCF7细胞中MEG3基因mRNA表达显著增强,并呈现时间依赖性(P<0.01);MTT检测结果显示MCF7细胞的增殖活性受到抑制.与未处理组相比,药物作用2、4和6 d的细胞增殖抑制率分别为(23.16±3.93)%、(49.39±2.38)%和(64.73±2.24)%,差异有显著性(P<0.01).结论:MEG3基因可能具有抑制MCF7细胞生长的作用,其基因转录下调与DNA甲基化有关,可能参与了乳腺癌的发病机制.
-
p53在乳腺癌中的表达意义及5-氮杂脱氧胞苷对 p53的调控作用
目的： p53基因作为重要的抑癌基因，具有抑制肿瘤细胞增长、阻滞细胞周期及促进凋亡的作用，然而其在乳腺癌发生发展中的机制还有待进一步研究。文中研究p53在乳腺癌中的表达及其与临床病理参数的关系，进一步研究5-氮杂脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine ）在乳腺癌细胞中对p53表达调控的影响。方法采用免疫组化法检测组织芯片中80例乳腺癌组织及其癌旁正常组织中p53蛋白的表达情况，进一步用半定量RT-PCR及Western blot 法检测乳腺癌细胞中p53的表达及5-氮杂脱氧胞苷对p53表达的影响。结果①p53在乳腺癌组织中的阳性表达率为41．25％，明显高于正常乳腺组织（22．5％），差异有统计学意义（P＜0．01）。②p53的表达与乳腺癌病理分级、乳腺癌患者的年龄、临床分期及淋巴结转移差异无统计学意义（ P＞0．05）。③在乳腺癌细胞MCF-7中，p53 mRNA及蛋白表达均呈低表达状态；在5-氮杂脱氧胞苷作用后，其表达均上调。结论 p53在乳腺癌组织中高表达，可能在乳腺癌的发生发展中起重要的作用。5-氮杂脱氧胞苷可诱导p53高表达，使其发挥抑癌基因作用，从而为治疗p53低表达乳腺癌药物的研发提供依据。
-
5-氮杂脱氧胞苷对非小细胞肺癌细胞A549中抑癌基因FHIT表达的影响
DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式之一,启动子CpG的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[1].脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)是第一个将脆性位点和肿瘤联系起来的抑癌基因[2],并且FHIT基因甲基化异常是肿瘤发生和发展过程中的早期事件.去甲基化治疗已成为一种新的抑制细胞增殖和诱导细胞分化的肿瘤治疗方法.5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dC)是一种脱甲基化试剂,实验采用5-Aza-dC处理非小细胞肺癌细胞株A549细胞,观察其FHIT基因甲基化改变及对A549生长的影响.
关键词： 5-氮杂脱氧胞苷 肺肿瘤 FHIT基因 甲基化 甲基化特异性聚合酶链式反应 -
5-氮杂脱氧胞苷联合孕激素对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B生长的影响
目的:研究5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR,ADC)联合孕激素对孕激素受体B亚型(PR-B)缺失的子宫内膜癌细胞株HEC-1-B增殖、凋亡、细胞周期分布的影响及其机制.方法:5-Aza-CdR、醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate,MPA)单独及联合作用于HEC-1-B细胞后,运用MTT比色法及流式细胞仪分别检测各组细胞的生长、凋亡及细胞周期分布情况；采用RT-PCR技术、甲基化特异性PCR(MSP)分别检测HEC-1-B细胞中PR-B mRNA表达及PR-B基因启动子的甲基化状态.结果:(1)5-Aza-CdR对HEC-1-B细胞的生长抑制作用呈剂量和时间依赖性,联合用药组的抑制作用更为明显（P＜0.01）,且使细胞阻滞在G1期；(2)5-Aza-CdR以剂量依赖的方式上调PR-B mRNA的表达(P＜0.01)；(3)5-Aza-CdR可以抑制PR-B基因启动子的甲基化状态.结论:(1)5-Aza-CdR联合孕激素能明显抑制HEC -1-B细胞增殖,促进其凋亡,二者联用可加强MPA对细胞周期的阻滞作用；(2)5-Aza-CdR能逆转PR-B基因甲基化而使其恢复表达,从而增强孕激素的作用.
-
5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制探讨
目的：观察5-氮杂脱氧胞苷对胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、5、10μmol/L)5-氮杂脱氧胞苷作用于 U87细胞,比较细胞增殖抑制率和 Bcl-2腺病毒E1B19kDa相关蛋白3 mRNA(BNIP3 mRNA)；将5μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷作用于U87细胞0、1、2、3、4、5、6 d,比较细胞增殖抑制率及 BNIP3 mRNA。将5μmol/L 5-氮杂脱氧胞苷作用于 U87细胞4 d,并分别添加和不添加Caspase抑制剂Boc-D-FMK,测算细胞增殖抑制率。结果5-氮杂脱氧胞苷对U87细胞增殖有抑制作用,且呈剂量及时间依赖性(P均<0.05),抑制作用强的浓度为5μmol/L,强的时间点为4 d；Boc-D-FMK并不能抑制由BNIP3所诱导的细胞凋亡,P>0.05。结论5-氮杂脱氧胞苷可抑制U87细胞增殖,其机制可能与BNIP3 mRNA表达上调有关。
-
p16基因CpG岛过甲基化与其转录失活的探讨
目的探讨肿瘤细胞p16基因CpG岛过甲基化对其表达的影响.方法利用甲基化特异性PCR(MSP)检测了4种肿瘤细胞(SPC-A1、BIU-87、T24、HepG2)的甲基化状态,并通过RT-PCR检测该4种肿瘤细胞在用去甲基化试剂5-氮杂脱氧胞苷( 5-Aza-CdR)处理前后表达程度的差异.结果除BIU-87外,其它3种肿瘤细胞p16基因都有不同程度的甲基化,用5-Aza-CdR处理后比处理前p16 mRNA的表达有显著升高.结论 p16基因CpG岛的过甲基化可导致转录表达失活,与肿瘤的发生、发展关系密切.
-
5-氮杂脱氧胞苷对肝癌细胞HepG2中抑癌基因FHIT表达的影响
背景与目的:肝癌细胞中由于FHIT基因过度甲基化而导致其表达降低.本实验应用甲基化酶抑制剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2'deoxycytidine,5-Aza-dC)作用肝癌细胞株HepG2,观察用药后肝癌细胞中FHIT mRNA和蛋白表达的变化,并观察5-Aza-dC对细胞增殖的影响.方法:以5-Aza-dC作用HepG2细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测HepG2细胞中FHIT甲基化变化;采用RT-PCR检测FHIT mRNA的表达;采用细胞免疫组织化学染色和Western blot方法检测FHIT蛋白表达,MTT法检测HepG2细胞增殖情况.结果:5-Aza-dC处理前,HepG2细胞FHIT基凶呈甲基化状态,mRNA及蛋白表达缺失;经5-Aza-dC作用后,MSP显示HepG2细胞FHIT基因甲基化逆转;经1.0 μmol/L、2.0 μmol/L及4.0 μmol/L的5-Aza-dC作用48 h后,FHIT基因mRNA扩增出产物的吸光度值分别为0.80±0.32、1.41±0.54和1.51±0.61,Western blot检测产物积分灰度值分别为0.33±0.20、1.00±0.26和1.12±0.38:当药物浓度达到1.0μmol/L时出现了对HepG2细胞增殖的抑制作用.结论:5-Aza-dC能明显逆转HepG2细胞的FHIT基因异常甲基化,激活因高甲基化所致基因沉默的再转录,诱导该基因的表达;同时抑制细胞增殖.
关键词： 5-氮杂脱氧胞苷 肝肿瘤 FHIT基因 甲基化 甲基化特异性聚合酶链式反应
