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流式细胞术检测骨髓增生异常综合征细胞中RAP1GAP表达及其临床相关性
以往应用基因芯片对骨髓增生异常综合征(MDS)患者细胞的基因表达谱的研究发现,RAS蛋白超家族成员RAP1GAP转录水平被上调,并在MDS患者大量病例中应用定量RT-PCR得到证实.本研究探讨MDS细胞中RAPIGAP的表达及其与临床的相关性.应用流式细胞术检测19例MDS患者骨髓细胞内RAP1GAP的表达,并与非恶性血液病以及急性白血病患者骨髓细胞中RAP1GAP的表达进行比较.对RAP1GAP表达水平与MDS患者的血红蛋白水平,白细胞计数,血小板计数,骨髓细胞中原始细胞的百分数以及IPSS危险积分等临床指标之间的相关性进行了分析.结果发现,RAP1GAP的表达在MDS患者骨髓细胞中显著高于非恶性血液病或急性白血病的细胞内的表达(8.420 ±8.365%比2.974±4.750%或2.256±4.239%).在MDS患者中,MDS-RA的RAP1GAP表达显著高于MDS-RAEB内的表达(11.637 ±9.067%比4.368±4.646%).然而,在检测的MDS患者中RAP1GAP的表达水平与上述临床指标无确切的相关性.结论:RAP1GAP在MDS中的表达明显增高,RAP1GAP表达水平与临床实验室血液学参数及IPSS积分之间无相关性.RAP1GAP表达在MDS进展至AML中的作用及其临床意义值得进一步探讨.
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Rap1GAP及其启动子甲基化与肿瘤的关系
近年来，抑癌基因Rap1GAP研究比较热门，研究发现Rap1GAP与肿瘤关系密切，在乳腺癌、结直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、宫颈癌等多种肿瘤中表达减低，并与疾病的发生、发展存在一定关系。作为抑癌基因下调的重要机制，Rap1GAP启动子甲基化越来越受到重视，其研究取得了一些进展，本文就Rap1GAP及其启动子甲基化与肿瘤的关系的研究进展作一综述。
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Rap1GAP与宫颈癌关系的研究进展
随着分子生物学技术的飞速发展,人们越来越认识到抑癌基因在肿瘤的发生发展过程中具有重要作用.Rap1GAP 家族基因是新近发现的与肿瘤抑制相关的基因,Rap1GAP 蛋白在宫颈癌中表达明显下调,且与HPV 感染相关.Rap1GAP 的失活可能会导致宫颈癌的发生.可作为一种肿瘤标志物用于宫颈癌及癌前病变的临床筛查及诊断.
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HPV16 E6对HeLa细胞中Rap1 GAP蛋白水平下调的研究
目的 探讨HPV16 E6对细胞中Rap1GAP蛋白水平的影响,为阐明宫颈癌发生发展的分子机制提供实验依据.本研究组前期实验显示,宫颈癌石蜡切片组织中Rap1GAP蛋白水平下降,且与高危型HPV16/18感染相关.本文将进一步探讨HPV16 E6是否导致Rap1 GAP蛋白下调的原因.方法 通过将HPV16 E6基因插入pGEX-KG的BamHI和HindⅢ酶切位点构建GST标记的HPV E6质粒,采用脂质体转染法将其转染入HeLa细胞中,Western blot方法观察GST-tagged-HPV16 E6在HeLa细胞中的表达,并观察其对HeLa细胞中内源性Rap1GAP蛋白水平的影响.结果 测序表明成功构建GST标记的HPV16 E6质粒;Western blot检测表明HPV16 E6在HeLa细胞中成功表达;并且发现HeLa细胞中过表达HPV16 E6后,Rap1GAP蛋白相对含量(0.602±0.205)明显低于未转染组(1.130 ±0.163),差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 HPV16 E6下调Rap1GAP蛋白水平.
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宫颈癌组织中Rap1GAP蛋白表达及其与HPV感染的相关性
[目的]探讨Rap1GAP蛋白在宫颈癌组织中的表达变化以及其与HPV感染之间的关系.[方法]免疫组化方法检测20例宫颈癌与20例正常宫颈组织 HPV感染和Rap1GAP蛋白表达情况.[结果]HPV检出阳性率在正常宫颈组织和宫颈癌中分别为20%与75%,宫颈癌组明显高于正常宫颈组(P<0.05).宫颈癌组的Rap1GAP蛋白表达阳性率为15%、弱阳性率为15%,二者均明显低于正常宫颈组(阳性率,55%和弱阳性率,45%)(P均<0.05).宫颈癌组织中,HPV阳性组Rap1GAP 蛋白缺失率为80%,明显高于HPV阴性组的缺失率40%(P<0.05),且二者之间呈正相关(r=0.553,P<0.05).[结论]宫颈癌组织Rap1GAP蛋白表达下调或缺失可能与HPV感染有关.
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Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响
目的 观察Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内定位的影响.方法 对绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP野生体编码第90和99位氨基酸的核苷酸进行定点突变,制备绿色荧光蛋白标记的Rap1GAP二聚体缺失突变体M90和M99.将Rap1GAP野生体及二聚体缺失突变体单独或者分别与活化型Gα共转染HEK293细胞,在荧光显微镜下观察野生体和二聚体缺失突变体在细胞内的分布情况.结果 野生型Rap1GAP与二聚体缺失突变体Rap1GAP分别单独转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均弥漫分布胞质内;当野生型与突变体Rap1GAP分别与活化型Gα共转染HEK293细胞时,野生型和突变体Rap1GAP均主要分布在细胞膜上.结论 Rap1GAP二聚体的形成对其在细胞内的定位没有影响.
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Rap1GAP对胃癌细胞侵袭、迁移及上皮细胞-间充质转化的作用
[目的]分析Rap1GAP对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.[方法]运用qRT-PCR及Western blo法检测Rap1GAP在胃癌细胞中的表达.Rap1GAP载体慢病毒感染MGC803及MKN-45两个细胞系,构建出Rap1GAP高表达胃癌细胞系.MTT、细胞克隆形成实验、Transwell实验及划痕实验检测Rap1GAP对胃癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响.运用qRT-PCR及Western blot法检测上皮化标志物E-cadherin、Snail和N-cadhefin的表达.[结果]正常细胞株GES-1中Rap1GAP表达量为1.02±0.08,而SGC7901、AGS、MGC803、HGC-27、MKN-45中表达量分别为0.66±0.10、0.51±0.10、0.20±0.08、0.31 ±0.07、0.26±0.11(P均＜0.01).体外实验显示Rap1 GAP能抑制胃癌细胞的增殖(酶标仪检测波长为570 nm时的吸光度)、侵袭及迁移能力;且Rap1GAP能抑制胃癌细胞的EMT.[结论]Rap1GAP在胃癌进展中起到抑癌作用,具有成为胃癌治疗靶点的潜力.
