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沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响
目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转手抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响.方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化.结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415 ±0.027),其差异具有统计学意义(P＜0.01).转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低.结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态.
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砷剂诱导多发性骨髓瘤细胞socs-1基因去甲基化作用的研究
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)对人多发性骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226细胞内socs-1基因甲基化状态的影响.用MTT法观察As2O3对骨髓瘤细胞增殖情况的影响,采用甲基特异性PCR法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226 socs-1基因的甲基化状态,以实时定量PCR技术定量检测细胞株给药前后socs-1基因mRNA的表达变化,流式细胞技术检测As2O3诱导的骨髓瘤细胞的凋亡情况.结果表明:人骨髓瘤细胞株U266、RPMI8226均存在不同程度的socs-1基因CpC岛甲基化,socs-1基因不表达的现象.As2O3作用72小时后socs-1基因甲基化程度明显减弱或消失,socs-1基因在mRNA水平上表达明显增强,与各野生型细胞株相比,差异具有显著性p＜0.05),且细胞生长抑制明显,早期、晚期细胞凋亡比率明显升高,并呈现剂量依赖性.结论:As2O3可诱导socs-1基因甲基化状态的改变,使基因表达上调,恢复其活性,这为进一步阐明As2O3诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制和As2O3治疗多发性骨髓瘤的可能机制提供新的思路和新的研究方向.
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羧甲基茯苓多糖对人外周血源性树突状细胞SOCS-1基因甲基化及体外成熟的影响
目的：通过检测羧甲基茯苓多糖（ carboxymethytl pachymaram ，CMP）处理后人外周血源性树突状细胞（dendritic cells，DC）中细胞因子信号转导抑制分子-1（SOCS-1）基因甲基化水平及表达情况，探讨 CMP 对 DC 体外成熟的影响。方法通过重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和IL-4体外诱导人外周血源性单核细胞源DC，并促进成熟，分别加入不同浓度的CMP （终浓度为10、50、100 mg/L），应用甲基化特异性PCR（ methylation specific PCR ，MSP）和real-time PCR法分别分析SOCS-1基因甲基化水平及表达情况；应用流式细胞术、混合淋巴细胞反应（ MLR）和ELISA分别检测DC的表面标志、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌的变化。结果经CMP刺激后DC中SOCS-1基因甲基化水平明显增高，SOCS-1基因表达水平显著降低，表面标志（ CD80、CD83、CD86、HLA-DR）、刺激淋巴细胞增殖能力及IL-12的分泌水平均上调，且呈剂量依赖趋势。50 mg/L和100 mg/L CMP刺激组SOCS-1基因甲基化水平、IL-12分泌量及刺激淋巴细胞增殖指数均显著高于对照组，SOCS-1基因表达水平显著低于对照组。100 mg/L CMP刺激组CD80、CD83和HLA-DR表达水平显著高于对照组。结论 CMP能促进人外周血源性DC中SOCS-1基因甲基化，减少SOCS-1基因表达，进而促进其体外成熟。
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SOCS-1和RIZ1基因启动子区CPG岛甲基化与胃癌发病的关系
目的 检测细胞因子信号转导抑制因子(SOCS-1)和Rb结合锌指结构基因(RIZ1)启动子区甲基化状态,初步探讨其甲基化状态与胃癌发生的关系.方法 收集南京市原发性胃癌患者96例为胃癌组,采用1:1病例-对照研究方法,随机选取非消化系统疾病、非肿瘤患者96例为对照组,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测胃癌组及对照组外周血DNA的SOCS-1和RIZ1基因基因启动子区甲基化状态.结果 胃癌组SOCS-1( OR=4.845,P＜0.001,95％CI:2.506～9.367)和RIZ1基因(OR=3.338,P=0.01,95％ CI:1.591～7.003)启动子区甲基化率均高于对照组,且有统计学意义.在胃癌组中,发现SOCS-1基因甲基化异常与年龄、性别、Lauren分型、胃癌发生部位、TNM分期等无统计学关联(P＞0.05),而与肿瘤淋巴有无转移有一定关联(P=0.002)；RIZ1基因甲基化异常与年龄、性别、Lauren分型、胃癌发生部位、TNM分期、淋巴结转移均未见统计学关联(P＞0.05).结论 SOCS-1和RIZ1基因启动子区异常甲基化可能具有肿瘤特异性,检测SOCS-1和RIZ1基因甲基化状态对于胃癌的早期诊断和治疗有一定意义.
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成人急性髓性白血病SOCS-1基因及其甲基化的研究
目的:通过检测成人急性髓性白血病中SOCS-1基因表达水平及其甲基化水平,研究其在白血病发病中的作用.方法:运用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)方法,对24例急性髓性白血病患者和4株白血病细胞株(Jurkat、Raji、U 937、NALM 17),进行SOCS-1基因甲基化水平的研究；同时运用Real-time PCR法定量分析SOCS-1基因表达水平.以10例健康人为正常对照组.结果:24例成人急性髓性白血病患者中,15例有SOCS-1基因甲基化(62.5%),而正常对照组无SOCS-1基因甲基化(0%),二者有显著差异( P＜0.05)；SOCS-1基因甲基化组与无SOCS-1基因甲基化组相比较,其SOCS-1基因相对表达量明显减少(P口0.05)；与患者临床病理特征相结合比较,发现SOCS-1基因的甲基化与患者年龄、性别和病程阶段无相关.4株白血病细胞株中,Jurkat和U 937表现有SOCS-1甲基化(50%),Raji和NALM 17无SOCS-1甲基化,前者SOCS-1基因表达量较后者也明显降低(P＜0.05).结论:SOCS-1基因在成人急性髓性白血病中甲基化水平明显增高,且SOCS-1基因甲基化后表达水平受到抑制,提示SOCS-1基因及其甲基化在急性髓性白血病的发生发展中可能具有一定作用.
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SOCS-1基因启动子区甲基化与胃癌的关系
[目的]探讨细胞因子信号转导抑制分子-1(SOCS-1)基因启动子区甲基化在胃癌发生和发展过程中的意义.[方法]收集南京市原发性胃癌患者102例为胃癌组;采用1:1病例-对照研究方法,随机选取非消化系统疾病、非肿瘤患者102例为对照组.取外周血提取DNA,采用甲基化特异性PCR检测胃癌组及对照组外周血DNA SOCS-1基因启动子区甲基化状态. [结果]胃癌组SOCS-1基因启动子区甲基化率为38.24%(39/102),对照组为12.75%(13/102).两组OR=4.2381(95%CI:2.0924～8.5840).两组中年龄及性别亚组间的甲基化率差异均无统计学意义(P＞0.05). [结论]SOCS-1基因启动子区异常甲基化可能是肿瘤特异性的,在胃癌的发生、发展中可能具有一定的作用.
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三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞JAK/STAT3通路抑制作用的研究
目的 研究三氧化二砷(AS_2O_3)诱导人骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内 JAK/STAT3信号转导通路抑制与细胞增殖之间存在的关系.方法 采用MTT法观察AS_2O_3对骨髓瘤细胞作用的半数抑制浓度(IC_(50)),流式细胞技术检测AS_2O_3作用前后细胞周期的改变情况,甲基化特异性PCR法检测AS_2O_3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的变化,Western blotting法检测AS_2O_3作用前后磷酸化STAT3蛋白的表达差异.结果 AS_2O_3作用72 h后,骨髓瘤细胞U266、RPMI8226细胞内磷酸化STAT3蛋白表达水平明显降低,同时伴随SOCS-1基因启动子区CpG岛甲基化程度明显减弱至消失,细胞增殖发生G_0/G_1期阻滞,上述三者变化均与AS_2O_3浓度呈正相关(r=0.85,P<0.05).结论 AS_2O_3可诱导骨髓瘤细胞增殖受抑,与AS_2O_3诱导细胞内JAK/STAT3信号转导通路抑制存在一定关系,且与细胞内SOCS-1基因甲基化状态改变相关.
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三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞SOCS-1基因去甲基化及其对P-STAT3蛋白表达的影响
目的 探讨三氧化二砷(AS2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞内细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS-1)基因甲基化状态的影响及其对磷酸化的信号转导与转录激活因子-3(P-STAT3)表达的影响.方法 采用甲基特异性PCR法检测AS2O3作用前后MM细胞株U266和CZ-1细胞内SOCS-1基因的甲基化状态,应用蛋白免疫印迹法检测AS2O3处理前后细胞内P-STAT3蛋白的表达变化,并采用流式细胞技术检测AS2O3作用前后MM细胞增殖和凋亡的变化.结果 MM细胞株内SOCS-1基因存在程度不同的甲基化状态,与对照组相比,AS2O3作用后MM细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱或消失,P-STAT3蛋白的表达也明显减弱,同时细胞生长受抑,凋亡比率升高.AS2O3浓度分别为0、0.5、1.0、2.0μmol/L时,U266细胞株的总凋亡率分别为0.06％、0.56％、48.96％、61.07％(x2=9.19,P＜0.05)；而CZ-1细胞株的总凋亡率分别为4.20％、40.30％、47.72％、68.49％(x2=8.96,P＜0.05).结论AS2O3可能通过诱导MM细胞内SOCS-1基因去甲基化作用,进一步抑制细胞增殖信号Janus激酶(JAK) -STAT通路的活化,从而诱导MM细胞的凋亡.
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骨髓增生异常综合征患者SOCS-1基因启动子甲基化及表达异常研究
目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓SOCS-1基因的表达水平及其启动子区甲基化情况,探讨SOCS-1基因异常甲基化在MDS发生、进展中的作用,为去甲基化药物治疗MDS提供新靶点.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录PCR检测30例MDS患者骨髓SOCS-1基因mRNA表达水平及启动子区甲基化状态.结果:30例MDS患者骨髓中有16例检测到SOCS-1基因启动子甲基化,阳性率为53.3％.根据MDS的IPSS危险度分组,在高危MDS中65.2％(15/23)患者SOCS-1基因发生甲基化,而在低危MDS中甲基化比例只有14.3％(1/7),2组SOCS-1基因甲基化率差异有统计学意义(P＜0.05).在SOCS-1基因表达减低或缺失的16例患者中,10例(62.5％)发生启动子甲基化;而在SOCS-1基因表达正常的14例患者中,无一例发生SOCS-1基因启动子区异常甲基化,2组间SOCS-1基因甲基化率差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MDS患者骨髓SO CS-1基因启动子区存在异常甲基化,此异常甲基化与SOCS-1基因表达失活密切相关.
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成人白血病中SOCS-1基因表达的研究
目的:通过检测成人白血病中细胞因子信号转导抑制因子-1(SOCS-1)基因的表达水平,研究其在白血病发病中的作用.方法:运用实时定量PCR(Real-time PCR)方法对28例白血病患者和3株白血病细胞株(Jurkat、Raji、U937), 进行SOCS-1基因表达情况的研究,并以10例健康人为正常对照组.结果:28例白血病患者(急性白血病18例,慢性白血病10例)的SOCS-1基因表达量较正常对照组明显降低(P<0.01);其中急性白血病组与正常对照组相比较,SOCS-1基因表达水平显著降低(P<0.01);而慢性白血病组的SOCS-1基因表达水平与正常对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05).3株白血病细胞株与正常对照组比较,SOCS-1基因表达水平也显著降低(P<0.01).急性白血病患者的SOCS-1基因表达量在患者的不同年龄、性别和病程阶段差异均无统计学意义(P>0.05).结论:SOCS-1基因在成人急性白血病中表达水平明显降低(P<0.01),提示SOCS-1基因在急性白血病的发生发展中可能具有一定作用.
关键词： SOCS-1基因 白血病 Real-time PCR -
砷剂诱导骨髓瘤细胞周期改变与SOCS-1基因去甲基化作用的研究
背景与目的:三氧化二砷(As2O3)在治疗多发性骨髓瘤中具有一定价值.有研究认为As2O3,的治疗作用可能与诱导细胞内抑癌基因去甲基化作用相关.本研究旨在探讨体外As2O3,诱导人骨髓瘤细胞周期改变与细胞内SOCS-1基因去甲基化之间可能存在的关系.方法:采用MTT法观察As2O3,对骨髓瘤细胞U266、RPM18226增殖情况的影响,流式细胞技术检测As2O3对骨髓瘤细胞周期的影响.甲基特异性PCR(MSP)法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的改变,实时PCR技术定量检测细胞用药前后SOCS-1基因mRNA的表达变化.结果:与对照组细胞相比,人骨髓瘤细胞U266、RPM18226在较大剂量As2O3(0.5umol/L、1.0 umol/L、2.0 umol/L)作用72 h后,细胞周期分布均发生G0/G1期阻滞,呈现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞周期改变与As2O3,剂量呈正相关(P均<0.05),骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱(As2O3 0.5 umol/L作用72 h后)或消失(As2O3 1.0 umol/L或2.0 umol/L作用72 h后),SOCS-1基因在mRNA水平上表达明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:As2O3具有剂量依赖的诱导骨髓瘤细胞周期改变的作用,该作用可能与As2O3诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1基因再表达相关,这可能为进一步阐释As2O3,治疗多发性骨髓瘤中的可能机制提供新的思路和方向.
