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流式微球技术检测血小板特异性抗体的研究进展
血小板特异性抗体的产生是引起特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)病人血小扳减少及巨核细胞成熟障碍的重要原因,其诊断缺乏特异性的临床表现,主要依靠血小板特异性抗体的检测.单克隆抗体特异性血小板抗原固定术(MAIPA)是检测血小板特异性抗体的“金标准”,具有高特异性、低敏感性等特点,但由于操作繁琐、耗时等原因未在临床实验室推广使用.近年来,基于流式细胞术检测血小板特异性抗体的技术研究报道,其敏感性高于MAIPA,解决了部分操作及耗时的问题,并具有利用微球编码进行联立血小板抗体检测等优点.本文就近年来该检测方法的研究进展作一综述.
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重组表达糖蛋白GPⅢa片段偶联荧光微球分析人血小板抗原-1系统同种抗体
目的:应用偶联血小板GPⅢa重组表达片段的Luminex xMAP荧光微球,检测血小板抗HPA-1a和-1b抗体.方法:以倍比稀释成12个浓度(原液～1/2048)的抗HPA-1a WHO国际标准品,比较MAIPA和Luminex xMAP技术检测抗HPA-1a的灵敏度.以8份抗HPA-1 a/b阴、阳性对照,36份WHO血小板抗体质控盲样,评估流式荧光微球技术检测抗HPA-1a和-1b的特异性.结果:MAIPA检测抗HPA-1a的灵敏度为滴度1/64(抗体浓度1.56 IU/ml),流式荧光微球检测的灵敏度远高于滴度1/2048(抗体浓度0.049 IU/ml).微球分析法能特异性鉴别抗HPA-1a和-1b阴、阳性对照.36份盲样中,有1份样本,在高浓度对偶抗体的影响下,产生抗HPA-1b假阳性结果.其余样本的微球分析结果与预期结果相符,能准确检出抗HPA-1a和-1b抗体,而且与HLA和ABO抗体以及其它的血小板抗体(包括抗HPA-3b、-5b、-15b、-GPⅠb/Ⅸ和非HPA-1特异性的抗-GPⅡb/Ⅲa)未发生交叉反应.结论:基于重组偶联血小板GPⅢa的流式荧光微球技术可灵敏、特异性检测血小板HPA-1系统抗体,适合于临床免疫性血小板减少症患者的抗体特异性鉴定.
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抗凝剂对ITP血小板特异性自身抗体检测的影响及抗体种类与糖皮质激素疗效的相关性
目的:探讨改良单克隆抗体俘获血小板抗原(MAIPA)法中EDTA(二价阳离子熬合剂)和肝素钠抗凝剂对检测免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenia,ITP)患者血小板特异性自身抗体检测的影响,并研究ITP患者血小板特异性自身抗体种类与糖皮质激素治疗效果差异.方法:分别留取EDTA和肝素钠抗凝的ITP患者标本140份,采用改良MAIPA法分别检测血小板特异性自身抗体(GPⅡb/Ⅲa和GPⅠbα),比较两种抗凝剂的检测结果的差异.结果:140例患者EDTA抗凝组检出GPⅡb/Ⅲa抗体阳性55例,肝素抗凝组检出GPⅡb/Ⅲa阳性76例,两者阳性重复42例;其中EDTA组阳性而肝素组阴性者13例,肝素组阳性而EDTA组阴性者34例,两者比较差异有统计学意义(x2 =9.38,P＜0.05).140例患者EDTA抗凝组检出抗GPⅠbα抗体阳性62例,肝素抗凝组阳性51例,两者重复42例;其中EDTA组阳性而肝素组阴性者20例,而肝素组阳性EDTA组阴性者9例,两者比较差异无统计学意义(x2=3.44,P＞0.05).320例患者采用标准糖皮质激素治疗,抗GPⅠbα抗体阳性143例,有效率39.9％,抗GPⅠbα抗体阴性177例,有效率79.7％,两者比较差异有显著性(x2=53.115,P＜0.05).结论:EDTA抗凝剂对改良MAIPA法检测ITP患者血小板特异性自身抗体(GPⅡb/Ⅲa)有影响;抗GPⅠbα抗体阳性可能是ITP患者糖皮质激素治疗不敏感的重要影响因素之一.
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国内首例抗HPA-5b引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜的检测、诊断及分析
本研究旨在探讨抗HPA-5b抗体引发的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜(NAITP)的实验检测及临床诊断.临床监测患儿血小板计数及其他临床表现;多重PCR及DNA测序检测患儿及其父母HPA-1-21 bw系统基因型;流式细胞术(FCM)和血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定检测技术(MAIPA)检测及鉴定患儿及其母亲血清中的血小板特异性抗体.结果表明:患儿临床症状较轻,基因分析显示患儿为HPA-5 ab,父亲为HPA-5 ab,母亲为HPA-5aa;患儿母亲血清中含与父亲血小板反应的血小板特异性抗体为抗HPA-5b抗体.结论:该病例为抗HPA-5b抗体引起的新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜.
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恶性肿瘤非免疫性血小板减少患者血小板特异性抗体的研究
目的检测恶性肿瘤非免疫性血小板减少患者的抗血小板特异性抗体,评价单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)诊断及鉴别诊断价值.方法用改良的MAIPA法检测抗血小板GPⅡb/Ⅲa、GPⅠ b/Ⅸ的特异性抗体.结果恶性肿瘤非免疫性血小板减少患者的血小板特异性抗体阳性率低.结论抗血小板特异性抗体对鉴别免疫性与非免疫性血小板减少具有重要临床意义.
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血小板特异性抗体检测对血小板减少性紫癜鉴别的诊断意义
小板膜糖蛋白特异性抗体的总阳性率(抗GPIIb或抗GPIIIa或抗GPIb特异性自身抗体阳性)为70.2%,显著高于非免疫组6.1%(x2=29.97,P<0.05),因此,我们认为血小板特异性抗体检测是特异性较强的一项指标,对提高ITP确诊率及鉴别免疫性和非免疫性血小板减少性紫癜有重要的临床意义.
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HPA-1a抗体MAIPA定量检测标准体系的建立
目的 建立针对人类血小板抗原HPA-1a抗体的血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定定量检测(MAI-PA)的标准体系.方法 用MAIPA方法检测不同稀释度的标准HPA-1a抗血清,优化该方法的佳实验条件,绘制线性标准曲线,并对该方法的敏感度、特异性、准确度和精密度进行了分析.结果 经优化,确定MAIPA定量检测方法的佳实验条件如下:铺板抗体羊抗鼠IgG单抗:3μg/mL,血小板每孔2×107个,检测抗体小鼠抗人CD61单抗:20 μg/mL,酶标羊抗人IgG∶稀释度1∶10 000.该方法的线性检测范围是0-4IU.该方法低检测限至少为0.3IU,批内变异系数为1.3％-3.6％,批间变异系数为4.0％-5.6％.特异性检测:用抗-A、抗-B、抗-H、抗-I、抗-P1、抗-Lewisa等试剂以及含其他抗体的抗血清进行试验,均无明显阳性.结论 本研究建立的针对HPA-1a抗体的MAIPA定量检测的标准方法具有较高的敏感度、特异性、准确度和精密度,对于临床相关疾病的诊断和血小板安全输注具有重要的应用价值.
