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感染流感病毒巨噬细胞Dll1对分泌IFN-γ相关因素的影响
目的 通过体外途径,应用Notch信号阻断剂(GSI),研究流感病毒感染巨噬细胞Dll1对分泌IFN-γ相关MHC分子表达及细胞因子IL-6、IL-12、IL-18水平的影响. 方法 用A/H1N1流感病毒感染RAW264.7巨噬细胞,并加入不同浓度GSI与细胞共孵育48 h,分别提取细胞总RNA及收集培养上清液,采用实时荧光定量PCR法检测MHC分子表达及细胞因子水平. 结果 与DMSO对照组比较,感染流感病毒的RAW 264.7在GSI作用下表面分子MHC-Ⅰ mRNA表达水平无明显变化(P＞0.05),而MHC-ⅡmRNA表达降低(P＜0.05).经Pearson相关性分析Dll1 mRNA表达与MHC-Ⅱ呈正相关(r=0.816,P＜0.05).感染流感病毒的RAW264.7细胞在GSI作用后分泌的IL-12和IL-18水平低于DMSO对照组(P＜0.05),而IL-6水平高于对照组.0.5、1和5μmol/L GSI组IL-12含量[分别为(24.15±0.35)、(21.15±4)和(14.75±0.7)pg/ml]均低于DMSO对照组[(53±2.83)pg/ml](P＜0.05);5μmol/LGSI组IL-18含量[(75±7.07) pg/ml]低于DMSO对照组[(114.75±4.5)pg/ml](P＜0.05).经Pearson相关性分析,Dll1 mRNA表达与IL-12呈正相关(r=0.972,P＜0.05),与IL-6呈负相关(r=-0.767,P＜0.05). 结论 不同Dll1基因表达水平影响分泌IFN-γ相关巨噬细胞表面MHC-Ⅱ及IL-12、IL-18的水平,从而影响IFN-γ介导的抗流感病毒免疫应答反应.巨噬细胞Dll1与抗流感病毒免疫相关.
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小鼠DLL1真核表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的表达
目的:构建带绿色荧光蛋白的小鼠DLL1全长基因真核表达栽体,并在肿瘤细胞中表达.方法:利用PCR特异性引物扩增出DLL1基因全长,将克隆的基因片段插入带绿色荧光蛋白的真核表达载体pIRES2-EGFP质粒中.然后利用脂质体将重组质粒pIRES2-EGFP-DLL1转染进小鼠B16黑色素瘤细胞中,并通过G418筛选后选取生长良好、荧光强度高的三株单克隆进行mRNA水平DLL1表达的鏊定.结果:成功扩增小鼠DLL1的全长基因.克隆入质粒栽体后,通过DNA序列测定证实其序列正确.将构建的pIRES2-EGFP-DLL1质粒转染小鼠B16黑色素瘤细胞,经过G418筛选和荧光显微镜观察后,挑选得到GFP阳性率90%以上的稳定转染细胞株.RT-PCR检测稳定转染细胞的mDLL1的表达显著增加,进一步证实了pIRES2-EGFP-DLL1的表达效能.结论:成功构建了小鼠DLL1基因的真核表达质粒,证实其在真核细胞B16中可以表达.
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DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及乙醛脱氢酶1、Notch信号通路受体和配体表达的影响
目的 观察γ-分泌酶抑制剂(GSIs)DAPT对结肠癌细胞株HT-29增殖及结直肠癌肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)、Notch信号通路受体Notch4、Notch信号通路配体DLL1表达的影响.方法 体外培养HT-29细胞,取对数生长期细胞用于实验.分别以0、5、10、20、40、80 μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24、48、72 h后,倒置显微镜下观察细胞形态,用MTT比色法检测细胞增殖能力(以OD值表示).分别以0、20、40 μmol/L的DAPT作用于HT-29细胞24 h后,采用RT-PCR法检测细胞中的ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA,分别采用Western blotting法和免疫组化法检测ALDH1、Notch4、DLL1蛋白.分析HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA及蛋白表达的相关性.结果 DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用呈一定剂量、时间依赖性,40、80 μmol/L浓度组培养48、72 h时细胞增殖能力低于培养24 h时(P均<0.05).DAPT处理后的细胞形态出现典型凋亡状态改变.20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA相对表达量低于0 μmol/L组(P均<0.05).0、20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白相对表达量依次降低(P均<0.05).免疫组化染色图像分析结果示,0、20、40 μmol/L的DAPT作用后HT-29细胞中ALDH1、Notch4、DLL1蛋白表达OD值依次降低(P均<0.05).HT-29细胞中ALDH1、DLL1 mRNA表达与Notch4 mRNA表达均呈正相关关系(r分别为0.997、0.998,P均<0.05).HT-29细胞中ALDH1、DLL1蛋白表达与Notch4蛋白表达均呈正相关关系(r分别为0.998、0.999,P均<0.05).结论 DAPT作用后,细胞增殖受到抑制,细胞中ALDH1、Notch4、DLL1 mRNA和蛋白表达下调;DAPT对HT-29细胞的增殖抑制作用可能与降低肿瘤干细胞特性、下调Notch信号通路受体与配体表达实现的.
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Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨Notch信号传导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌的表达及其与临床病理特征和肿瘤预后之间的关系.方法 回顾性分析2004年8月至2006年9月在南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心行手术治疗的146例结直肠癌患者的临床及随访资料,建立患者肿瘤标本组织芯片并对JAG1和DLL1基因表达进行免疫组织化学检测.结果 146例患者JAG1表达与其肿瘤分化程度有关,DLL1表达在不同肿瘤部位的表达差异有统计学意义(均P＜0.05)；两种基因表达与微卫星不稳定状态之间差异无统计学意义(P＞0.05).134例(91.8％)患者获随访,随访时间(42.3±l3.3)个月.无瘤生存86例(64.1％),1、3和5年总生存率分别为93％、74％和67％.多因素分析显示,患者预后与TNM分期、病理学类型、微卫星状态、JAG1基因表达有关(P＜0.05).JAG1基因高表达患者预后优于阴性表达和弱阳性表达的患者(P＜0.05).结论 Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1表达分别与肿瘤分化程度及肿瘤部位有关,JAG1基因与预后有关.
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DLL1基因在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义
目的 研究DLL1基因在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达情况,并探讨其表达差异与临床资料及预后的关系.方法 从肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库收集乳腺癌数据集,下载DLL1基因表达谱资料,取中位数分为高表达组与低表达组,分析其与临床资料及病例特征的关系;利用Kaplan-Meier Plotter分析DLL1与乳腺癌患者预后的相关性.结果 DLL1在乳腺癌及三阴性乳腺癌中的表达均明显低于正常乳腺组织,在乳腺癌中,DLL1在不同雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)状态、年龄、病理组织类型的表达差异有统计学意义(P<0.01);在不同人表皮生长因子2(HER2)状态,是否绝经、不同种族、有无远处转移、有无淋巴结转移的表达差异无统计学意义(P>0.05).在三阴性乳腺癌中,DLL1在年龄、病理组织、绝经、种族、远处转移、淋巴结转移各参数不同状态下的表达差异无统计学意义(P>0.05).DLL1表达越低,乳腺癌患者总生存时间和无病生存时间更短,但是在三阴性乳腺癌患者中,DLL1表达越低,乳腺癌患者无病生存时间更长.结论 在乳腺癌和三阴性乳腺癌中,DLL1低表达并且与患者的预后相关,DLL1的表达与乳腺癌ER、PR、年龄、病理组织类型相关性差异有统计学意义,DLL1在乳腺癌的发生中可能起着重要作用.
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Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及意义
目的 探讨Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及其临床病理意义.方法 运用免疫组织化学法检测12份正常结直肠黏膜标本、30份结直肠腺瘤组织标本、50份结直肠腺癌组织标本,了解Notch3、DLL1、CD133在不同结直肠组织中的表达情况,分析其与临床病理特征间的关系.结果 Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的阳性表达率分别为64.0％(32/50)、68.0％(34/50)和54.0％(27/50),均明显高于在结直肠腺瘤中的阳性表达率(26.7％、33.3％、36.7％)和正常结直肠组织中的阳性表达率(8.3％、16.7％、8.3％)(P＜0.05).腺瘤组与正常组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).以上指标在结直肠腺癌中的表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、分化程度、肿瘤大小无关(P＞0.05),均与是否伴淋巴结转移相关,且Notch3和DLL1的表达与Dukes分期相关,此外DLL1的表达与肿瘤浸润深度也相关(P＜0.05).Notch3与CD133的表达呈正相关(r=0.478,P=0.000).结论 在结直肠腺癌组织中Notch3、DLL1、CD133的表达明显高于正常结直肠组织及结直肠腺瘤组织;Notch3可能通过对肿瘤干细胞的调控,影响结直肠癌的发生、发展.
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上调Delta-Like1基因可增强小细胞肺癌化疗敏感性
背景与目的 DLL1 (Delta-Like1)与Notch受体结合激活Notch信号通路,从而决定细胞的分化,并调控多种组织的生长发育.已有研究报道DLL1与肿瘤的生长、分化密切相关.前期基因芯片发现DLL1与小细胞肺癌的耐药性相关,本研究旨在进一步探讨DLL1在小细胞肺癌多药耐药中的作用.方法 首先通过QRT-PCR和Western blot从基因和蛋白水平检测化疗敏感细胞株H69及多药耐药细胞株H69AR中DLL1的差异表达；转染DLL1-pIRES2-EGFP表达质粒上调H69AR细胞中的DLL1的表达,构建稳定转染的过表达细胞株H69AR-eGFP-DLL1,通过CCK8检测细胞对各种化疗药物(ADM,DDP,VP-16)的敏感性变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡的变化.结果 DLL1在化疗敏感细胞H69中的表达明显高于H69AR,过表达H69AR中DLL1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞的凋亡,细胞周期发生G0/G1期及S期阻滞,上调DLL1增加其下游基因HES1、HEY1的表达.结论 在小细胞肺癌中上调DLL1的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性,DLL1通过肿瘤细胞间的相互作用激活HEM、HEY1等下游基因,影响小细胞肺癌的多药耐药.
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脑脊液Notch1、DLL1在中枢神经系统感染中的临床价值
目的研究脑脊液Notch1、DLL1在中枢神经系统感染患者中的应用，为临床工作提供依据。方法选取腰椎穿刺术患者289例，根据临床诊断结果将患者分为结核性脑膜炎组127例和非结核性脑膜炎组162例(其中化脓性脑膜炎组146例和新型隐球菌性脑膜炎组16例)；选取同期入院的72例非感染性神经系统疾病患者为对照组。采用ELISA 测定各组患者脑脊液Notch1、DLL1水平。结果结核性脑膜炎组 Notch1>8.5ng/ ml 的例数显著高于化脓性脑膜炎组、新型隐球菌性脑膜炎组及对照组的例数(P<0.05)；结核性脑膜炎组DLL1>0.77ng/ ml 例数显著高于化脓性脑膜炎组、新型隐球菌性脑膜炎组及对照组例数(P<0.05)。Notch1及DLL1水平联合检测敏感度、特异性，显著高于单一Notch1及DLL1水平检测(P<0.05)； Notch1及DLL1水平联合检测阳性率，显著低于单一Notch1及DLL1水平检测(P<0.05)。结论结核性脑膜炎患者中枢神经系统感染中血清和脑脊液中Notch1、DLL1水平较高，而在非结核性脑膜炎和非感染性神经系统疾病中含量较低，可以将其作为结核性脑膜炎辅助诊断指标，值得应用。
