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济宁地区淡色库蚊幼虫对苏云金杆菌的抗性水平研究
通过苏云金杆菌对采集的几株野外淡色库蚊种群幼虫的灭杀作用,分析不同环境下,该蚊对苏云金杆菌抗药性的差异.采用幼虫液浸法,测定不同淡色库蚊种群幼虫对苏云金杆菌的LC50.结果显示,苏云金杆菌BTH-14对采集的几株淡色库蚊种群幼虫有不同的灭杀效果,其中采集于苇坑种群的试虫对苏云金杆菌表现出一定程度的抗性,但到F2代,该种群抗性消失,表明这种抗性不能通过遗传形成持续抗性.结果表明不同的孳生环境会影响淡色库蚊幼虫对苏云金杆菌的抗药性,但其抗性不能遗传给后代.
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苏云金杆菌cryIVD基因的克隆及序列分析
目的克隆苏云金杆菌(B.t.i)cryIVD基因并测定其序列. 方法根据B.t.i cryIVD已知序列,设计合成1对引物,应用PCR技术扩增cryIVD基因,克隆入pUC18载体,阳性克隆的重组质粒经酶切、电泳鉴定后进行序列测定. 结果 PCR扩增得到特异的2.0 kb基因片段.重组质粒经酶切后得到预期大小的基因片段.序列分析证明目的基因被完整且正向克隆. 结论 B.t.i cryIVD基因被成功克隆.
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转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻现场防治蚊虫的研究
目的 观察转苏云金杆菌CrylVD基因蓝藻现场杀灭蚊幼虫的效果. 方法 大量培养转基因工程藻,显微镜下计数,在济宁市郊区选择不同孳生地进行现场应用,评价杀蚊幼效果. 结果 工程藻浓度≥106 cells/ml时,在无污染的水体中2d杀死99％以上的蚊幼虫,在轻度污染的水体中3d杀死99％以上的蚊幼虫.连续观察3个月工程藻仍有杀灭蚊幼虫的效果,实验组蚊幼虫密度多16条/勺,对照组平均为80条/勺. 结论 工程藻在水质较好或轻度污染的水体中均有较强的杀蚊幼作用,且持续时间长,有望用于蚊虫防治.
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苏云金杆菌cryIVD基因的表达及杀蚊毒效测定
目的研究苏云金杆菌(B.t.i)cryIVD基因用于蚊虫生物防治.方法经IPTG诱导,重组质粒在大肠埃希菌DH5α中进行表达,并进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫印迹(Western-blot)分析,观察其杀蚊毒效.结果经SDS-PAGE及Western-blot分析显示,特异蛋白带的分子质量单位为72 ku,并且该蛋白对蚊虫具有杀灭作用.结论在大肠埃希菌中B.t.i cryIVD基因单独表达,并具有杀蚊活性.
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苏云金杆菌对媒介蚊虫的防治研究
目的 研究苏云金杆菌对媒介蚊虫的防治效果以及菌液在室内的持效性.方法 选择对媒介蚊虫具有高致病力的血清型苏云金杆菌缓释悬浮剂(B.f.H-14)防治试验区蚊虫,分别利用勺捕法和人帐诱法调查蚊幼虫和成蚊密度,与对照区蚊虫密度比较,研究B.t.H-14的现场防治效果,并在实验室观察苏云金杆菌在不同水体内的持效性.结果 利用苏云金杆菌防治媒介蚊虫,在媒介蚊虫高峰季节,相关密度指数(RPI)＜10,说明苏云金杆菌可以控制自然水体内媒介蚊虫的种群数量.试验区蚊虫密度维持在较低水平,幼虫密度＜50条/勺,成蚊密度＜20只/h,而对照区蚊虫密度随季节变化明显,幼虫密度＞ 100条/勺,成蚊密度高可达188只/h.在实验室内,苏云金杆菌持效期可达30 d,其中,在清水中苏云金杆菌的防治效果好,污染水体苏云金杆菌对蚊幼虫的杀灭率在1周后达到大值,以后逐渐降低.结论 在自然环境中可利用苏云金杆菌防治媒介蚊虫,并根据蚊虫密度,施用不同浓度的菌液和确定施药次数.
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大肠埃希菌表达苏云金杆菌cryIVD基因杀蚊幼活性观察
目的:观察表达B.t.i cryIVD基因的大肠埃希菌对蚊幼虫的毒效.方法:细菌的诱导表达及蚊虫毒效测试.结果:加入工程菌48 h对淡色库蚊和白纹伊蚊均具有明显的杀灭作用,LC50分别为2.38×106、1.6×107个/ml细胞,其中对淡色库蚊的杀灭作用要好于对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果.结论:单独表达B.t.i cryIVD基因具有杀蚊作用.
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鱼腥藻表达苏云金杆菌CryIVD基因现场灭蚊效果观察
利用分子生物学技术,将含苏云金杆菌(B.t.i)毒蛋白基因CryIVD的表达质粒转入鱼腥藻中表达,建立新型转基因工程藻,进行灭蚊.该工程藻经大量培养后,2001年夏在山东省邹城市城区进行了现场灭蚊试验.
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重型肝炎患者苏云金杆菌的耐药机制研究
目的 研究重型肝炎患者苏云金杆菌(Bt)的耐药机制.方法 应用美国BD公司的Phoenix NMIC/ID-55鉴定/药敏板进行鉴定与细菌药敏试验,应用PCR法检测Bt的耐药基因,并经测序及同源性分析证实其分布.结果 该株病原菌经16S rRNA测序及同源性分析(GenBank注册号为FJ932761)证实为Bt;对氨苄西林、万古霉素、替考拉宁、环丙沙星、呋喃妥因、四环素、夫西地酸、利奈唑胺敏感,对青霉素、苯唑西林、红霉素、克林霉素、喹奴普汀/达福普汀、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢西丁、莫匹罗星等药耐药;PCR扩增1种AMEs耐药基因阳性,经测序和同源性分析证实为ant(3")-Ⅰ,于GenBank注册号为FJ644661.结论 Bt对氨基糖苷类耐药机制主要与ant(3")-Ⅰ基因有关.
关键词： 重型肝炎 苏云金杆菌 ant(3")-Ⅰ基因 氨基糖苷类修饰酶 -
苏云金杆菌可湿性粉剂毒性作用实验研究
苏云金杆菌可湿性粉剂是近来我国农业生产中应用较多的一种细菌性杀虫剂,又名青虫菌BT杀螟杆菌.制剂有可湿性粉剂(16000、32000IU/mg)、乳剂(2000、4000、8000IU/ml),或以芽孢数表示的乳剂及悬浮剂等.
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苏云金菌杀蚊新基因和菌株的筛选
目的测定杀蚊毒素cry 4与cyt基因的分布,并检出其未知的基因.方法从基因库中找出并比较全部cry 4与cyt基因的DNA序列,根据其共有和特有的片断,设计出相应的引物.用这些引物扩增的PCR产物被变性梯度凝胶电泳分析,排除从已知的cry 4与cyt基因扩增出来的PCR片断而检出未知基因的PCR片断.结果总共测出从未报道过的cry 4与cyt基因在杀蚊苏云金杆菌的分布44个.并发现8个可能的新的cry 4和cyt基因.它们是cry 4Ab,cry 4Ac,cry 4Bb,cyt 1Ac,cyt 2C,cyt 1相关基因,苏云金杆菌亚株medellin特异性cyt 1基因,亚株jegathesan特异性cyt 2基因.结论根据该实验结果和以前的报告,将杀蚊苏云金杆菌分为3组.其中,苏云金杆菌亚株jegathesan可作为亚株israelensis的替换菌株,以避免蚊虫的耐药性.
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生物、化学杀虫剂混配毒饵技术研究
目的:本研究阐述苏云金杆菌以色列变种、鱼藤酮、乙酰甲胺磷、高效氯氰菊酯、硼酸生物、化学杀虫剂混配和其单用毒饵特性和毒力.方法:药量胃毒法和苏云金毒力统计法.结果和结论:毒饵双用和混配增效基理及配方、工艺过程,和其产品及包装后的稳定性、可行性.
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生物农药苏云金杆菌有机茶叶杀虫剂中毒1例
本文介绍了生物农药苏云金杆菌有机茶叶杀虫剂中毒1例,并结合案例研究分析苏云金杆菌的研究进展及可能存在的中毒风险,提示要慎重对待苏云金杆菌类农药可能导致的中毒或者食用转苏云金杆菌蛋白食物.
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苏云金杆菌悬浮剂杀灭白纹伊蚊不同龄期幼虫实验及其影响因素分析
目的:研究苏云金杆菌悬浮剂对不同龄期白纹伊蚊幼虫杀灭效果及其影响因素分析;方法:实验室,现场实验;结果:苏云金杆菌悬浮剂对白纹伊蚊Ⅰ～Ⅳ龄初幼虫能得到100%的杀灭效果,对蛹和即将化蛹的Ⅳ龄末幼虫完全无杀灭效果,积水中的沉积物可影响苏云金杆菌悬浮剂对白纹伊蚊幼虫的杀灭效果,沉积物越多(1/2～2/3),幼虫的杀灭率就越低,高为66%,苏云金杆菌悬浮剂对南方地区白纹伊蚊阳性小容器积水幼虫有良好的控制效果,持效可达10 d;结论:苏云金杆菌悬浮剂对白纹伊蚊幼虫有良好的杀灭效果,沉积物较多的积水则用高剂量药,为提高持效,用药后7 d要重施药.
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苏云金杆菌(以色列亚种)可湿性粉剂室内及现场药效试验
苏云金杆菌是一种灭蚊幼的生物杀虫剂农药产品,国内已广泛进行了研究和应用,其以色列变种(Bti)是目前世界上应用为广泛的灭蚊幼病原微生物,国内外用于防制蚊虫的幼虫已有20多年历史.但由于生产工艺的限制,部分产品仍存在着效价不高和杀虫谱窄等缺点.为保证产品质量合格、安全,我们按厂方要求对武汉天惠生物工程有限公司生产的1200ITU/mg苏云金杆菌(以色列种)可湿性粉剂进行了灭蚊幼实验室及现场药效实验,现报告如下:
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限制性显示-聚合酶链反应扩增苏云金杆菌基因片段的克隆与分析
目的运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)基因片段,并进行克隆、测序分析.方法设计特异性引物扩增长片段Bt基因,对扩增产物进行RD-PCR扩增,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定.提取阳性克隆质粒进行测序分析.结果运用RD-PCR技术,将长片断的基因(2 000-3 000 bp)分为多个短的片段,片段长度较为均一(200～600 bp).测序结果表明,所扩增的片段均属于特异扩增的Bt基因.结论运用RD-PCR技术可以将长片段基因进行片段化,使其适用于基因芯片的探针.
关键词： 限制性显示-聚合酶链反应 苏云金杆菌 基因克隆 -
苏云金杆菌与化学杀虫剂对淡色库蚊幼虫的杀灭效果
目的 评价常用苏云金杆菌(BT)与5种常用化学杀虫剂联合作用对淡色库蚊幼虫的灭杀效果.方法 采用生物测试法测试敏感品系淡色库蚊幼虫对BT、氯氰菊酯、溴氰菊酯、敌敌畏、残杀威、三氯杀虫酯的LC50,采用简单复配法测试BT制剂与5种化学杀虫剂的增效效果,选择效果较好的两种复配方式以共毒系数法进行配方验证.结果 BT与5种化学杀虫剂进行简单复配时对实验室敏感品系淡色库蚊幼虫均具有增效效果,其中BT与残杀威复配效果为明显,增效效果为18.59,其次为氯氰菊酯,增效效果为11.59.选择残杀威、氯氰菊酯与BT以不同比例复配,以共毒系数法进行进一步的测试和评价.结果显示,残杀威与BT以1∶3复配的共毒系数高,为195,增效效果好,其次为残杀威与BT以1∶1复配,共毒系数为133,再次为氯氰菊酯与BT以1∶3复配,共毒系数为132.结论 联合应用BT与化学杀虫剂尤其是残杀威,对敏感品系淡色库蚊幼虫具有较好的增效效果,在蚊虫防制中具有较好的应用前景.
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苏云金杆菌(BTH-14)和球形芽孢杆菌(BS-10)混合液对营口市区库蚊蚊幼的毒力测定
目的:测定BTH-14和BS-10对蚊幼的毒力,为使用生物杀虫剂灭蚊提供科学依据.方法:采用液浸法,用苏云金杆菌(BTH-14)和球形芽孢杆菌(BS-10)混合液按不同浓度对不同龄期、不同种蚊幼进行敏感性测定.结果:蚊幼龄期越小,对生物制剂越敏感.凶小库蚊和淡色库蚊的相对敏感性大体一致.结论:相同浓度的生物制剂对龄期较小的幼虫有较强的杀灭率.
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转基因食品,吃了会“变异”吗?
生活中的"转基因"目前,我们生活中有许多转基因食品,如甜椒、西红柿、土豆、玉米等,这些都是经过我国农业部批准种植的.被批准种植的还有我们生活中不可缺少的主粮:水稻.杂交水稻之父袁隆平所培养出来的杂交水稻也算是一种转基因作物."转基因"食物,会让我们"变异"吗?转基因食品的出现,得到了各国人的关注,有关它的安全性争议,也越来越多由此,转基因食品在我国就形成了一种恐慌,百姓谈"转"色变.但其实,经科学家研究证明,那些所谓的有毒的转基因食品,是指含有杀虫病毒(苏云金杆菌(BT))的转基因农作物,它们是不被允许食用的,只作为研究所用.而我们市面上的转基因食品是经过专家们风险评估的,是安全、可食用的,对健康没什么特别大的影响.
