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转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路
目的 探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用.方法 构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,Tree View和DAVID生物信息数据库(DAVID BioinformaticsResources)以及Enrichr分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路,绘制热图(heatmap).结果 BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P ＜0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1、Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P＜0.05),克隆大小明显降低.结论 HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和黏附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用.总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用.
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转录因子 HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路研究
目的：：探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法：构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力；Western blotting检测上皮-间质转化( EMT )相关蛋白表达水平的变化；平板克隆实验检测细胞的增殖能力；转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,treeview和DAVID生物信息数据库(DA-VID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析KEGG信号通路,绘制热图( heatmap)。结果：BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低( P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物 N-cadherin, Twist1,Slug蛋白表达水平显著下调；平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少( P<0.05),克隆大小明显降低。结论：HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖；HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和粘附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子( TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。
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HOXA5抑制人乳腺癌细胞凋亡及其机制的研究
目的:研究HOXA5在不同侵袭转移能力乳腺癌细胞中的表达及对乳腺癌细胞生物学特性的影响,并探讨其在乳腺癌细胞中发挥作用的分子机制.方法:首先应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot的方法检测HOXA5 mRNA和蛋白在侵袭转移能力不同的乳腺癌细胞及良性乳腺上皮细胞中的表达水平,应用分子克隆技术将HOXA5 cDNA重组到真核表达载体pcDNA3.1(+),脂质体方法转染表达较低的MDA-MB-231细胞后筛选并鉴定HOXA5过表达细胞株,用流式细胞技术检测过表达HOXA5对乳腺癌细胞凋亡的影响,并用Western blot的方法检测过表达HOXA5对凋亡相关基因p53、caspase2和caspase8表达的影响.结果:无论是mRNA水平还是蛋白水平,HOXA5在侵袭转移能力强的MDA-MB-231细胞中的表达均低于侵袭转移能力弱的MCF-7和无侵袭转移能力的乳腺良性上皮细胞MCF-10A,过表达HOXA5后乳腺癌凋亡细胞比例明显增加,由原来的8%上升到15%～16%(P<0.01).同时.过表达HOXA5对乳腺癌细胞中p53表达无明显影响,而caapaae2和caspase8活性表达明显增加.结论:HOXA5在乳腺癌细胞中表达水平与细胞侵袭转移能力呈负相关,在乳腺癌细胞中过表达HOXA5可通过增加caspaae2和caalmae8活性表达的途径促进乳腺癌细胞凋亡,从而达到抑癌的作用,但对乳腺癌细胞中p53的表达无明显影响.
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HOXA5基因真核表达质粒的构建及在乳腺癌细胞中的功能研究
目的:构建HOXA5基因真核表达重组质粒,并转染乳腺癌细胞株观察其对细胞迁移能力的影响.方法:实时定量聚合酶链反应(RT-QPCR)检测MCF7、BT474及MDA-MB-231等3种乳腺癌细胞中HOXA5 mRNA的表达.采用全基因合成法合成HOXA5编码区序列,克隆入pcDNA3.1(+)载体,构建重组质粒pcDNA3.1-HOXA5.重组质粒转染乳腺癌细胞,采用Western blot 及RT-QPCR检测HOXA5的表达效率.观察细胞形态并通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力.结果:3株乳腺癌细胞中,MDA-MB-231细胞中HOXA5mRNA表达水平较低.其基因测序结果显示与预期片段大小一致,表明HOXA5重组质粒构建成功.将HOXA5重组质粒瞬时转染MDA-MB-231细胞后,检测到其mRNA和蛋白表达水平均明显上调,MDA-MB-231细胞的迁移能力降低,EMT相关转录因子Twist的表达显著下调.结论:成功构建HOXA5过表达重组质粒,在MDA-MB-231中过表达HOXA5抑制乳腺癌的迁移能力.
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同源异型盒基因HOXA5对胃癌细胞BGC823侵袭能力的影响
目的 检测人胃癌组织中HOXA5基因的表达情况,观察干扰HOXA5基因的表达之后,胃癌细胞BGC823的迁移和侵袭能力的变化,为阐明HOXA5在胃癌向远处转移的分子机制中提供新的思路.方法 通过实时定量PCR(qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术,检测胃癌组织中HOXA5基因的表达.应用细胞转染的方法 将HOXA5基因的过表达质粒转入胃癌细胞BGC823中,经qRT-PCR和Western blot验证HOXA5表达上调之后,利用Transwell侵袭实验检测BGC823细胞侵袭能力的变化.结果 在收集的69例新鲜的胃癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,胃癌组织中只有26例HOXA5的表达高于癌旁组织,比例为37.7％;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,胃癌组织中HOXA5的表达水平显著下调(mRNA水平下调3倍,蛋白水平下调2倍,差异具有统计学意义,P<0.05).BGC823细胞转染了过表达质粒之后,HOXA5的表达能够被上调.过表达了HOXA5基因的BGC823细胞的侵袭能力下降.结论 在胃癌组织中HOXA5的表达下调,而在胃癌细胞BGC823中增强HOXA5的表达能够降低细胞的侵袭能力,说明HOXA5在胃癌的发生发展和侵袭、转移中发挥着抑癌基因的作用,可作为一个新的治疗靶点.
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HOXA5基因与肿瘤
HOXA5作为同源盒(HOX)基因家族的一员,在多器官中都有表达,具有调节基因表达、细胞分化和机体形态发生的功能,其结构和(或)功能异常与白血病、乳腺癌、脑血管瘤、肝细胞癌等肿瘤的发生密切相关.研究HOXA5与肿瘤的关系有助于肿瘤的诊断、治疗及预防.
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RNA干扰沉默同源异型基因A5逆转K562/ADM细胞耐药性的研究
目的 研究RNA干扰(RNAi)技术沉默同源异型基因A5(HOXA 5)对白血病耐阿霉素细胞株K562/ADM细胞耐药性的影响并探讨其机制.方法 Western blot检测各组细胞中HOXA5、p38和p-p38的蛋白表达,qRT-PCR检测HOXA5、p38的mRNA表达;CCK8检测各组细胞对阿霉素的敏感性变化;流式细胞术(FCM)检测各组细胞的凋亡及周期变化.结果 K562/ADM细胞中HOXA 5基因的表达高于K562细胞,且其耐药性是K562细胞的4.94倍.转染后实验组K562/ADM细胞中HOXA 5基因的表达受抑制,而实验组细胞的IC50较对照组降低2.55倍.同时,实验组细胞中p38的mRNA及p-p38的蛋白表达高于对照组.与对照组比较,实验组的细胞周期G0/G1期增高,S期降低.经ADM(2.5μg/ml)诱导后,实验组细胞凋亡率高于对照组.结论 RNAi 沉默HOXA5能在一定程度上逆转白血病耐药,其机制可能与p38MAPK信号转导通路的激活有关.
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同源异型盒基因HOXA5对小细胞肺癌细胞多药耐药性的影响
目的：研究同源异型盒基因HOXA5的变化对小细胞肺癌多药耐药性的影响，并探讨其作用机制，评价其作为小细胞肺癌临床治疗靶点的可能性。方法实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测小细胞肺癌细胞H69和多药耐药细胞株H69AR中HOXA5 mRNA和蛋白水平，采用表达质粒和siRNA升高或降低HOXA5基因表达水平，CCK8法分析细胞对小细胞肺癌常用化疗药物顺铂（Cisplatin，DDP）和足叶乙甙（Etoposide，VP-16）敏感性的变化。结果 H69细胞中HOXA5 mRNA水平是耐药细胞株H69AR中的8.99倍。HOXA5 siRNA显著降低H69细胞中HOXA5的表达水平，降低了H69细胞对DDP和VP-16的敏感性。将HOXA5表达质粒稳定转染入H69AR细胞，建立稳定转染细胞株，细胞对DDP和VP-16敏感性增加。结论 HOXA5可能参与了小细胞肺癌耐药过程，可能会成为小细胞肺癌临床治疗的新靶点。
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良恶性病变食管组织及其邻近组织中HOXA5蛋白和mRNA的表达
[目的]探讨食管鳞癌组织中同源异型盒基因(HOX)HOXA5蛋白和mRNA的表达情况,分析HOXA5表达与食管癌患者年龄、性别及其他临床病理学特征的关系.[方法]选择31例择期手术的食管癌患者,手术切除的标本均在离体30 min内分别于癌灶、癌旁3 cm以内及手术残端食管黏膜组织3处取材:对各部分标本作HE染色进行病理学诊断及分型,用免疫组织化学染色方法检测HOXA5蛋白的表达,用荧光定量PCR法检测HOXA5 mRNA的表达.[结果]①HE病理组织学检测证实31例癌组织标本均为鳞癌.癌旁3 cm以内的标本呈中-重度不典型增生,手术残端食管黏膜组织均为正常鳞状上皮.②在正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中HOXA5蛋白阳性表达率分别为32.3%、58.1%和64.5%(P<0.05);HOXA5 mRNA的含量分别为0.97±0.46、1.76±1.03和2.37±2.11(P<0.05);HOXA5蛋白和mRNA均表现为癌组织及癌旁不典型增生组织的表达率/表达量明显高于正常食管黏膜组织.③HOXA5蛋向阳性表达率(P<0.05)、HOXA5 mRNA的含量(P<0.05)均与食管鳞癌组织的病理学分级有关,其在病理学Ⅲ级中的表达率明显高于病理学Ⅰ+Ⅱ级的;不支持HOXA5蛋白和mRNA的表达与患者的年龄、性别、浸润深度及有无淋巴结转移有关(均P>0.05).④HOXA5蛋白表达与其mRNA的表达一致性程度良好(Kappa=0.718,P<0.05).[结论]HOXA5蛋白和mRNA的表达在癌旁不典型增生组织、食管鳞癌组织中明显升高,它可能是食管鳞癌发生过程中的早期事件.
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同源异型盒基因HOXA5抑制肝癌的侵袭和迁移通过调控UBC9的表达
目的:检测人肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达情况,观察稳定高表达HOXA5基因的肝癌细胞MHCC97H迁移和侵袭能力的变化,探讨HOXA5调控肝癌侵袭迁移的机制,为肝癌的分子靶向治疗提供新的靶点.方法:通过实时定量PCR (qRT-PCR)、Western blot以及免疫组织化学等技术检测肝癌及癌旁组织中HOXA5基因的表达.构建稳定高表达HOXA5的肝癌细胞MHCC97H,利用划痕和Transwell侵袭实验检测细胞迁移、侵袭能力的变化.应用CHIP-Seq筛选出HOXA5潜在的靶基因,在稳定高表达HOXA5基因细胞中应用qRT-PCR、Western blot验证HOXA5与靶基因的关系.结果:新鲜的肝癌组织以及相对应的癌旁组织中,免疫组织化学显示相比于癌旁组织的表达情况,肝癌组织中HOXA5的表达低于癌旁;qRT-PCR、Western blot检测发现相对于癌旁组织,肝癌组织中HOXA5的表达水平显著下调.过表达了HOXA5基因的MHCC97H细胞的侵袭能力下降.CHIP-Seq的结果发现,HOXA5结合在UBC9的上游启动子区域.在稳定高表达HOXA5的MHCC97H细胞中,UBC9的mRNA和蛋白表达均下调.当在稳定高表达HOXA5的同时过表达UBC9时,肝癌细胞的侵袭和迁移能力部分回复.结论:在肝癌组织中HOXA5的表达下调;UBC9介导了HOXA5抑制肝癌细胞侵袭迁移的作用,这为进一步阐明肝癌发生侵袭转移过程中的分子机制提供一个新的思路,为精准治疗肝癌提供一个可能的靶点.
